ААТТА---------------АЦТАТААТТ ААТТАА--------------ЦТАТААТТ
ТТААТТГАТ----------------АТТАА ТТААТТ--------------ГАТАТТАА
Рестрикция ДНК с образованием Рестрикция ДНК с образованием «липких концов» «тупых» концов»
Рис. 4.2. Схема гидролиза ДНК рестриктазами с образованием «липких» и «тупых» концов
Типы рестриктаз
Рестриктазы І типа: рестриктазы ЕсоВ и ЕсоК имеюттри субъединицы: S-субъединица распознает сайт рестрикции; М-субъединица – фермент метилаза; R-субъединица – рестриктаза. Донором СН3-групп для метилирования является S-аденозилметионин. Сайтами узнавания для рестриктаз первого типа служат двусторонние и ассиметричные последовательности ДНК. Рестриктазы ІІ типа (ЕсоRI, Bst I, Hind III, Alu I, Pst I и др.) – осуществляют только рестрикцию, метилирование производит другой фермент. Рестриктазы ІІ типа разрезают ДНК в неметилированных палиндромных сайтах (центральная симметрия с образованием тупых или липких концов).Эти ферменты очень специфичны, используются для рестрикционного анализа ДНК, а также в генной инженерии. EcoRI имеет две идентичных субъединицы. Сайты узнавания и рестрикции совпадают. Рестриктазы ІІІ типа ‑ это рестриктазы промежуточного типа. В состав фермента входит и рестриктаза и метилаза, сайт узнавания находится неподалеку от сайта рестрикции. Впервые рестриктазы были обнаружены у прокариот. У эукариот метилирование также происходит, но без рестрикции. Оно обеспечивает различное функциональное состояние генов. Защита от вирусов у эукариот осуществляется другим способом.
|
