Исследование под микроскопом
Просматривают не менее 100 полей зрения с иммерсионным объективом в течение 5 мин. Если КУБ не обнаружены в 100 полях зрения, необходимо тщательно исследовать еще 100 новых полей зрения, в сомнительных случаях просматривают весь мазок. Туберкулезные бактерии окрашиваются в красный цвет, все остальные элементы мокроты и бактерии - в синий. Туберкулезные микобактерии имеют вид маленьких (1,5-6 мкм), тонких, слегка изогнутых палочек с утолщениями на концах или посередине, располагаются группами, парами или поодиночке. Подсчитывают их количество, которое определяет тяжесть заболевания и опасность больного для окружающих. Регистрация результатов с указанием количества обнаруженных КУБ проводится следующим образом: нет КУБ на 100 полей зрения О 1-9 КУБ на 100 полей зрения, указать число 10-99 КУБ на 100 полей зрения + 1-10 КУБ на 1 поле зрения ++ более 10 КУБ на 1 поле зрения +++ При окраске по Цилю - Нильсену могут окрашиваться в красный цвет и кислотоупорные сапрофиты, для дифференциации их с микобактериями туберкулеза необходимы посев мокроты, применение люминесцентной микроскопии и др. Сапрофиты крупнее, шире и длиннее микобактерий туберкулеза и располагаются на клетках плоского эпителия. После окончания просмотра мазки обрабатывают толуолом или ксилолом для удаления иммерсионного масла. Мазки с обнаруженными КУБ следует хранить в течение года, затем их разбивают и закапывают во избежание повторного использования. Если микобактерий выделяется мало и в обычных мазках их не находят, прибегают к методу накопления (флотации). Метод флотации (всплывания) по Поттенджеру Свежевыделенную мокроту в количестве 10-15 мл помещают в узкогорлую бутылку (колбу). Приливают двойное количество 5 г/л раствора КОН, смесь энергично встряхивают 10-15 мин. Затем приливают 1 мл ксилола (толуола, бензола) и около 10 мл дистиллированной воды для разжижения мокроты и снова встряхивают 10-15 минут. Затем добавляют дистиллированную воду так, чтобы уровень жидкости поднялся до горлышка бутылки. Оставляют стоять на 40-50 мин. Образовавшийся верхний беловатый, сливкообразный слой снимают по каплям и наносят на предварительно подогретое до 60°С предметное стекло. Каждую последующую каплю наносят на высушенную предыдущую. Препарат фиксируют и окрашивают по Цилю - Нильсену. Метод люминесцентной микроскопии Приниип. Туберкулезные микобактерии, окрашенные ауромином, люминесцируют под влиянием ультрафиолетовых лучей в виде светящихся золотистых палочек (метод менее трудоемкий и более быстрый, чем предыдущие). Определение лекарственной резистентности возбудителя
|
