Определение аллерген-специфических IgE in vitro методами радиоаллергосорбентного и хемилюминисцентного анализа
В соответствии с нормативами, принятыми ВОЗ, для иммуноголлобулина Е одна международная единица 1 МЕ/мл соответствует 2,4 нг IgE. Обычно концентрация IgE выражается в МЕ/мл или кЕ/мл (кЕ - килоединица). IgE определяется у плода человека начиная с 11 недель развития в концентрации 1 - 10 к Е/л. Гипериммуноглобулинемия Е - повышенное содержание IgE характерно для аллергических состояний различной этиологии, гельминтозов, изолированного дефицита IgA, гипоплазии тимуса (синдромы Ди-Джорджи, Вискотт-Олдриджа), хронического гранулематоза детей, синдрома Джоба. Контрольные значения концентрации в норме и при различной патологии даны в таблице 1. Таблица 1. Значения 1%Е в норме и при патологии (кЕ /л)
Радиоаллергосорбентный тест (PACT) используется для определения уровней аллерген-специфических антител различных классов (IgE, IgG4) в сыворотке крови. К испытуемой сыворотке добавляют нерастворимый полимер с фиксированным на его поверхности аллергеном. Происходит связывание аллергена со специфическими антителами (если они имеются). После отмывания неспецифических IgE добавляют антитела против IgE, меченые радиоактивным йодом. Если в сыворотке имеются соответствующие аллергену антитела, то происходит образование комплекса: аллерген на бумаге + специфический IgE + антитела к IgE. Количество связавшихся меченых изотопом aнти-IgE-антител показывает количество специфических IgE в сыворотке (см. Рис.2). Определение аллерген-специфических IgE с помощью хемилюминисцентного анализа основано на модификации PACT. Проводится реакция сыворотки пациента с панелью аллергенов или смесей аллергенов. Панель содержит отдельные участки целлюлозных нитей с ковалентно связанными аллергенами. Исследование начинается заполнением панели сывороткой пациента. В ходе инкубации IgE сыворотки связываются с покрытыми аллергеном целлюлозными нитями. Затем панель промывают буфером, чтобы удалить несвязавшиеся компоненты сыворотки. В камеру добавляют меченые ферментом анти-IgE, которые связываются с IgE сыворотки, фиксированными на нитях. После второй промывки панель заполняют смесью фотореагентов; в их реакции с мечеными антителами испускается хемилюминисценция. Количество испускаемого света от каждой нити прямо пропорционально количеству аллерген-специфического IgE в сыворотке пациента. Для измерения интенсивности хемилюминисценции используются люминометры или денситометры. Наряду с выявлением специфических IgE используются и другие лабораторные тесты для диагностики как антителозависимых реакций, так и реакции замедленного типа. Данные методы позволяют изучить особенности патогенеза аллергических реакций. К ним относятся - реакции дегрануляции тучных клеток или базофилов, - реакция торможения миграции лейкоцитов крови (РТМЛ), - реакция повреждения нейтрофилов (ППН), - определение свободного связанного гистамина - определение ИЛ 4,5,6, TGFb - определение триптазы и хемоттриптазы
|
