Студопедия Главная Случайная страница Обратная связь

Разделы: Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

Практическая работа №2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ ГЕМОГЛОБИНА В КРОВИ С ПОМОЩЬЮ ФОТОЭЛЕКТРОКОЛОРИМЕРА (ФЭК)




Ход работы. Определение гемоглобина в крови традиционно проводится на основе измерения окра­шенного железопорфиринового комплекса. При этом используются разные фотометричес­кие методы: цианметгемоглобиновый метод Драбкина, аммиачный метод и другие. Принцип этих методов заключается в подготовке из цельной крови с помощью трансфор­мирующих растворов биопроб с последующим их фотометрированием.

Гемиглобинцианидный метод (метод Драбкина). В этом методе Fe+2 гемоглобина окисляется до Fe+3метгемоглобина, который затем переводится в стабильный цианметгемоглобин (CNmetHb). Абсорбция CNmetHb измеряется при 540 нм, при которой имеется максимум абсорбции. Этот метод характеризуется высокой точностью, простотой исполнения, дешевизной и возможностью выполнения на гема­тологических анализаторах. Для гемиглобинцианида фактор пересчета коэффициента оптической плотности в концентрацию гемоглобина является известной величиной и равен 367.7(Х=540 нм). Расчет проводится по следующей формуле:

Нв(г/л) = 367,7 х А 540нм

 

где A540нм - абсорбция раствора гемоглобина при длине волны 540 нм.

 

Ход определения. В пробирку с 5 мл трансформирую­щего раствора добавляют 20 мкл крови (капилляр Сали, разведение 1:251). Содержимое пробирки тщательно перемешивают и оставляют на 10 мин. Измерения проводят на спектро­фотометре при длине волны 540 нм или на фотоэлектроколориметре при длине волны 520-560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с длиной оптического пути 10 мм против холостой пробы (трансформирующий раствор.).

При использовании спектрофотометра с точной величиной длины волны (540 нм), расчет проводят по указанной выше формуле. При использовании ФЭК и зеленого светофильтра расчёт содержания гемоглобина производят по специальному калибровочному графику, который строится отдельно для каждого фотометра.

Аммиачный метод (модифицированный метод Дервиза-Воробьева). Сущность ме­тода заключается в том, что все разновидности гемоглобина не переводятся в единую форму, а выполняется разведение пробы крови (различных производных гемоглобина) в 0,04% растворе аммиака. Для модифицированного метода Дервиза-Воробьева оптимальной (рабочей) полосой пропускания является точка 523 нм, при которой сводятся к минимуму ошибки измерения. В данной точке два производных гемоглобина - оксигемоглобин и метгемоглобин имеют одинаковое поглощение, поэтому результат фотометрирования не зависит от относительного содержания этих производных в растворе. Перед работой строится калибровочная кривая, по которой после фотометрирования расчитывают концентрацию Нв.

Этот метод реализован в гемоглобиномет­ре "МиниГЕМ-523" , имеющем узкополос­ный светофильтр с максимумом пропускания на длине волны 523 нм. Методическая точность опре­деления гемоглобина на гемоглобинометрах "Ми-ниГЕМ-523"(предельно допустимое значение коэф­фициента обшей аналитической вариации) не пре­вышает 1,5%, если концентрация карбоксигемоглобина в крови не превышает 10%.

 







Дата добавления: 2014-11-10; просмотров: 1770. Нарушение авторских прав


Рекомендуемые страницы:


Studopedia.info - Студопедия - 2014-2020 год . (0.007 сек.) русская версия | украинская версия