Определение содержания лактозы методом Бертрана
Цель работы: определение содержания лактозы методом Бертрана.
Оборудование, реактивы, материалы: аналитические и технические весы, центрифуга, электроплита, термостат, водяная баня, термометр, фарфоровая ступка с пестиком, кварцевый песок, колба Бунзена с асбестовым фильтром Шотта, насос Комовского, мерные колбы вместимостью 50 и 100 см3, колбы Эрленмейера вместимостью 250 см3, пипетки вместимостью 2, 5, 10 см3, стеклянные воронки с бумажными фильтрами, мерные цилиндры вместимостью 50 и 100 см3, бюретка; раствор гидроксида натрия с концентрацией 0, 1 моль/дм3, раствор железоаммонийных квасцов (120 г железоаммонийных квасцов растворяют в 1 дм3 дистиллированной воды и добавляют 100 см3 концентрированной серной кислоты или 50 г сульфата железа (III) растворяют в 800 см3 дистиллированной воды и добавляют 200 см3 концентрированной серной кислоты), раствор Фелинга I (40 г сульфата меди вносят в мерную колбу вместимостью 1 дм3, растворяют в 600 см3 горячей дистиллированной воды, охлаждают, доводят объем до метки, перемешивают и фильтруют), раствор Фелинга II (200 г тартрата калия-натрия и 150 г гидроксида натрия помещают в фарфоровый стакан, наливают в него 500 см3 дистиллированной воды и перемешивают стеклянной палочкой до полного растворения. Раствор охлаждают, переводят в мерную колбу на 1 дм3, доводят до метки дистиллированной водой, перемешивают и фильтруют через стеклянный фильтр), раствор перманганата калия концентрацией 0, 1 моль/дм3. Раствор сахарозы с массовой долей 5 %; раствор спиртоосажденного препарата фермента (1–2 г препарата помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3, добавляют дистиллированной воды до метки, термостатируют при 30-35 °С до полного растворения). Теоретические сведения
Содержание углеводов в организме животного довольно постоянно. По величине отклонения содержания их от нормы можно судить о патологическом состоянии организма, автолитических изменениях в тканях после убоя животного. Поэтому в практике пользуются количественными и качественными реакциями. Для количественного определения лактозы в молоке применяют метод Бертрана. Сущность метода состоит в том, что при кипячении с жидкостью Фелинга лактоза окисляется в лактобионовую кислоту, восстанавливая оксид меди (II) в оксид меди (I) (см. лабораторную работу № 21). Зная количество израсходованного на титрование КMnО4, вычисляют количество молочного сахара.
 О Н
  Н-С-ОН Н-С-ОН
СН2ОН СН2ОН
 О Н
Н-С-ОН Н-С-ОН
    НО-С-Н НО-С-Н
Ход работы
В мерную колбу вместимостью 500 см3 отбирают 25 см3 молока, разбавляют дистиллированной водой до 400 см3, прибавляют для осаждения белков 20 см3 CuSO4 и 6, 5-7, 5 см3 1 моль/дм3 раствора NaOH. Жидкость перемешивают после добавления каждого компонента, доводят до метки водой и оставляют на 30 мин. Отстоявшуюся жидкость фильтруют в сухую колбу через складчатый бумажный фильтр. В отдельную колбу отмеривают 100 см3 прозрачного фильтрата и дальнейшее определение ведут по Бертрану. По количеству израсходованного раствора КмnО4, титр которого известен (10, 541 мг меди), вычисляют количество молочного сахара во взятой массе навески. Затем по массе выделившейся меди находят количество молочного сахара, содержащегося в 5 г молока (таблица).
Пример расчета. На титрование приготовленного фильтрата молока израсходовано 28 см3 KMnO4, следовательно, меди выделилось 28 × 10, 541 = 296, 15 мг. По таблице находим, что это соответствует 220, 3 мг молочного сахара, тогда в 100 г молока его будет
Контрольные вопросы и задания
1. Приведите структурную формулу лактозы. В чем суть метода количественного определения лактозы методом Бертрана? 2. Входе протекания какой реакции образуется лактобионовая кислота? Напишите ее структурную формулу. 3. Назовите сахара которые можно определить с помощью метода Бертрана. Приведите их структурные формулы.
|
С С
Н- С НО-С-Н + Cu(OH)2
Н- С-ОН Н-С
Медь, мг
= 4, 40 мг.
