Методы определения. Непременным условием при проведении исследований на белок является абсолютная прозрачность мочиНепременным условием при проведении исследований на белок является абсолютная прозрачность мочи. Для этого мочу фильтруют. Если мутность не устраняется фильтрованием, применяют другие способы освобождения от мутности (см. выше). Качественны е пробы Проба с сульфосалициловой кислотой — самая чувствительная из качественных проб. К нескольким миллилитрам мочи добавляют 20% раствор сульфосалициловой кислоты из расчета две капли на 1 мл. При положительной реакции появляется мутность, которая тем более выражена чем выше содержание белка в моче. Результат обозначают следующим образом: реакция слабоположительная (+), положительная (++), резко положительная(+++). Проба с азотной кислотой. В пробирку наливают 1—2 мЛ 50% раствора азотной кислоты, затем наслаивают на кислоту равное количество мочи. При наличии белка на границе двух жидкостей появляется белое кольцо. Иногда несколько выше границы между жидкостями образуется кольцо красновато-фиолетового цвета от присутствия уратов. Уратное кольцо в отличие от белкового растворяется при легком нагревании. Практически никаких реактивов не требуют качественная проба Брайта с кипячением и сухие колориметрические пробы—скрининг-тесты на протеинурию. При кипячении мочи, содержащей белок, он денатурируется, образуя облаковидный осадок или хлопья, не растворяющиеся в 6% уксусной кислоте, в отличие от солей фосфатов. Скрининг-тесты основаны на способности белка (альбумина) изменять цвет бумаги с нанесенным индикатором (как правило, бромфеноловым синим) и буфером. Прямая зависимость между интенсивностью окраски индикаторной бумаги и количесгвом белка позволяет ориентировочно оценить и величину протеинурий. Однако применяемые в настоящее время скрининг-тесты не лишены недостатков, в частности, бромфеноловый синий не выявляет белок Бенс-Джонса. Количественные методы, Метод Робертса - Стольникова. В основе метода лежит качественная проба с азотной кислотой. Ход проведения пробы описан выше. Появление кольца на границе двух жидкостей между 2-й и 3-й минутой наслаивания указывает на наличие в моче 0,033 г/л белка (концентрацию белка в моче принято выражать в промилле, т. е. в граммах на литр). Если кольцо появилось раньше, чем через 2 мин, мочу следует развести водой. Подбирают такое разведение мочи, чтобы при наслаивании ее на кислоту кольцо появилось на 2—3-й минуте. Степень разведения зависит от ширины и компактности кольца и времени его появления. концентрацию белка вычисляют, умножив 0,033 г/л на степень разведения мочи. табл.6). Метод разведения Робертса — Стольникова обладает рядом недостатков: он субъективен, трудоемок, точность определения концентрации белка снижается по мере разведения мочи. Наиболее удобными в работе и точными являются нефелометрический и биуретовый методы. Таблица 6
|
