Студопедия Главная Случайная страница Обратная связь

Разделы: Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

А н я т и е 29. ПОДСЧЕТ ЭРИТРОЦИТОВ, ЛЕЙКОЦИТОВ И ТРОМБОЦИТОВ КРОВИ




Цель работы.Освоить методику подсчета эритроцитов, лейкоцитов и тромбо­цитов.

Объекты исследования и оборудование.Кровь с антикоагулянтом, вата.

Микроскопы, счетные камеры Горяева, шлифованные покровные стекла, ме­ланжеры для эритроцитов и лейкоцитов, лабораторные пробирки с пробками, градуированные пипетки на 1 и 5л, пипетки от гемометра Сали.

0,85%-й раствор хлорида натрия, жидкость Тюрка, раствор трилона Б (три-лон Б — 50 г, 35...40%-й раствор формальдегида — 50 мл, дистиллированная вода — 450 мл), 2%-й раствор сапонина, 4%-й раствор гипсофилина.

Количество форменных элементов крови определяют с помо­щью счетных камер либо электронных счетчиков частиц. Эритро­циты можно также подсчитать фотоэлектроколориметрическим методом.

Определение количества форменных элементов в счетной камере. IІрименяют различные счетные камеры — Горяева, Тома—Цейса, Ьюркера, Тюрка, Предтеченского, Цапперт, Фукса—Розенталя, 'Іпьцхольца, Неубауера и др. В нашей стране чаще пользуются счетной камерой Горяева (рис. 7.5), которая представляет собой толстое предметное стекло с четырьмя поперечными желобками, между которыми расположены три полосы. Средняя полоса на 0,1 мм ниже боковых и разделена продольным желобком на две


 




Рис. 7.5. Оборудование для подсчета форменных элементов крови:

А — счетная камера Горяева: / — вид сверху; 2 — вид сбоку; 3 — сетка Горяева (а — малый и б—большой квадраты); Б — смесители (меланжеры): 1 — эритроцитарный; 2—лейкоцитарный

равные половины, на каждой из которых выгравирована сетка Го­ряева. Когда на поперечные полосы кладут шлифованное покров­ное стекло и притирают его до образования интерференционных цветных кругов («кольца Ньютона»), над средней полосой остает­ся щелевидное пространство (камера) высотой 0,1 мм.

Площадь камеры 9 мм2 (3x3 мм); сетка Горяева состоит из 225 больших квадратов, 25 из них разделены на 16 малень­ких квадратиков. Площадь маленького квадратика составляет 1/400 мм2 (1/20 х 1,20 мм), а объем камеры над ними 1/4000 мкл (1/400 мм2 х 1,10 мм).

Подсчет эритроцитов. Чтобы подсчитать клетки, кровь раз­водят жидкостью — разбавителем. Используют эритроцитарный меланжер (смеситель) или чаще пробирку (пробирочный метод по Н. М. Николаеву, 1954).

В меланжер сначала набирают кровь до метки «0,5», кончик капилляра протирают ваткой, а затем до метки «101»— разбав­ляющую жидкость, которая представляет собой 0,85%-й или 3%-й раствор хлорида натрия; 5%-й раствор цитрата натрия или ра­створ йода (йод кристаллический 0,3 г, йоид калия 0,4 г, цитрат натрия 2 г, дистиллированная вода 100 мл). Меланжер закрывают с обеих сторон большим и указательным пальцами и встряхива­ют 1...2мин. В данном случае получается разведение 1 :200. Из


 

О
TJ7
-Q-
DP

меланжера вначале удаляют на ватку первые 3 капли разведенной крови, а следующей заряжают камеру — наносят каплю на среднюю полоску камеры у края притертого покровного стекла. Капля попадает под стекло в щелевид­ное пространство и заполняет камеру.

XT
-о-
|0б-
Рис. 7.6. Схема подсчета эри­троцитов в большом квадрате счетной камеры Горяева

В пробирку сначала вносят 4 мл 0,85%-го или 3%-го раствора хлори­да натрия, а затем добавляют 0,02 мл крови пипеткой от гемометра Сали и смешивают. Пастеровской пипет­кой набирают разбавленную кровь (разведение 1 : 200) и заряжают счет­ную камеру.

Эритроциты подсчитывают через 2

3 мин после заполнения камеры под микроскопом (объектив х8, окуляр х 15) при затем­ненном поле (прикрывают диафрагму или опускают конденсор) в левом верхнем большом квадрате (разделенном на 16 маленьких квадратиков), а затем еще в 4 больших квадратах, расположенных по диагонали или по краям сетки в 4 квадратах и одном в центре (всего в 5 больших квадратах).

Подсчет клеток в большом квадрате начинают с левого верхне­го маленького квадратика и продолжают во втором, третьем и чет­вертом квадратиках, расположенных справа от первого (рис. 7.6). Подсчитав эритроциты в верхнем ряду, переходят на нижераспо­ложенный ряд, начиная считать в первом правом квадратике, и т. д. Подсчитывают все эритроциты, которые лежат внутри маленьких квадратиков, а также на верхней и левой сторонах большого квад­рата; клетки, расположенные на нижней и правой сторонах, не учитывают.

Количество эритроцитов определяют по одной из формул

ХЭІ=АБ/ВГ= А • 10 000, Хэ2 =А ■ 1010,

Где Хэі — количество эритроцитов в 1 мкл крови; ХЛ — количество эритроцитов вI л крови; А — число эритроцитов в 5 больших квадратах; Б — степень разведения крови (200); В — число маленьких квадратиков в 5 больших квадратах (16 ■ 5 = 80); /'—объем счетной камеры над маленьким квадратиком (1/4000мкл).

Подсчет лейкоцитов. Кровь можно разводить как в лейкоци­тарном меланжере, так и в пробирке.

В меланжер набирают кровь до метки «0,5», а затем до метки «11»— жидкость Тюрка (3%-й раствор уксусной кислоты — 100 мл, I %-й раствор генциана фиолетового или метиленового синего — I мл). Встряхивают 1...2мин. Уксусная кислота гемолизирует эри­троциты, а генциан фиолетовый или метиленовый синий окраши-


 




вают лейкоциты. Получают при этом разведение 1: 20. Выпускают 3 капли на ватку (или фильтровальную бумагу), а следующей кап­лей заряжают счетную камеру.

В пробирку вносят 0,4 мл жидкости Тюрка и 0,02 мл крови, ко­торую набирают пипеткой от гемометра Сали (разведение 1 :20); тщательно перемешивают. Смесь отбирают пастеровской пипет­кой и заряжают счетную камеру. Через 2...3 мин, когда лейкоциты осядут на дно камеры, начинают подсчитывать клетки под мик­роскопом (объектив х8, окуляр х 15) при затемненном поле в 100 больших квадратах, не имеющих дополнительных линий и расположенных по всей площади сетки Горяева группами по че­тыре квадрата.

Количество лейкоцитов определяют по формуле

ХЛ = АБ/ВГ = А- 50,

где .Уд — количество лейкоцитов в 1 мкл крови; А — число лейкоцитов в 100 боль­ших квадратах; Б — степень разведения крови (20); 5 —число маленьких квадра­тиков в 100 больших квадратах (100 ■ 16 = 1600); Г— объем счетной камеры над ма­леньким квадратиком (1/4000 мкл).

Для пересчета на 1 л крови используют формулу Хп = А ■ 5 • 107.

Подсчет тромбоцитов (по Хауке). В шприц на 1 мл набирают 0,5 мл 1%-го раствора трилона Б и 0,5 мл венозной крови, переме­шивают (разведение 1: 1) и сразу переносят в селиконированную пробирку, которую закрывают пробкой. (Кровь в пробирке может находиться несколько часов.). Перед подсчетом содержимое про­бирки перемешивают и набирают в лейкоцитарный меланжер до метки «1», а до метки «11» — 1%-й раствор оксалата аммония (раз­ведение крови 1 :20). Тщательно перемешивают и выдерживают 20 мин (для гемолиза эритроцитов). Затем меланжер встряхивают 2...3 мин, выпускают на ватку 3 капли смеси, а следующей заря­жают счетную камеру, которую ставят на 10 мин во влажную ка­меру (чашка Петри с ваткой, смоченной водой), чтобы тромбоци­ты осели на дно камеры. Тромбоциты подсчитывают в 5 больших квадратах, разделенных на 16 маленьких квадратиков (объектив х 40, окуляр х 7; синий светофильтр).

Количество тромбоцитов определяют по формуле

ХГ = АБ/ВГ=А-\000,

где ХТ — количество тромбоцитов в 1 мкл крови; А — число тромбоцитов в 5 боль­ших квадратах; Б — степень разведения крови (20); 5 —число маленьких квадра­тиков в 5 больших квадратах (80); Г— объем счетной камеры над маленьким квад­ратиком (1/4000 мкл).

Для пересчета на 1 л крови используют формулу Хт = А • 109. Определение количества эритроцитов и лейкоцитов с помощью кондуктометрических счетчиков.Для подсчета клеток использу-


 

ют отечественные приборы типа СФЭК-Ц-04 (рис. 7.7), ЦМК-1, ЦМК-2, а также импортные — «Целлоскоп» (Швеция), «Культер» (Фран­ция), «Пикоскель» (Венг­рия). Созданы автоматичес­кие линии, где кровь быст­ро и точно исследуют сра­зу по нескольким пара­метрам («Техникой» модели SMA-4, SMA-7, Hemalog D, «Культер» модель S, S-Plus, Diff-З и др.).

Рис. 7.7. Счетчик форменных элементов кро­ви кондуктометрический (СФЭК-Ц-04): / — табло для высвечивания цифр; 2— рычаг вклю­чения; 3 — стаканчик со взвесью клеток

Принцип работы кондук-тометрического счетчика (рис. 7.8). Перед работой стеклянную канюлю 4 по­мещают в стаканчик 5, со­держащий взвесь клеток

крови в электролите, и нажимают на пусковой рычаг 9. В этот момент в полости канюли создается разрежение, под действием которого суспензия клеток крови поступает из стаканчика через микроотверстие 6 в канюлю. Через наружный и внутренний элек­троды 3 и микроотверстие начинает проходить постоянный элек-

Рис. 7.8. Схема устройства кондуктометрического счетчика:

/ — насос; 2 — электромагнитный клапан; 3 — электроды; 4 — канюля датчика; 5—стаканчик I пробой; б—микроотверстие; 7—груз; 8— постоянный магнит; 9— пусковой рычаг; 10—

геркон; 11 — электромагнит


трический ток. Эритроциты и лейкоциты практически не обла­дают электропроводностью, поэтому, когда они продвигаются че­рез микроотверстие канюли, сопротивление датчика увеличива­ется, вследствие чего возникают импульсы напряжения, подавае­мые на усилитель.

Когда пусковой рычаг находится в нижнем положении, по­стоянный магнит 8, установленный на рычаге, замыкает контакты геркона 10. При этом включается электромагнит //, удерживаю­щий груз 7в поднятом положении. Через 7 с после того, как взвесь клеток начинает всасываться в канюлю, микроЭВМ включает на 0,5 с электромагнитный клапан 2, соединяющий полость канюли с атмосферой. Всасывание прекращается. Еще через 0,5 с включа­ется электромагнит, а груз опускается, создавая с помощью насо­са 1 давление в полости канюли- Под этим давлением взвесь кле­ток через микроотверстие выбрасывается обратно в стакан. Благо­даря грузу обеспечивается постоянство расхода суспензии через микроотверстие. Одновременно включается счетчик — устрой­ство, регистрирующее электрические импульсы, исходящие от форменных элементов крови. Через 7 с счетчик выключается и ре­зультаты выводятся на цифровое табло.

Подсчет эритроцитов и лейкоцитов на приборе СФЭК-Ц-04.При подсчете эритроцитов в пробирку набирают 5 мл профильт­рованного физиологического раствора и вносят 0,02 мл крови, стабилизированной трилоном Б (разведение 1 :250). В стаканчик отмеривают 10 мл физиологического раствора и добавляют 0,05 мл смеси из пробирки, получая рабочее разведение крови 1 :50 000, которое используют для подсчета эритроцитов. На столик уста­навливают стаканчик с исследуемой суспензией и поднимают сто­лик до упора так, чтобы, наружный электрод и канюля оказались в стаканчике. Нажимают кнопку «Э» на лицевой панели и переме­щают спусковой рычаг вниз до упора. Когда процесс подсчета за­вершится, записывают показания табло. Подсчет сопровождается звуковыми сигналами, частота которых пропорциональна концен­трации форменных элементов.

При подсчете лейкоцитов в пробирку, содержащую кровь в раз­ведении 1: 250 (после того как из пробирки отобрали 0,05 мл для подсчета эритроцитов), вносят 5 мл физиологического раствора. Получается разведение крови 1 : 500. К смеси прибавляют 0,1 мл4%-го раствора гипсофилина или 2%-го раствора сапонина, со­держимое пробирки перемешивают до тех пор, пока оно не станет прозрачным (гемолиз эритроцитов). Через 2...5 мин суспензия го­това для подсчета лейкоцитов. На лицевой панели прибора нажи­мают кнопку «Л», при этом загорается светодиод «Л». Приготов­ленную суспензию лейкоцитов помещают в стаканчик, который устанавливают на столик; последний поднимают до упора вверх. Пусковой рычаг перемещают вниз до упора, и когда процесс под­счета клеток завершится, записывают показания табло.


Определение количества форменных элементов у птиц(по К. С. Фо­миной и В. И. Шмельковой). Для подсчета эритроцитов в меланжер до метки «0,5» набирают кровь, а затем до метки «101» — 0,1%-й раствор азура II на 0,85%-м растворе хлорида натрия (разведение 1 : 200). Перемешивают встряхиванием в течение 1...2 мин, выпус­кают на ватку 3...4 капли смеси, а следующей каплей заряжают счетную камеру Горяева. Вначале подсчитывают (объектив х40, окуляр х 7) эритроциты в 5 больших квадратах, расположенных по диагонали и разделенных на 16 маленьких квадратиков каждый. Эритроциты овальной формы, содержат ядра, не окрашены, круп­нее других клеток крови.

Количество эритроцитов определяют по формуле

Хэ = А-\010,

где Хэ — количество эритроцитов в 1 л крови; А — число эритроцитов в 5 больших квадратах.

Тромбоциты овальной или веретенообразной формы, окраше­ны, хорошо контурированы; это самые мелкие клетки крови. Их подсчитывают в 100 больших квадратах.

Количество тромбоцитов определяют по формуле

ХТ = А-5- 108,

где ХТ — количество тромбоцитов в 1 л крови; А — число тромбоцитов в 100 боль­ших квадратах.

Лейкоциты — это круглые клетки, по размеру меньше эритро­цитов, но крупнее тромбоцитов, окрашены. Их подсчитывают в 100 больших квадратах.

Количество лейкоцитов определяют по формуле

Хл = Л-5-108,

где Х„ — количество лейкоцитов в 1 л крови; А — число лейкоцитов в 100 больших квадратах.

Изменения количества форменных элементов крови.Количество эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов в крови у здоровых жи­вотных разных видов представлено в таблице 7.2.

Увеличение количества эритроцитов — эритроцитоз (полици-темию, полиглобулию) — отмечают при потере организмом жид­кости в результате обильного потения, поносов, образования транссудатов и экссудатов (экссудативные плевриты, перитониты, водянка грудной и брюшной полостей), а также при непроходи­мости кишечника (механические илиусы), хронической альвеоляр­ной эмфиземе легких, отравлениях фосфором, диоксидом углеро­да, хлором, при декомпенсации сердца.


 




7.2. Содержание эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов в крови взрослых здоро­вых животных разных видов

 

  Эритроциты, Лейкоциты, Тромбоциты,
Вид животного млн/мкл тыс/мкл тыс/мкл
  или 107л или Ю'/л или Ю'/л
Крупный рогатый скот 5,0...7,5 4,5.-12,0 260.-700
Овцы 7,0...12,0 6,0.-14,0 270.-500
Козы 12,0.-18,0 8,0.-17,0 300...900
Лошади 6,0...9,0 7,0.-12,0 200...500
Свиньи 6,0.-7,5 8,0.-16,0 180.-300
Собаки 5,2.-8,4 8,5.-10,5 250...550
Куры 3,0.-4,0 20,0.-40,0 32...100

Снижение содержания эритроцитов в крови — эритропению (олигоцитемию) — наблюдают при анемиях, обусловленных недо­статочным или неполноценным кормлением (особенно при недо­статке белков, железа, меди, кобальта, марганца, витаминов С и группы В), при инфекционных заболеваниях (инфекционная ане­мия лошадей и др.), интоксикациях (вследствие длительных на-гноительных и септических процессов), отравлениях гемолити­ческими ядами, инвазионных болезнях, гемоспоридиозах (пиро­плазмоз, нутталиоз, тейлериоз, трипанозамоз и др.), лейкозах, зло­качественных новообразованиях, обильных кровопотерях.

Повышение содержания лейкоцитов в крови — лейкоцитоз — может быть:

физиологический — при беременности (незадолго до родов и сразу после них), у новорожденных (в первые дни после рожде­ния), после приема корма (наблюдают у животных с однокамер­ным желудком; у животных с многокамерным желудком и непре­рывным процессом пищеварения пищеварительного лейкоцитоза практически нет), после тяжелой физической работы (миогенный лейкоцитоз);

медикаментозный — после парентерального введения белково-содержащих и жаропонижающих препаратов, вакцин, сывороток, алкалоидов, адреналина, эфирных масел;

патологический — при лихорадочно-воспалительных процессах, многих инфекционных заболеваниях, лейкозах.

Уменьшение количества лейкоцитов — лейкопению — наблюда­ют при вирусных заболеваниях (чума свиней, инфекционный эн­цефаломиелит лошадей, повальное воспаление легких), паратифе телят, стахиботриотоксикозе, истощении защитных сил организма, лучевой болезни.

Увеличение количества кровяных пластинок в крови — тромбо-цитоз — встречается после операций, при мыте, ревматизме, артри­те, язвенном колите, остеомиелите, острой постгеморрагической и гемолитической анемиях, воспалении легких, плеврите, карци­номе, лимфогранулематозе, саркоме, миоглобинурии.


Снижение содержания тромбоцитов в крови — тромбоцитопению (тромбопению) — отмечают при большинстве острых инфекцион­ных заболеваний, геморрагических диатезах (кровопятнистая бо­лезнь, скорбут), апластических и мегалобластных анемиях, тяжелых болезнях печени, гиповитаминозе А, интоксикациях, стахиботрио­токсикозе, лейкозах (в клиническую стадию заболевания), лучевой болезни, воспалении кишечника, пироплазмозе и т. д.







Дата добавления: 2014-11-10; просмотров: 4546. Нарушение авторских прав


Рекомендуемые страницы:


Studopedia.info - Студопедия - 2014-2019 год . (0.007 сек.) русская версия | украинская версия