ИдентификациЯ аминокислот методом распределительной хроматографии
ИдентификациЯ аминокислот методом распределительной хроматографии
Распределительная или жидко-жидкостная хроматография используется для разделения в частности высокополярных соединений, к которым относятся, например, аминокислоты. Разделение в этом методе основано на различном коэффициенте распределения компонентов образца между стационарной и подвижной жидкими фазами. Процессы распределения между жидкими фазами по сравнению с адсорбционными являются более чувствительными к самым незначительным структурным изменениям; поэтому этот метод успешно используется для разделения соединений одного гомологического ряда. В данной работе разделение смеси аминокислот осуществляется за счет различного распределения (растворимости) между двумя жидкими фазами: стационарной фазой - водой и подвижной фазой - н-бутанол, уксусная кислота, вода в соотношении 4:1:1. Носителем стационарной фазы является силикагель (готовые пластинки ² Silufol²). Детекция аминокислот на пластинке производится с помощью нингидрина, который дает цветную реакцию с a-аминокислотами. Для разделения используются водные растворы аминокислот (небольшое количество аминокислот растворяют в 0,5 - 1мл дистиллированной воды в микростаканчике). На пластинку ²Silufol², обработанную паром в точки тонким капилляром наносят приготовленные растворы исследуемого образца и свидетелей (стандарты аминокислот). Диаметр пятна не должен превышать 2мм. Точки нанесения должны отстоять от краев пластинки не менее чем на 1см. После нанесения пробы пластинки помещают в камеру, в которую за 10 - 15мин до начала хроматографирования следует налить примерно 24 мл смеси н-бутанол - уксусная кислота - вода в сотношении 4:1:1. Для достижения лучшего разделения аминокислот в данной работе используется двухкратное хроматографирование. После того, как фронт подвижной фазы (системы растворителей) поднимется на 10 -12 см, пластинка вынимается из камеры, подсушивается в вытяжном шкафу и хроматографируется повторно в тех же условиях. Пластинка, вынутая из камеры, вновь высушивается в вытяжном шкафу и опрыскивается 0,2% раствором нингидрина (из пульверизатора). После опрыскивания пластинка помещается в сушильный шкаф при 110-120°С. Аминокислоты детектируются в виде розовато-лиловых пятен. Совпадение значений Rf исследуемого образца и свидетеля говорит об их идентичности. Зарисуйте расположение пятен аминокислот и запишите величины Rf аминокислот. Какие виды хроматографии используются при выполнении данной работы? Нужные слова подчеркните.
а) жидко-жидкостная, твердо-жидкостная, газожидкостная. б) адсорбционная, ионообменная, ситовая (гель-хроматография). в) колоночная, в тонком слое, бумажная.
Лабораторная работа № 2:
|
