ОПРЕДЕЛЕНИЕ НЕОРГАНИЧЕСКОГО ФОСФОРА В КРОВИ

Принцип метода:

Неорганический фосфат гидролизуется в кислой среде до фосфорной кислоты, которая образует окрашенный комплекс с молибдат-ванадатом аммония. Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации неорганического фосфата.

Ход работы:

1. Построение калибровочной кривой

а. В опытные пробирки вносят стандартный раствор фосфора с концентрацией 800 мкг/мл в соответствии с таблицей.

б. Во все пробы добавляют объем дистиллированной воды согласно таблице 1.

 

Таблица.

№ пробы	Объем стандартного раствора фосфора, мл	Объем дистиллированной воды, мл	Концентрация фосфора, мкг/мл	E среднее
	0.05	2.45
	0.1	2.4
	0.15	2.35
	0.2	2.3
	0.25	2.25
	0.3	2.2
	0.35	2.15
кровь

в. Затем в каждую пробирку добавляют по 2,5 мл раствора молибдат-ванадата аммония. Содержимое пробирок тщательно перемешивают.

г. В контрольную пробу добавляют 2,5 мл раствора молибдат-ванадата аммония и 7.5 мл дистиллированной воды. Раствор перемешивают.

д. Полученные растворы оставляют при комнатной температуре на 10 минут. Пробы колориметрируют при длине волны 440 нм в кюветах с толщиной оптического слоя 10 мм против контрольной пробы.

е. Полученные значения оптических плотностей растворов вносят в таблицу.

ж. Строят калибровочную кривую, откладывая по оси абсцисс концентрацию фосфора, а по оси ординат оптические плотности растворов.

з.

2. Определение фосфора в крови

В центрифужную пробирку вносят 3 мл дистиллированной воды, 1 мл крови и 1 мл 20 %-го раствора трихлоруксусной кислоты; смесь перемешивают и оставляют на 10 минут (для осаждения белков). Пробы центрифугируют 5 минут при 1500 об/мин и 1 мл надосадочной жидкости (супернатанта) отбирают в биохимическую пробирку. Затем добавляют 6.5 мл дистиллированной воды и 2,5 мл раствора молибдат-ванадата аммония. Содержимое пробирки перемешивают и оставляют на 10 минут при комнатной температуре.

Пробу колориметрируют при длине волны 440 нм в кюветах с толщиной оптического слоя 10 мм против контрольной пробы. Значение оптической плотности раствора вносят в таблицу в строчку «кровь».

По калибровочной кривой находят концентрацию фосфора в пробе крови (А), а затем проводят расчеты по формуле:

 

где А – количество фосфора в 1 мл крови, определенное по калибровочной кривой;

А 5 - количество фосфора в 1 мл крови;

100 –коэффициент пересчёта фосфора на 100 мл крови;1000 – коэффициент для перевода мкг в мг.

 

В Ы В О Д Ы:

 

Вопросы к коллоквиумам и примеры вариантов заданий