Процедура исследования. - Добавить в пробирку с исследуемой культурой микобактерий 1 — 1,5 мл стерильной дистиллированной воды
- Добавить в пробирку с исследуемой культурой микобактерий - поместить пробирку в термостат на 2 — 3 часа в - вынуть пробирку из термостата и перевести ее в вертикальное
— в чистую стерильную пробирку перенести пипеткой 0,5 — 0,6 — индикаторную полоску помеченным карандашом концом, на — немедленно закрыть пробирку резиновой пробкой; — оставить при комнатной температуре на 15 — 30 минут; — наблюдать за окрашиванием жидкости на дне пробирки на При положительном ниациновом тесте экстракт окрашивается в желтый цвет разной интенсивности. Любая окраска индикаторной полоски не принимается во внимание, так как это может происходить вследствие окисления реактивов в верхней части полоски. Для дегазации пробирок после проведения реакции пользуются 10% раствором нашатырного спирта, 10% раствором едкого натра или любым щелочным дезинфицирующим средством. 5.2.2. Тест на наличие нитратредуктазы При дифференциации микобактерий туберкулеза применяется также реакция восстановления нитратов в нитриты. Реакция восстановления нитратов дает возможность дифференцировать микобактерий человеческого вида, обладающие нитратредуктазой, от микобактерий бычьего и птичьего видов и от некоторых нетуберкулезных микобактерий, у которых этот фермент отсутствует. Из всех микобактерий нитратредуктазная активность наиболее выражена у М. tuberculosis. Это позволяет использовать данный тест в сочетании с ниациновым тестом для дифференциальной диагностики М. tuberculosis и микобактерий других видов. Для определения способности микобактерий редуцировать нитраты используют 4-х недельные культуры с обильным ростом, выращенные на среде Левенштейна-Йенсена. Принцип метода заключается в определении активности парадиметиламинобензальдегидом. 5.2.2.1. Классический метод Приготовление реактивов: Раствор 1. Нитрат натрия в фосфатном буфере. 0,01 М раствор нитрата натрия в 0,022 М фосфатном буферном растворе (рН = 7,0) готовится следующим образом: А. 3,02 г КН2РО4 растворить в 1000 мл дистиллированной воды; Б. 3,16 г Na2HPO4 растворить в 1000 мл дистиллированной воды; В. 611 мл раствора Б добавить к 389 мл раствора А, хорошо смешать (величина рН раствора должна составлять 7,0). В 1000 мл полученного буферного раствора (В) растворить 0,85 г NaNO3. Разлить полученный раствор 1 в емкости по 100 мл. Стерилизовать в автоклаве при 121°С в течение 15 минут. При необходимости этот раствор можно переносить по 2 мл в пробирки с завинчивающимися крышками. Раствор 2. Раствор соляной кислоты Концентрированная соляная кислота 10 мл Дистиллированная вода 10 мл Медленно влить концентрированную соляную кислоту в дистиллированную воду, чтобы получить разведение 1:1. Никогда не вливайте воду в кислоту! Хранить полученную смесь в герметически закрытой бутыли из темного стекла в холодильнике. Раствор 3. Раствор сульфаниламида (0,2%). Дистиллированная вода 100 мл Растворить сульфаниламид в дистиллированной воде. Хранить полученную смесь в герметически закрытой бутыли из темного стекла в холодильнике. Раствор 4. Раствор N-нафтилэтилендиамина (0,1%). Дистиллированная вода 100 мл Растворить нафтилэтилендиамин в дистиллированной воде. Хранить полученную смесь в герметически закрытой бутыли из темного стекла в холодильнике.
|