Питательные среды

Для посева диагностического материала используют разнообразные питательные среды, среди которых можно выделить 3 основные группы:

— плотные питательные среды на яичной основе;

— плотные или полужидкие питательные среды на агаровой
основе;

— жидкие синтетические и полусинтетические питательные
среды.

Каждая из этих сред имеет положительные и отрицательные особенности.

В связи с этим для повышения результативности культурального метода рекомендуется применять посев диагностического материала одновременно на 2 - 3 питательные среды разного состава.

В России культуральные исследования диагностического материала традиционно осуществляются на плотных яичных средах. Существует большое количество плотных питательных сред, и разные лаборатории используют различные среды: Левенштейна-Йенсена, Петраньяни, Гельберга, Финна, Мордовского (среда "Новая"), Аникина (А-6 и А-9), Попеску и др

В результате многочисленных сравнительных испытаний установлено, что для культуральной диагностики туберкулеза следует использовать как минимум две разные по составу питательные среды. Наиболее широкое распространение получил набор из 2 яичных сред -Левенштейна-Йенсена и Финна—П.

4.4.1. Среда Левенштейна-Йенсена

Среда Левенштейна-Йенсена применяется во всем мире в качестве стандартной среды для первичного выделения возбудителя туберкулеза и определения его лекарственной чувствительности. Эта среда рекомендуется для использования всеми микробиологическими лабораториями противотуберкулезной службы Российской Федерации для получения сравнимых результатов. Это плотная яичная среда, на которой хороший рост микобактерий туберкулеза получают на 15-2 5-й день после посева микроскопически положительного материала. В состав этой питательной среды входит глицерин, который способствует росту М. tuberculosis. Для культивирования М. bovis среду Левенштейна-Йенсена обогащают 0,5% пируватом натрия, исключив из солевого раствора глицерин. С этой целью в состав солевого раствора вместо глицерина добавляют 8,0 г пирувата натрия. Применение этой модификации среды рекомендуется в тех территориях, где возможно распространение М. bovis.

 

Реактивы:

Калий однозамещенный фосфорнокислый

— ТУ-6-09-5324-87; — ТУ-6-09-1770-77; — ГОСТ 4523-77; - импортный реактив; — ГОСТ 6259-75; —ТУ-6-09-1557-77; — ГОСТ 6709-77.

КН₂РО₄

Магний лимоннокислый

Mg₃(C6H₅O₇)₂x 14Н₂О

Магний сернокислый MgSO₄ х 7Н₂О

L- аспарагин C₄H₈N₂O₃ x Н₂О

Глицерин СзН^О;

Малахитовый зеленый C_s2H_S4Oi₂N₄

Вода дистиллированная

Состав среды:

Раствор минеральных солей

Калий однозамещенный фосфорнокислый 2,4 г

Магний сернокислый 0,24 г

Магний лимоннокислый 0,6 г

L- аспарагин 3,6 г

Глицерин 12,0 мл

Вода дистиллированная 600 мл

Вышеперечисленные ингредиенты растворяют в дистиллированной воде в указанной последовательности при слабом подогревании (не доводя до кипения) на водяной бане. Затем стерилизуют в автоклаве 30 минут при 1 атм. (121°С). Срок хранения раствора составляет 3-4 недели при комнатной температуре. Раствор малахитового зеленого:

Малахитовый зеленый — 2 г

Стерильная дистиллированная вода — 100 мл

Растворить в стерильной дистиллированной воде малахитовый

зеленый, поместив раствор в термостат на 1-2 часа. Приготовленный

раствор не подлежит длительному хранению и при появлении осадка

или изменении окраски его следует заменить свежим раствором.

Стерилизовать при 1 атм. 30 мин.

Яичная масса:

Свежие диетические куриные яйца со сроком хранения не более 7 суток без трещин и дефектов скорлупы тщательно отмывают в теплой проточной воде с помощью ручных щеток и щелочного мыла, затем оставляют на 30 мин в мыльном растворе. Тщательно промывают в проточной воде и погружают в 70° этиловый спирт на 30 мин. Затем в стерильном боксе разбивают яйца стерильным ножом в стерильную посуду, доводя общий объем яичной массы до 1 л (для этого требуется в среднем 20—25 яиц в зависимости от их величины). Тщательно взбивают стерильным венчиком или в стерильном миксере.