Плазмиды
Плазмиды - это кольцевые двухцепочечные молекулы ДНК, которые могут существовать автономно либо интегрироваться в другие элементы генома. Молекулярная масса плазмид достигает 1-300 Мега Да, количество пар нуклеотидов - 2-600 тыс.. Одна плазмида с её идентичными копиями может составлять от 0,01 до 8% генома. Путём амплификации (увеличения числа копий) количество плазмидной ДНК в клетке может быть увеличено до 50% и более, а число копий может достигать нескольких сотен и даже 3 тысяч на клетку. Приём амплификации используется в генной инженерии, если плазмида является вектором, несущим встроенный ген, и ее необходимо размножить. Для этого используют обработку плазмидосодержащих клеток хлорамфениколом или же выращивают клетки при повышенной температуре (42ОС). Плазмиды обнаруживаются в основном у бактерий, но встречаются также у дрожжей, некоторых растений и животных. В клетках они могут существовать в 3 формах: I. ССС-форма – (от англ. covalently closed cirkle) – ковалентно замкнутое кольцо. Это суперскрученная плазмида с 8-10 супервитками. II. Форма релаксированого кольца. Для этой формы плазмид характерно наличие разрыва в одной из цепей ДНК. Очевидно, плазмиды переходят в такую форму перед началом собственной репликации (удвоения), так как в суперскрученном состоянии продвижение репликативной вилки невозможно. III. Линейная форма плазмиды – образуется в результате двухцепочечного разрыва ДНК. Переход в такую форму может предшествовать интеграции плазмиды в хромосому или другой элемент генома.
|
