Б И О Т Е Х Н О Л О Г И Я
Часть I
ТЕХНОЛОГИЯ РЕКОМБИНАНТНОЙ ДНК
Учебное пособие
Печатается по решению кафедры зоологии Российского государственного педагогического университета имени А.И.Герцена
Цымбаленко Н.В. Биотехнология.Ч.1. Технология рекомбинантной ДНК:учебное пособие (для студентов биологических специальностей педагогических университетов), 2011 г.
Материал, представленный в данном учебном пособии, позволит обеспечить студентам биологических специальностей педагогических ВУЗов знакомство с современными методами технологии создания и применения рекомбинантных ДНК для фундаментальных и прикладных целей, а также поможет понять основные молекулярные принципы,на которых базируется биотехнология.
Объем и глубина излагаемого в пособии материала определяется учебными курсами по биотехнологии, которые с 2005 года автор пособия читает студентам факультета биологии РГПУ им А.И. Герцена.
Рецензенты:
Атаев Г.Л.,заведующий кафедрой зоологии факультета биологии Российского государственного педагогического университета имени А.И.Герцена, доктор биологических наук, профессор (РГПУ)
Кириллова Н.В., заведующий кафедрой биохимии Санкт-Петербургской химико-фармацевтической академии, доктор биологических наук, профессор
СОДЕРЖАНИЕ
|
| Введение
|
|
|
| Ферменты – инструменты генетической инженерии
|
|
| .
| Эндонуклеазы рестрикции
Номенклатура
Ферментативная активность компонентов системы рестрикции-модификации
Липкие концы
Тупые концы
Классификация эндонуклеаз рестрикции
Эндонуклеазы рестрикции типа II
Физическое картирование ДНК по участкам узнавания эндонуклеаз рестрикции
|
|
|
| Фосфомоноэстеразы
|
|
|
| Полинуклеотидкиназа
|
|
|
| Лигазы
|
|
|
| Полимеразы
|
|
|
| ДНК-полимераза
|
|
|
| Обратная транскриптаза
|
|
|
| Терминальная трансфераза, поли-А - полимераза
|
|
| 2.
| Способы объединения фрагментов ДНК
|
|
|
| Лигирование по одноименным "липким" концам
|
|
|
| Лигирование по одноименным "липким" концам с обработкой щелочной фосфатазой
|
|
|
| Лигирование по "тупым" концам
|
|
|
| Лигирование фрагментов с разноименными липкими, или липким и тупым концами
|
|
| 3.
| Генетические векторы для клонирования ДНК
|
|
|
| Вставки ДНК
|
|
|
| Векторы для клонирования ДНК
|
|
|
| Плазмидные векторы
Плазмидный вектор pBR322
Введение рекомбинантной ДНК в клетки бактерий и отбор трансформантов
Другие плазмидные векторы
|
|
|
| Векторы на основе бактериофага λ
|
|
|
| Гибридные векторы
|
|
|
| Векторные системы для клонирования очень крупных фрагментов ДНК
|
|
|
| BAC-система
|
|
|
| YAC-векторы
|
|
| 4.
| Вспомогательные методы технологии рекомбинантной ДНК
|
|
|
| Химический синтез ДНК
|
|
|
| Секвенирование ДНК
|
|
|
| Молекулярная гибридизация
Гибридизация нуклиновых кислот в растворе
Гибридизация нуклиновых кислот на твердых подложках
Гибридизация на чипах
|
|
|
| Полимеразная цепная реакция
Метод ПЦР
ПЦР в реальном времени
Обратная транскрипция, сопряженная с полимеразной цепной реакцией (ОТ-ПЦР)
|
|
|
| Направленный мутагенез
|
|
| 5.
| Библиотеки генов
|
|
|
| Создание геномных библиотек.
Скрининг с помощью ДНК-ДНК-гибридизации.
Иммунологический скрининг.
Скрининг по активности белка
Клонирование структурных генов эукариот.
|
|
| 6.
| Системы экспрессии чужеродных генов
|
|
|
| Экспрессия генов в клетках прокариот в составе плазмид
|
|
|
| Экспрессия генов, интегрированных в хромосомную ДНК прокариот
|
|
|
| Экспрессия рекомбинантных генов в эукариотических системах
|
|
|
| Экспрессирующие векторы для работы с клетками млекопитающих (ЭВМ)
|
|
| 7.
| Химерные белки
|
|
|
| Репортерные гены
|
|
|
| Другие области применения “химерных белков”
|
|
|
| Повышение эффективности секреции
|
|
| 8.
| Словарь терминов
|
|
| 9.
| Список используемой литературы
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
