Опыт № 1. Определение количества эритроцитов в камере Горяева

Цель опыта: научиться определять количество эритроцитов простейшим методом подсчета клеток в специальной камере

Счетная камера Горяева представляет собой толстое предметное стекло, в средней части которого имеется 4 желобка. Между ними образуются 3 узкие пластинки. Средняя пластинка ниже боковых на 0, 1 мм и разделена пополам поперечным желобком. По обе стороны среднего желобка расположены сетки. Т.к. высота боковых пластинок на 0, 1 мм больше средней, то если к ним притереть специальное покровное стекло, над сеткой образуется камера глубиной 0, 1 мм.

Если камеру поместить под микроскоп и рассмотреть под малым увеличением, то можно увидеть, что сетка Горяева состоит из 225 больших квадратов (15 по вертикали и 15 по горизонтали). Каждый 3 квадрат разделен дополнительно поперечными и продольными линиями на 16 маленьких квадратиков. Сторона маленького квадратика равна 1\20 мм, а площадь 1\ 400 кв. мм, объем малого квадратика равен 1\4000 куб.мм.

Для взятия определенного количества крови и смешивания ее с разводящим раствором используют специальный смеситель – меланжер. Меланжер представляет собой стеклянную пипетку с ампулообразным расширением. В ампуле находится красная бусинка для лучшего размешивания крови. На капиллярной части меланжера нанесены 2 метки: 0, 5 и 1; третья метка стоит за ампулообразным расширением –101. Эта метка указывает во сколько раз объем ампулы больше объема капилляра (разведение крови).

Ход работы. Перед началом работы протирают покровное стекло, накладывают его на счетную камеру и несколько раз двигают вверх и вниз, плотно прижимая его до появления ньютоновских колец. В небольшую емкость отливают раствор для разведения крови-3, 5 % раствор хлористого натрия.

Моют руки, обрабатывают палец спиртом и делают прокол одноразовым скарификатором, или скарификатором, прожженным над пламенем спиртовки докрасна. Первую каплю крови вытирают сухой ваткой и тогда следующая капля на сухой обезжиренной поверхности не будет растекаться. В смеситель набирают кровь сплошным столбиком до метки 0, 5, а затем до метки 101 разводят 3, 5 % раствором NaCl (получают разведение в 200 раз). В гипертоническом растворе NaCl эритроциты теряют воду, сморщиваются и будут лучше видны. Концы заполненного меланжера зажимают 1 и 3 пальцами и в течение 1 минуты встряхивают. После тщательного перемешивания крови, несколько капель ее из меланжера выпускают на вату (должна появиться розовая капля) и затем заполняют счетную камеру, прикасаясь концом меланжера к краю покровного стекла.

Считать эритроциты удобней при большом увеличении. Подсчет ведут в 5 больших квадратах, разделенных на 16 маленьких, расположенных по диагонали сетки. Чтобы дважды не сосчитать эритроциты, лежащие на границе между малыми квадратами, руководствуются правилом Егорова: относящимися к данному квадратику считаются эритроциты, лежащие как внутри квадратика, так и на его левой и верхней границе. Эритроциты, лежащие на правой и нижней границе, в данном квадратике не подсчитываются. Количество эритроцитов вычисляют по формуле

А. 4000.200

Х = ----------------------

где Х - искомое число, А – число эритроцитов в 5 больших квадратах или в 80 маленьких, 4000 – количество малых квадратиков в 1 куб. мм, 200 –разведение крови. Х – количество эритроцитов в 1 мкл крови.