Студопедия Главная Случайная страница Обратная связь

Разделы: Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

Лигирование по одноименным "липким" концам




Этот метод является самым распространенным и популярным. Впервые этим способом гибридная ДНК была получена С. Коэном с сотрудниками в 1973 году. Одноцепочечные концы, получаемые при гидролизе ДНК эндонуклеазами рестрикции, например EcoRI, образуют водородные связи с комплементарными им последовательностями другого конца этого же фрагмента или другого фрагмента ДНК. Таким образом, любые два фрагмента (независимо от их происхождения), образовавшиеся под действием одной и той же эндонуклеазы рестрикции, могут слипаться за счет образования водородных связей между комплементарными основаниями нуклеотидов однонитевых концевых участков (рис. 13).

Однако, образование водородных связей между комплементарными основаниями одноцепочечных участков ДНК не восстанавливает полной целостности двойной спирали, поскольку остаются два разрыва в сахарнофосфатном остове полинуклеотидной цепи. Для восстановления фосфодиэфирных связей в полинуклеотидных цепях ДНК, т.е. для сшивания, или лигирования нитей, используют фермент ДНК-лигазу.

 

Рис. 13. Схема объединения фрагментов ДНК по липким и тупым концам (рестрикционно-лигазный метод).

 

Этот фермент в живой клетке выполняет ту же функцию - сшивание фрагментов ДНК, синтезирующихся при репликации.

 







Дата добавления: 2015-09-04; просмотров: 428. Нарушение авторских прав


Рекомендуемые страницы:


Studopedia.info - Студопедия - 2014-2020 год . (0.001 сек.) русская версия | украинская версия