Студопедия Главная Случайная страница Обратная связь

Разделы: Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

Терминальная трансфераза, поли-А - полимераза




Терминальная трансфераза (терминальная дезоксинуклеотидил трансфераза) катализирует присоединение мононуклеотидов к 3'-OH концу ДНК-затравки, в процессе присоединения мононуклеотида отщепляется пирофосфат. Одноцепочечная ДНК служит наиболее эффективной затравкой.

Терминальная трансфераза является в определенном смысле полимеразой, поскольку она катализирует синтез полидезоксирибонуклеотидов из дезоксирибонуклеозидтрифосфатов с высвобождением неорганического пирофосфата. Подобно ДНК-полимеразам она требует присутствия праймера со свободной 3’-гидроксильной группой. Однако, ей не нужна матрица, она вообще не способна копировать что-либо вообще и продуктом катализируемой ею реакции является одноцепочечный полимер (рис. 12).

 

 

Рис. 12. Реакция, катализируемая терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазой.

N- любой из четырех дезоксинуклеотидов: A,T,G или С

 

Терминальная трансфераза в присутствии в качестве кофактора ионов Mg2+ использует в качестве затравки одноцепочечную ДНК с З'-ОН концом или двухцепочечную ДНК с выступающим одноцепочечным З'-ОН концом. Если в качестве кофактора используются ионы Co2+, этот фермент может катализировать присоединение дезоксинуклеотидов к 3’-ОН концу двухцепочечной ДНК с тупыми концами.

При введении в реакцию, направляемую терминальной трансферазой, лишь одного типа дезоксинуклеотидов образуются молекулы ДНК, имеющие гомополимерные 3'-концы. Таким же образом можно достроить другим молекулам ДНК гомополимерные 3'-концы, комплементарные первым. Смешение полученных препаратов ДНК при определенных условиях может приводить к формированию гибридных молекул ДНК. Именно с помощью концевой дезоксинуклеотидилтрансферазы в 1972 г. был выполнен первый эксперимент по рекомбинации молекул ДНК in vitro.

С помощью дезоксинуклеотидилтрансферазы к молекулс ДНК, не имеющим липких концов, можно присоединять такие концы.

Подобно терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазе поли(А)-полимераза присоединяет нуклеотидные остатки к 3’-ОН концу одноцепочечных молекул без матрицы. Однако поли(А)-полимераза проявляет специфичность, осуществляя независимое от матрицы последовательное присоединение остатков аденилата к 3'-OH-концам молекул РНК в соответствии со следующей реакцией:

РНК + nATP -> РНК(А)n + nPPi.

Поли(А) – полимераза выполняет высокоспециализированную и важную функцию в экспериментах с рекомбинантными ДНК: подготовка РНК к копированию с них комплементарной ДНК. Кроме того, ее применяют для введения радиоактивной метки в 3’-конец РНК.

 







Дата добавления: 2015-09-04; просмотров: 404. Нарушение авторских прав


Рекомендуемые страницы:


Studopedia.info - Студопедия - 2014-2020 год . (0.001 сек.) русская версия | украинская версия