Понятия стерилизация, дезинфекция, контаминация.

Контаминация – заражение культуры клеток микроорганизмами.

Стерилизация – комплекс методов, обеспечивающий гибель в стерилизуемом материале вегетативных и споровых форм патогенных и непатогенных микроорганизмов.

Дезинфекция – комплекс методов, направленных на уменьшение количества микроорганизмов и разрушение продуктов их жизнедеятельности на объектах внешней среды. Дезинфекция уменьшает количество микроорганизмов до приемлемого уровня, но полностью может их и не уничтожить. Этим она отличается от стерилизации, при которой уничтожаются все виды микроорганизмов и их споры. В культуральной же практике задачей ставиться максимально избавиться от микроорганизмов в любой форме их жизненного цикла. Поэтому методы дезинфекции рассматривают как начальный этап стерилизации. Проведением стерилизации начинается и заканчивается работа в лаборатории.

В лаборатории обычно используют механические, химические и физические методы дезинфекции и стерилизации.

Механический метод направлен на очистку поверхностей лаборатории и не одноразовых рабочих материалов от микрочастиц (пыли, пыльцы и др.) и зачастую сопряжен с химическими методами очистки.

Химические методы направлены на уничтожение микроорганизмов на поверхностях лаборатории, оборудования и предметов химическими веществами– дезинфектантами. Также служат для дезинфекции в процессе работы использованных одноразовых материалов.

Физические методы включают в себя действие высоких температур, давления, ионизирующего и ультрафиолетового излучения.

Механическая уборка помещения. Производится посредством протирки поверхностей специальнами дезинфецирующими растворами - дезинфектантами. Важно, чтобы протирочный материал был изготовлен из безворсовой ткани. Ниболее подходящим является материал микрофибра, не оставляющей собственные частицы на протираемой поверхности. Для поверхности ламинара нужно выделить отдельный набор протирочных салфеток из микрофибры, не используемый больше нигде, которые будут поочередно стерилизоваться.

К настоящему времени выработаны четкие правила эффективной уборки «чистых комнат» и под эти правила современная промышленность производит специальные приспособления. Существует три варианта уборки:

1. Метод «ведро-отжим», которое говорит само за себя. Используется два ведра с устройством отжима (А) и специальная плоская половая тряпка из безворсового материала – моп (Б). Вода с мопа после отжима стекает в отдельное ведро. Недостатки метода - большое время затрат на отжим и поддержание чистоты мопа.

2. Второй способ - использование мопа для уборки помещений основан на предварительной подготовке. Суть его в том, что несколько мопов (чем больше, тем лучше, но в зависимости от объемов помещения) подготавливаются к уборке заблаговременно. Они должны быть чистыми и смоченным дезинфектантом. После того, как первый моп уже непригоден для мойки пола, работник берет второй, заранее подготовленный, и продолжает уборку. Метод уборки с использованием заранее подготовленных мопов значительно увеличивает скорость уборки. Помимо скорости к преимуществам методики стоит отнести высокое качество проведения работ, а также снижение затрат на последующую стирку и чистку мопов, так как в стиральную машину закладывается уже не один а сразу несколько мопов, стираемых единовременно.

3. «Спрей»-метод. Принцип работы заключается в том, что на рукоятке швабры крепится флакон с моющим средством, которое подается в процессе уборки на моп. Такая технология избавляет от необходимости использовать ведра и прочие приспособления. К недостаткам можно отнести лишь ограниченное пространство помещений, которое можно привести в чистоту с использованием спрей метода.

Химический метод дезинфекции и стерилизации состоит в применении различных химических веществ, вызывающих гибель микроорганизмов. Химические средства действуют более поверхностно, чем высокая температура. Тем не менее этот способ дезинфекции наиболее часто применяется в дезинфекционной практике, главным образом потому, что применение его значительно более доступнее, чем применение высокой температуры. Кроме того, многие предметы, портящиеся при воздействии на них высокой температуры, могут быть без ущерба обработаны химическими дезинфицирующими средствами.

В практике дезинфекции используются многие химические вещества, а также их смеси, выбор которых определяется характером обрабатываемых предметов или поверхностей.

В продаже имеются различные дезинфектанты с различным коммерческим названием, в составе которых в качестве активного вещества (или смеси в-в) наиболее часто встречаются следующие химические соединения:

Дезинфектант	Эффективное действие	Недостатки
Этиловый и изопропиловый спирты	бактерии, грибы, микобактерии, вирусы (кроме нелипидных энтеровирусов).	Отсутствие спороцидной активности. Неинертное действие на резину и пластик.
Хлор, йод и фенолактивные соединения	Отсутствие спороцидной активности. Неинертны к металл, пластик, резину. Потенциальные канцерогены
Четвертичные аммониевые с-ния	Бактерий, грибы и липофильные вирусы.	Отсутствие активности против гидрофильных вирусов.
Перекись водорода	Бактерии, грибы, микобактерии, вирусы и бактериальные споры.	-
Перуксусная кислота	Неинертное действие на металл.
Глутаровый альдегид	-
Формальдегид	Канцероген

При работе с дезинфектантами, следует соблюдать правила безопасности:

 

Техника безопасности и правила работы при работе с дезинфектантами: · Работать с дезифектантами следует в защитной одежде, очках, перчатках и при включенной приточно-вытяжной вентиляции. · Следует знать информациию от производителя о токсичности и аллергенности дезинфектанта. · В качестве средств стерилизации используют только лицензированные физические и химические средства. · Следует придерживаться рекомендации изготовителей изделий, касающиеся воздействия конкретных средств (из числа разрешенных в нашей стране для этой цели) на материалы этих изделий, а также рекомендуемых производителем доз и разведений для качественной дезинфекции. · При проведении дезинфекции допускается использование только того оборудования, которое разрешено в установленном порядке к промышленному выпуску и применению. · Дезинфекцию с использованием химических средств проводят в специальных емкостях из материала не реагирующего с дезинфектантом. · Промывка изделий под проточной водой до дезинфекции не допускается, т.к. аэрозоль, образующийся в процессе мытья, может распространить загрязнение на лиц, занимающихся обработкой, а также поверхности помещений. · Изделия погружаются в дезраствор сразу же после применения таким образом, чтобы дезраствор полностью покрывал инструменты. · Изделия сложной конфигурации дезинфицируют в разобранном виде. Каналы и полости изделий заполняют дезинфицирующим раствором так, чтобы в них не содержалось пузырьков воздуха.

Физические методы дезинфекции и стерилизации. Термическим методом (автоклавированием) производят стерилизацию паром под давлением в специальном аппарате - автоклаве инструментов, а также растворов, которые не содержат углеводов. Обычно для культивирования клеток животных используют уже стерильные среды или их компоненты. При автоклавировании культурального пластика (если приобретается не стерильным) необходимо следовать указаниям производителя на режим автоклавирования. Срок хранения предметов или сред после автоклавирования в герметичной упаковке не превышает 20 суток.

Фильтрованием при помощи шприцевых фильтров-насадок (Подробно в разделе….)производят стерилизацию приготовляемых в лаборатории растворов.

Радиационный метод необходим для стерилизации изделий из термолабильных материалов. Стерилизующим агентом является ионизирующее γ(гамма)-излучение.

Для индивидуальной упаковки хранения облученных изделий используют пакеты из полиэтилена. Сохраняется стерильность в такой упаковке годами, но и он ограничен. Срок годности указывается на упаковке. Радиационный метод редко используется в лаборатории, это основной метод промышленной стерилизации. Он используется предприятиями, выпускающими стерильные изделия однократного применения, в том числе стерильный культуральный пластик.

Ультрафиолетовая стерилизация воздуха и твёрдых поверхностей осуществляется при помощи ультрафиолетовых или кварцевых ламп. Ультрафиолетовые лучи обладают бактерицидным действием. Наибольшее воздействие на бактерии оказывают лучи с длиной волны от 200 до 295 нм, в связи с чем данная область ультрафиолетовых лучей называется бактерицидной. Максимум бактерицидного действия располагается около длины волны 254 нм. Бактерицидное УФ (UV) излучение на этих длинах волн вызывает димеризацию тимина в молекулах ДНК. Накопление таких изменений в ДНК микроорганизмов приводит к замедлению темпов их размножения и вымиранию.

Мощность лампы определяется объемом обрабатываемого помещения. УФ-обработка помещения производиться в отсутствии персонала. В настоящее время в продаже имеются УФ-лампы встроенные в вентилятор. Это позволяет стерилизовать воздух в помещении в присутствии людей. Для облучения культурального бокса, внутренней камеры углекислотного инкубатора и ламинара используются только так называемые безозоновые УФ-лампы, так как высокая концентрация озона оказывает негативное действие на клеточные культуры.

 

 

ТЕХНИКА БЕЗОПАСНОСТИ ПРИ РАБОТЕ С КУЛЬТУРАМИ КЛЕТОК

Правила техники безопасности в лаборатории, где работают с культурами клеток можно разделить на две основные группы:

§ Общие правила техники безопасности (электричество, газовые баллоны, работа с жидким азотом, вентилируемость помещений и т.д.)

§ Правила биологической безопасности.

§ Правила экологической безопасности.