ОБРАБОТКА РАБОЧЕЙ ОДЕЖДЫ

 

1. Дезинфицирующие растворы после обработки ими исследуемого материала и истечения времени их экспозиции сливают в канализацию, открытую емкость с обработанным материалом помещают в плотный термостойкий пакет (контейнер) для последующего автоклавирования под давлением 2,0 кГс/кв. см (0,2 МПа) при температуре 132 +/- 2 °С в течение 60 мин.

1.1. После автоклавирования пакет с инактивированным материалом выносят в контейнер для мусора с последующим вывозом на полигон бытовых отходов или на сжигание в специальных печах.

2. Обеззараживание пробирок с ампликонами, расходного материала, перчаток в рабочей зоне 3 (помещении).

2.1. Использованные пробирки с ампликонами (исключая пробирки с ампликонами, передаваемые для анализа в рабочие зоны 4-1 и 4-2), наконечники, перчатки, ветошь для обработки поверхностей в боксе биологической защиты или ПЦР-боксе собирают в пластиковые закрывающиеся емкости, выносят в рабочую зону 4-1 с целью последующей инактивации.

При ее отсутствии отходы переносят в специально предназначенное вспомогательное помещение, где проводят их инактивацию.

2.2. Утилизацию остатков растворов, содержащих гуанидинизотиоцианат, осуществляют путем их двадцатикратного разбавления водой с последующим сливом жидкости в канализацию.

3. В рабочих зонах 4-1 и 4-2 или при их отсутствии во вспомогательном помещении использованные наконечники, пробирки с ампликонами (не открывать), перчатки, ветошь после окончания работы помещают в плотный термостойкий пакет (контейнер) для последующего автоклавирования в соответствии с п. 1.

4. Дезактивацию буферов и гелей, содержащих бромид этидия, осуществляют следующими способами.

4.1. Первый способ - отработанные гели и буфер из камеры помещают в пластиковую емкость на 5 л с плотно завинчивающейся крышкой. Добавляют 1 объем 0,5 М раствора калия перманганата и затем 1 объем 2,5 М соляной кислоты. Аккуратно перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 4 - 6 ч. Добавляют 1 объем 2,5 М натрия гидроксида, аккуратно перемешивают. Сбрасывают нейтрализованные реактивы в канализацию.

Необходимые реагенты для обработки 1 л буфера и гелей: 0,5 М перманганат калия - 1 л; 2,5 М соляная кислота - 1 л; 2,5 М NaOH - 1 л.

4.2. Второй способ - обработку растворов (буферов), содержащих этидиум бромид, осуществляют путем добавления к ним деконтаминирующего раствора до его конечной концентрации 25% (например, 25 мл деконтаминирующего раствора добавить к 75 мл раствора, содержащего этидиум бромид), аккуратно перемешивают и оставляют при комнатной температуре в течение 20 ч. Раствор нейтрализуют (pH между 5 - 9) натрием бикарбонатом. Нейтрализованные растворы сливают в канализацию.

Обработку твердых материалов, содержащих этидиум бромид (наконечники и гели), осуществляют путем помещения их в пластмассовую емкость, содержащую деконтаминирующий раствор. Далее процедуру выполняют, как при деконтаминации растворов (буферов), содержащих этидиум бромид.

Приготовление деконтаминирующего раствора: добавить 20 мл 50%-ной гипофосфорной кислоты к раствору, содержащему 4,2 г натрия нитрита в 300 мл дистиллированной воды, аккуратно перемешать. Раствор используют в день приготовления.

4.3. Третий способ - заполнить колонку активированным углем и пропускать через нее отработанный буфер небольшими порциями. Дезактивированный раствор можно сливать в канализацию. Гели дезактивировать первым способом.

Необходимые реагенты: стеклянная колонка емкостью на 1 - 2 л; активированный уголь.

5. Обработка рабочей одежды.

5.1. При работе с микроорганизмами I - IV групп патогенности обработку рабочей одежды осуществляют в соответствии с СП 1.3.1285-03 и (или) СП 1.3.2322-08.

5.2. Рабочую одежду сотрудников лаборатории маркируют индивидуально и в соответствии с зональным распределением, ее смену проводят не реже одного раза в неделю. В зоне детекции результатов желательно использовать одноразовую рабочую одежду.

5.3. Стирку рабочей одежды сотрудников проводят в прачечной организации. Не допускается одновременно производить стирку рабочей одежды разных рабочих зон. Обработку рабочей одежды из зоны учета результатов (детекции) продуктов амплификации нуклеиновых кислот проводят отдельно от одежды из других зон.

5.4. Сдачу "грязной" и выдачу "чистой" рабочей одежды производят с соблюдением поточности и разделяют во времени.

 

Приложение 7

 

ДЕЙСТВИЯ ПРИ КОНТАМИНАЦИИ ЛАБОРАТОРИИ,

ИСПОЛЬЗУЮЩЕЙ МАНК, НУКЛЕИНОВЫМИ КИСЛОТАМИ И АМПЛИКОНАМИ

 

1. Сотрудников, проводящих мероприятия по деконтаминации, обеспечивают отдельными халатами (желательно одноразовыми), шапочками, одноразовыми бахилами и перчатками, одноразовой ветошью, емкостями для приготовления необходимых количеств моющих и дезинфицирующих растворов.

2. Каждую зону лаборатории обрабатывают сотрудники, работающие в ней.

3. Для обработки каждой зоны используют отдельный набор уборочного инвентаря, подвергаемый после уборки обработке регламентируемыми дезинфицирующими средствами.

4. Каждую зону лаборатории разбивают на участки уборки, например:

- участок 1 - бокс биологической безопасности и оборудование внутри него;

- участок 2 - внешние поверхности бокса биологической безопасности;

- участок 3 - шкафы для расходного материала;

- участок 4 - холодильники для хранения реактивов, образцов проб;

- участок 5 - оборудование, которое используют в работе, но стоит оно вне бокса биологической безопасности;

- участок 6 - поверхности помещения (стены, окна, батареи, потолок, двери и т.д.);

- участок 7 - пол.

5. Обработку проводят от участка к участку последовательно. Каждый участок обрабатывают отдельной ветошью. Перед обработкой готовят моющие и дезинфицирующие растворы.

6. Поверхности каждого участка вначале обрабатывают моющим раствором для удаления жировых загрязнений, после чего остатки моющего средства удаляются ветошью, смоченной водой.

7. Затем на поверхность наносят на 30 мин. 0,2%-ный раствор ДП-2Т или аналогичные ему растворы, разрешенные к применению для этих целей в установленном порядке. Остатки дезинфицирующего средства тщательно удаляют ветошью, смоченной водой.

8. После завершения указанной обработки проводят обеззараживание влажных поверхностей ультрафиолетовым излучением в течение 45 мин.

9. Мероприятия, описанные в п. п. 7 и 8, повторяют еще раз.

10. По завершении деконтаминации берут повторные смывы, которые исследуют на наличие нуклеиновых кислот и (или) ампликонов возбудителей инфекционных заболеваний, диагностика которых наиболее часто осуществляется в данной лаборатории, с учетом длины специфических фрагментов амплификации нуклеиновых кислот возбудителей, указанных в инструкциях по применению к набору реагентов.

11. Для проведения смывов используют отдельные стерильные зонды с ватным тампоном, которые смачивают в 0,9%-ном растворе натрия хлорида или ТЕ-буфере (10 мМ Трис, 1 мМ ЭДТА) и вращательными движениями протирают рабочие поверхности оборудования, мебели, дверных ручек, косяков, телефонов и т.п. в течение 10 - 15 с, особое внимание уделяя помещениям совместного посещения работников зоны детекции продуктов амплификации и других сотрудников лаборатории (столовая, санузел и т.п.). После взятия смыва зонд помещают в микропробирки объемом 1,5 мл с 300 - 400 мкл ТЕ-буфера или 0,9%-ным раствором натрия хлорида, вращают в течение 10 - 15 с, избегая разбрызгивания раствора, и, отжав избыток жидкости о стенки пробирки, удаляют. Полученные суспензии перемешивают на вортексе в течение 1 мин. Для постановки реакции амплификации используют необходимый объем жидкости в соответствии с инструкцией по применению к набору реагентов. После получения результатов смывов оформляется протокол.

12. В случае получения в образцах смывов положительных результатов амплификации обработку повторяют.

13. Загрязненный расходный материал (пробирки, наконечники, реактивы и т.п.) и контаминированный рабочий исследуемый материал (кроме исходного материала) обеззараживают через автоклавирование в соответствии с п. 1 Прилож. 6.

14. Случаи контаминации регистрируют в специальном журнале с указанием мероприятий по ее устранению и результатов внутрилабораторного контроля.

15. Проведение работ, связанных с амплификацией нуклеиновых кислот, до завершения деконтаминационных мероприятий в лаборатории не допускается.