Методы определения
Качественные пробы Редукционные методы основаны на редукционных свойствах альдегидной группы глюкозы. В качестве окислителя используют какую-либо легко редуцирующуюся соль, дающую при восстановлении окрашенное соединение. К редукционным пробам относятся пробы Фелинга, Тромбера, Ниландера, Бенедикта, Гайнеса. Проба Гайнеса. Реакция основана на свойстве глюкозы восстанавливать гидрат окиси меди в щелочной среде в гидрат закиси меди (желтого цвета) или закиси меди (красного цвета). Чтобы из гидрата окиси меди при нагревании не образовался черный осадок меди, к реактиву добавляют глицерин, гидроксильные группы которого связывают гидрат окиси меди. Реактив Гайнеса готовят следующим образом: 1) 13,3 г х. ч. кристаллического сульфата меди растворяют в 400 мл воды; 2) 50 г едкого кали растворяют в 400 мл воды; 3) 15 г ч. глицерина разводят в 200 мл воды. Смешивают 2-й и 1-й растворы и тотчас приливают 3-й. Реактив стойкий. Пробу проводят в следующем порядке: к 3-4 мл реактива прибавляют 8—12 капель мочи, кипятят или ставят в кипящую водяную баню. В присутствии глюкозы появляется желтая или красная окраска жидкости и осадок. Проба Гайнеса является надежной, так как при большом разведении мочи (8—12 капель мочи и 3—4 мл реактива) восстанавливающее действие других редуцирующих веществ мочи (мочевая кислота, индикан, креатин, желчные пигменты), а также некоторых лекарственных веществ (ацетилсалициловая кислота, кофеин, ПАСК) выражено слабо. Наличие большого количества белка в моче мешает правильной оценке редукционных проб, поэтому желательно предварительно его удалить, подкислив мочу несколькими каплями уксусной кислоты, нагрев до кипения и отфильтровав. Существует ряд экспресс-методов обнаружения глюкозы в моче с применением готовых наборов (таблетки, фильтровальная бумага, порошки). К этим наборам обычно прилагается описание сущности и правил проведения проб, анализ должен проводиться строго в соответствии с инструкцией. Глюкозооксидазная (нотатиновая) проба. В основе метода лежит окисление глюкозы ферментом глюкозооксидазой (нотатином). Образующаяся при этом перекись водорода расщепляется другим ферментом (пероксидазой) и окисляет краситель-индикатор (производное бензидина), изменяя его окраску. Для определения глюкозы в моче индикаторную бумажку глюкотест погружают в испытуемую мочу на 1—2 с, так чтобы нанесенная на бумажку желтая полоса полностью смочилась. Через 2 мин ориентировочно определяют концентрацию глюкозы в моче путем сравнения интенсивности окраски цветной полосы с цветной шкалой, имеющейся в стандартном наборе. Необходимо помнить, что при очень высокой глюкозурии (более 2%) интенсивность окраски цветной полосы не меняется. Количественные методы Поляриметрический способ позволяет определить процент глюкозы в моче при помощи так называемого сахариметра. Принцип определения основан на том, что глюкоза, находящаяся в растворе, вращает плоскость поляризации света вправо, причем угол вращения плоскости поляризации пропорционален содержанию глюкозы в растворе. Перед определением необходимо отменить препараты тетрациклина, экскретируемые с мочой и искажающие результаты за счет дополнительной оптической активности. Для исследования мочу необходимо освободить от белка и профильтровать. Если моча после фильтрования остается мутной, то используют адсорбент. Трубку поляриметра заполняют просветленной мочой, накрывают шлифованным стеклышком, плотно завинчивают, насухо вытирают и помещают а аппарат. По интенсивности затемнения правой половины поля зрения поляриметра определяют угол отклонения поляризованного луча, что выражается градусах шкалы прибора. Угол отклонения в 1° соответствует 1% глюкозы при длине трубки 18,94 см). Этот метод чрезвычайно распространен в лабораторной практике однако имеет ряд недостатков: субъективен (индивидуальное восприятие освещения), достаточно трудоемок и дает неточные результаты, если не достигнута полная прозрачность мочи Цветная реакция с ортотолуидином. Основана на том, что глюкоза при нагревании с реактивом ортотолуидином дает окрашенное соединение, степень окраски которого пропорциональна концентрации глюкозы. Для проведения пробы приготовляют ортотолуидиновый реактив (в 94 мл ледяной уксусной кислоты растворяют 0,15 г тиомочевины и добавляют 6 мл ортотолуидина) и стандартный раствор глюкозы. Мочу разводят в 2—10 раз в зависимости от характера качественной пробы. 0,1 мл разведенной мочи смешивают с 4,5 мл ортотолуидинового реактива, Помещают на 8 мин в кипящую водяную баню, после чего сразу охлаждают до нормальной (комнатной) температуры. Полученный цветной раствор коло-рируют на ФЭКе при длине волны 590—650 нм (оранжевый или красный фильтр) против контроля, который ставят также, но вместо мочи берут стандартный раствор глюкозы. Наличие белка в моче не мешает определению глюкозы данным методом.
|
