Приготовление среды.
В большую стерильную емкость, соблюдая правила стерильности, помещают следующие растворы: Раствор минеральных солей — 600 мл Гомогенизированная яичная масса — 1000 мл Тщательно перемешивают и фильтруют через 4-хслойный стерильный марлевый фильтр. Добавляют 20 мл раствора малахитового зеленого, тщательно перемешивают, избегая образования пены, и в течение не более 15 минут разливают в пробирки приблизительно по 5 мл, следя за тем, чтобы в растворе не сформировался осадок. Свертывание среды. Для свертывания среды используются специальные аппараты-свертыватели типа "АСИС". Пробирки с разлитой в них средой помещают в специальные штативы с подобранным углом наклона для формирования косяка среды. Штативы устанавливают в свертыватель и проводят коагуляцию при 85°С в течение 45 минут. Приготовление питательной среды проводится в условиях соблюдения стерильности, так как свертывание является не стерилизующей, а лишь коагулирующей процедурой. Качество приготовленной яичной среды зависит от соблюдения температурного и временного режимов коагуляции. Обесцвечивание среды, наличие пузырьков или углублений на ее поверхности свидетельствует о нарушении режима свертывания. Повторное свертывание также ухудшает качество среды. Среды с нарушенным режимом свертывания подлежат удалению. Проверка на стерильность. После свертывания каждая вновь приготовленная партия среды подвергается контролю на стерильность. Для этого она помещается в термостат и выдерживается в нем 2 — 3 суток при 37°С. Хранение. Приготовленная партия среды должна иметь дату изготовления и сохраняться в холодильнике при 4°С с тщательно закрытыми пробками для предотвращения высыхания. Срок хранения среды не должен превышать 4 недели. 4.4.2. Среда Финн-11 Среда Финн-П рекомендована в нашей стране как вторая стандартная среда для выделения микобактерий. Она отличается от среды Левенштейна-Йенсена тем, что вместо Z-аспарагина в ней используется глутамат натрия и подбор солей рассчитан таким образом, что конечная кислотность среды (рЯ=6,3-6,8) имеет более низкое значение и большую стабильность по сравнению со средой Левенштейна-Йенсена. Эти свойства обусловливают более высокую эффективность среды при засеве материала, обработанного щелочными детергентами. Рост микобактерий появляется на этой среде на несколько дней раньше, чем на среде Левенштейна-Йенсена, а выделение культур на 6-8% выше.
Реактивы:
Магний сернокислый MgSO4 х 7Н2О Натрий лимоннокислый CgHsO7Nas х 5,5Н2О Квасцы железоаммонийные Fe(NH4)-(SO4)2 х 12 Н2О Калий однозамещенный фосфорнокислый КН2РО4 Аммоний лимоннокислый однозамещенный Натрий глутаминовокислый однозамещенный CsH8NNa04xH20 Глицерин С3Н8О3 Малахитовый зеленый — Cs2H54Oi2N4 Вода дистиллированная Состав среды: Раствор минеральных солей:
Магний сернокислый Натрий лимоннокислый Квасцы железоаммонийные Калий однозамещенный фосфорнокислый Аммоний лимоннокислый однозамещенный Натрий глутаминовокислый однозамещенный Глицерин Вода дистиллированная Вышеперечисленные ингредиенты растворяют в дистиллированной воде в указанной последовательности при слабом подогревании (не доводя до кипения) на водяной бане. Кислотность не корригируют. Стерилизуют в автоклаве 30 минут при 1 атм. (121°С). Срок хранения раствора составляет 3-4 недели при комнатной температуре. Раствор малахитового зеленого: Малахитовый зеленый — 2 г Стерильная дистиллированная вода — 100 мл. Растворить в стерильной дистиллированной воде малахитовый зеленый, поместив раствор в термостат на 1-2 часа. Приготовленный раствор не подлежит длительному хранению и при появлении осадка или при изменении окраски его следует заменить свежим раствором. Стерилизовать при 1 атм. (121°С) 30 мин. Яичная масса. Свежие диетические куриные яйца со сроком хранения не более 7 суток без трещин и дефектов скорлупы тщательно отмывают в теплой проточной воде с помощью ручных щеток и щелочного мыла, затем оставляют на 30 мин в мыльном растворе. Тщательно промывают в проточной воде и погружают в 70% этиловый спирт на 30 мин. Затем в стерильном боксе разбивают яйца стерильным ножом в стерильную посуду, доводя общий объем яичной массы до 1 л (для этого требуется в среднем 20—25 яиц в зависимости от их величины). Тщательно взбивают стерильным венчиком или в стерильном миксере.
|
