Студопедия Главная Случайная страница Обратная связь

Разделы: Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

Процедура исследования. - Добавить в пробирку с исследуемой культурой микобактерий 1 — 1,5 мл стерильной дистиллированной воды





- Добавить в пробирку с исследуемой культурой микобактерий
1 — 1,5 мл стерильной дистиллированной воды. При наличии
сливного роста проткнуть поверхность среды в нескольких местах
пипеткой для облегчения доступа раствора к питательной среде;

- поместить пробирку в термостат на 2 — 3 часа в
полугоризонтальном положении с тем, чтобы жидкость покрывала всю
поверхность среды;

- вынуть пробирку из термостата и перевести ее в вертикальное
положение, позволив жидкости стечь на дно в течение 5 — 6 минут;


 

— в чистую стерильную пробирку перенести пипеткой 0,5 — 0,6
мл экстракта;

— индикаторную полоску помеченным карандашом концом, на
который нанесена ПАСК, опустить с помощью пинцета в пробирку с
экстрактом, не допуская смачивания экстрагирующей жидкостью
средней части полоски, на которую был нанесен роданистый калий;

немедленно закрыть пробирку резиновой пробкой;

— оставить при комнатной температуре на 15 — 30 минут;
допустимо осторожно покачивать пробирку, пока вся полоска не
пропитается экстрактом;

— наблюдать за окрашиванием жидкости на дне пробирки на
белом фоне.

При положительном ниациновом тесте экстракт окрашивается в желтый цвет разной интенсивности. Любая окраска индикаторной полоски не принимается во внимание, так как это может происходить вследствие окисления реактивов в верхней части полоски. Для дегазации пробирок после проведения реакции пользуются 10% раствором нашатырного спирта, 10% раствором едкого натра или любым щелочным дезинфицирующим средством.

5.2.2. Тест на наличие нитратредуктазы

При дифференциации микобактерий туберкулеза применяется также реакция восстановления нитратов в нитриты. Реакция восстановления нитратов дает возможность дифференцировать микобактерий человеческого вида, обладающие нитратредуктазой, от микобактерий бычьего и птичьего видов и от некоторых нетуберкулезных микобактерий, у которых этот фермент отсутствует. Из всех микобактерий нитратредуктазная активность наиболее выражена у М. tuberculosis. Это позволяет использовать данный тест в сочетании с ниациновым тестом для дифференциальной диагностики М. tuberculosis и микобактерий других видов.

Для определения способности микобактерий редуцировать нитраты используют 4-х недельные культуры с обильным ростом, выращенные на среде Левенштейна-Йенсена.

Принцип метода заключается в определении активности
нитратредуктазы по количеству восстановленного нитрита из нитрата,
что сопровождается цветной реакцией с

парадиметиламинобензальдегидом.

5.2.2.1. Классический метод

Приготовление реактивов: Раствор 1. Нитрат натрия в фосфатном буфере. 0,01 М раствор нитрата натрия в 0,022 М фосфатном буферном растворе (рН = 7,0) готовится следующим образом:

А. 3,02 г КН2РО4 растворить в 1000 мл дистиллированной воды; Б. 3,16 г Na2HPO4 растворить в 1000 мл дистиллированной воды;


В. 611 мл раствора Б добавить к 389 мл раствора А, хорошо смешать (величина рН раствора должна составлять 7,0).

В 1000 мл полученного буферного раствора (В) растворить 0,85 г NaNO3.

Разлить полученный раствор 1 в емкости по 100 мл. Стерилизовать в автоклаве при 121°С в течение 15 минут. При необходимости этот раствор можно переносить по 2 мл в пробирки с завинчивающимися крышками.

Раствор 2. Раствор соляной кислоты

Концентрированная соляная кислота 10 мл

Дистиллированная вода 10 мл

Медленно влить концентрированную соляную кислоту в дистиллированную воду, чтобы получить разведение 1:1. Никогда не вливайте воду в кислоту!

Хранить полученную смесь в герметически закрытой бутыли из темного стекла в холодильнике.

Раствор 3. Раствор сульфаниламида (0,2%).
Сульфаниламид 0,2 г

Дистиллированная вода 100 мл

Растворить сульфаниламид в дистиллированной воде. Хранить полученную смесь в герметически закрытой бутыли из темного стекла в холодильнике.

Раствор 4. Раствор N-нафтилэтилендиамина (0,1%).
Л/-нафтилэтилендиамин 0,1 г

Дистиллированная вода 100 мл

Растворить нафтилэтилендиамин в дистиллированной воде. Хранить полученную смесь в герметически закрытой бутыли из темного стекла в холодильнике.







Дата добавления: 2015-09-18; просмотров: 428. Нарушение авторских прав; Мы поможем в написании вашей работы!




Вычисление основной дактилоскопической формулы Вычислением основной дактоформулы обычно занимается следователь. Для этого все десять пальцев разбиваются на пять пар...


Расчетные и графические задания Равновесный объем - это объем, определяемый равенством спроса и предложения...


Кардиналистский и ординалистский подходы Кардиналистский (количественный подход) к анализу полезности основан на представлении о возможности измерения различных благ в условных единицах полезности...


Обзор компонентов Multisim Компоненты – это основа любой схемы, это все элементы, из которых она состоит. Multisim оперирует с двумя категориями...

ЛЕКАРСТВЕННЫЕ ФОРМЫ ДЛЯ ИНЪЕКЦИЙ К лекарственным формам для инъекций относятся водные, спиртовые и масляные растворы, суспензии, эмульсии, ново­галеновые препараты, жидкие органопрепараты и жидкие экс­тракты, а также порошки и таблетки для имплантации...

Тема 5. Организационная структура управления гостиницей 1. Виды организационно – управленческих структур. 2. Организационно – управленческая структура современного ТГК...

Методы прогнозирования национальной экономики, их особенности, классификация В настоящее время по оценке специалистов насчитывается свыше 150 различных методов прогнозирования, но на практике, в качестве основных используется около 20 методов...

Способы тактических действий при проведении специальных операций Специальные операции проводятся с применением следующих основных тактических способов действий: охрана...

Искусство подбора персонала. Как оценить человека за час Искусство подбора персонала. Как оценить человека за час...

Этапы творческого процесса в изобразительной деятельности По мнению многих авторов, возникновение творческого начала в детской художественной практике носит такой же поэтапный характер, как и процесс творчества у мастеров искусства...

Studopedia.info - Студопедия - 2014-2025 год . (0.012 сек.) русская версия | украинская версия