ИЗМЕНЕНИЯ ЛЕЙКОГРАММЫЦель занятия. Научиться дифференцировать форменные элементы крови по окрашенным мазкам, выводить лейкограмму. Объекты исследования и оборудование. Окрашенные мазки крови животных разных видов. Микроскопы, препаратоводители, 11-клавишные счетчики, стеклянные палочки, иммерсионное масло, бензин, вата. Исследование окрашенных мазков крови. Окрашенные мазки крови исследуют под микроскопом, используя при этом объектив х90 и иммерсионное масло. Последнее после работы удаляют с мазка сухой ваткой, чтобы сохранить препарат. В окрашенных мазках крови определяют размер, форму, характер окраски клеток и их структурных элементов — ядра, цитоплазмы и включений; соотношение между форменными элементами различных видов. Эритроциты. При оценке эритроцитов обращают внимание на их размер, форму, окраску и клеточные включения. Эритроциты млекопитающих в мазках крови округлой формы (у верблюдов и лам овальной), у птиц и рыб — овальной формы и содержат ядро. Эритроциты окрашиваются кислыми красителями в розовый цвет {ацидофилъны), причем центральная часть оказывается более бледной, так как центр эритроцита вогнут. Такое окрашивание — более интенсивное по периферии и бледное в центре — называют ортохромазией, а эритроциты — ортохромными клетками. Диаметр эритроцитов составляет (1 ■ Ю-3 мм): у крупного рогатого скота 4, 4...7, 7; овец 3, 0...5, 6; коз 2, 1...4, 9; лошадей 4, 5...7, 5; свиней 4, 0...9, 0; собак 4, 2...10, 0; кошек 5, 0...6, 2; кур 9, 3х5, 6...12, 2х7, 2; рыб 9, 8 х14, 0...10, 2х 16, 8. Тромбоциты. В мазках крови тромбоциты, или кровяные пластинки, овальной, округлой или угловатой формы. Периферическая, гомогенная их часть — гиаломер — окрашивается в голубой цвет, а центральная, состоящая из зернышек, — грануломер — в фиолетовый или в красно-фиолетовый. Чаще тромбоциты в мазках лежат группами, образуя конгломераты из 5...6 пластинок и более, что указывает на их хорошую агглютинабельность. Диаметр тромбоцитов 1...4мкм. Лейкоциты. В зависимости от свойств цитоплазмы и характера зернистости лейкоциты подразделяют на гранулоциты, или зернистые (базофилы, эозинофилы и нейтрофилы), и агрануло-циты, или незернистые (лимфоциты и моноциты) (см. цветную вклейку). Базофилы (Б) — круглой или овальной формы клетки диаметром 11... 17 • Ю-3 мм. У зрелых форм ядро полиморфное, плохо заметное, с неясными очертаниями, окрашено в фиолетовый цвет или слабо-фиолетовый с бордовым оттенком. Цитоплазма бледно-розовая или бледно-фиолетовая (что обусловлено растворением гранул в процессе приготовления мазка). Крупные гранулы округлые или расплывчатые, окрашены в темно-фиолетовый, темно-синий или черный цвет, нередко разрушены — на их месте образуются вакуоли. Эозинофилы (Э) — крупные круглой формы клетки диаметром 9...22- Ю-3 мм. Ядро окрашено в фиолетовый цвет. Цитоплазма нежно-голубая с розово-красной или ярко-красной зернистостью (гранулы круглые или слегка овальные). Характер ядра зависит от степени зрелости клетки: у зрелых форм ядро сегментировано, у молодых — округлое. У лошадей, крупного рогатого скота и свиней ядро чаще состоит из двух сегментов, а у овец, коз и собак — из трех. Наиболее крупные гранулы встречаются в цитоплазме эозинофилов у лошадей (до 3 • Ю-3 мм), собак и кроликов (до 1, 5 • Ю-3 мм); у кошек гранулы расположены очень густо, нередко они палочковидной формы и неодинаковых размеров. При растворении гранул на их месте образуются вакуоли, в раздавленных клетках гранулы лежат свободно, «рассыпавшись». Нейтрофилы (Н) — клетки округлой формы, размером от 9, 5 до 14, 5 • 10~3 мм. В зависимости от формы и степени окраски ядра различают миелоциты, юные (метамиелоциты), пал очко-ядерные и сегментоядерные нейтрофилы. Миелоциты (М) — наиболее молодые клетки с неравномерно окрашенным в фиолетовый цвет массивным круглым или овальным ядром, расположенным чаще эксцентрично. Для ядерного хроматина характерно чередование темных и светлых участков. Цитоплазма клеток розового или светло-синего цвета, с мелкой нежной розовой зернистостью. В крови здоровых животных миелоциты не встречаются. Юные (Ю) нейтрофилы содержат окрашенное в фиолетовый цвет ядро: широкое с центральным вдавлениеМ (бобовидной формы) или немного вытянутое (подковообразное). Светлые участки хроматина сменяются более темными. Цитоплазма розового Цвета, иногда плохо прокрашена, с мелкой, нежной розовой іернистостыо. В периферической крови взрослых животных юные нейтрофилы не всегда удается обнаружить.
Сегментоядерные (Q нейтрофилы отличаются от палочкоядер-ных лишь характером ядра, которое состоит из 2...5 сегментов, соединенных тонкими, иногда едва заметными перемычками. Ядро окрашивается неравномерно в темно-фиолетовый цвет. Лимфоциты (Л) по размеру подразделяют на малые (6...9 • 10~3 мм), средние (10... 14 • 10-Змм) и большие (14 • 10~3 мм и более). Доминирующий компонент лимфоцита — ядро округлой или слегка овальной формы, интенсивно окрашенное в темно-синий цвет. Характер хроматина облаковидный, т. е. более темные участки переходят без резкой границы в более светлые. Цитоплазма светло-синяя, обычно с перинуклеарной зоной (просветление вокруг ядра), иногда в ней выявляют азурофильную зернистость. Больше всего в периферической крови обнаруживают малых лимфоцитов (до 95 %), у которых цитоплазма расположена в виде узкого ободка, или «серпа», вокруг темноокрашенного ядра. Моноциты (М) — это крупные клетки диаметром 12...24 ■ Ю-3 мм, округлой или нередко неправильной формы. Ядро характеризуется разнообразием формы: может быть бобовидным, округлым, многолопастным, подковообразным; окрашивается неравномерно в слабо-фиолетовый цвет с темно-фиолетовыми пятнами, так как хроматин ядра рыхлый, распределен неравномерно, как бы образуя ячейки разных размеров и формы. Цитоплазма моноцитов серо-голубого, серо-синеватого цвета со светлым фиолетовым оттенком, вблизи от ядра содержит мелкую пылевидную зернистость. Особенности клеток крови птиц. У всех птиц в отличие от млекопитающих эритроциты овальной (эллипсоидной) формы, по размеру больше лейкоцитов, содержат ядро. Тромбоциты веретенообразной формы и тоже содержат ядро. Среди лейкоцитов выделяют псевдоэозинофилы, которые соответствуют ней-трофилам млекопитающих. Цитоплазма псевдоэозинофилов содержит крупную красного цвета грануляцию в виде зерен или палочек; ядро окрашено в сине-фиолетовый цвет. У истинных эозинофилов гранулы округлой формы и неодинаковые по размерам, розового цвета; ядро состоит из 2...5 сегментов, окрашивается в темно-сине-фиолетовый цвет более интенсивно, чем у псевдоэозинофилов.
Форменные элементы крови (схема) кур: /-базофил; 2, 3 - эозинофилы; 4... 6 -псевдоэозинофилы; 7-моноцит; 8...10 -лимфоциты; // - пролимфоцит; 12 -тромбоциты; 13- полихроматофильныйэритробласт; 14 - разрушенная клетка («тень»); 15 — ортохромный эритроцит
Выведение лейкограммы (лейкоцитарной формулы). Лейкограмма представляет собой процентное соотношение между отдельными видами лейкоцитов в крови.
Методы дифференциального подсчета лейкоцитов. Лейкограмму выводят по окрашенным мазкам в иммерсионной системе путем дифференциального подсчета 100 (лучше 200) лейкоцитов одним из приводимых далее методов (рис. 7.11).
Четырехпольный метод (по Шиллингу): с каждой стороны мазка в начале и в конце его (т. е. на 4 исследуемых участках) определяют по 25 лейкоцитов (или по 50, если считают 200 клеток). При этом от края мазка углубляются на 3...4 поля зрения, затем продвигаются на 2...3 поля вдоль мазка и возвращаются к его краю. Каждый найденный лейкоцит регистрируют на 11-клавишном счетчике. Трехпольный метод (по Филиппченко): клетки подсчитывают на трех участках, расположенных поперек мазка (от одного края до другого). В начале мазка подсчитывают 35 (или 70) лейкоцитов, в середине 30 (или 60) и в конце мазка 35 (или 70) клеток. Однопольный метод (по Мухину): подсчитывают 100 лейкоцитов в средней части мазка, проходя поперек его от одного края до другого и обратно. Ступенчатый метод: подсчет клеток начинают от одного края и ведут по зигзагообразной линии к концу мазка. Выводить лейкограмму этим способом рекомендуют у крупного рогатого скота при диагностике лейкозов. При записи результатов отдельные виды лейкоцитов располагают в такой последовательности: базофилы (Б), эозино-филы (Э), нейтрофилы — миелоциты (М), юные (Ю), палоч-коядерные (П), сегментоядерные (С), лимфоциты (Л), моноциты (М). Лейкограмма крови здоровых животных представлена в таблице 7.3. Для дифференциального подсчета клеток «белой» крови можно использовать такие приборы, как «Техникой», Hemalog D (H-D), «Культер» модель Diff-3. 14 Васильев М. Ф. и др.
|
Палочкоядерные (Л) нейтрофилы характеризуются трансформацией ядра в колбасовидную или палочковидную форму. Ядро неравномерно окрашено в темно-фиолетовый цвет; приблизительно одного диаметра по всей длине, но может быть изогнуто в виде дужки, полумесяца, латинской буквы S, на концах булавовидно вздуто; в отдельных местах на ядре заметны небольшие перехваты-мостики шириной не менее 1/2 основной части ядра. Цитоплазма бледно-розового цвета, с азурофильной зернистостью, содержит большое количество мелких (часто плохо видных), равномерно расположенных гранул.
