Колоночная жидкостная хроматография

В колоночной жидкостной хроматографии сорбент находится в стеклянной или металлической трубке (колонке).

В классическом варианте колоночной хроматографии используются сорбенты с диаметром частиц более 100 мкм. Колонка может иметь длину до нескольких метров. Элюент продвигается по колонке под действием силы тяжести.

В высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) используются сорбенты, обладающие особыми свойствами (однородность частиц, ненабухаемость и т. д.). Диаметр частиц этих сорбентов не превышает 30 мкм. Часто в ВЭЖХ применяют сорбенты с различными привитыми группами. Скорость движения подвижной фазы и эффективность разделения в ВЭЖХ значительно выше, чем в классическом варианте хроматографии.

2.1. Устройство жидкостного хроматографа

Классический прибор для ВЭЖХ (жидкостный хроматограф) состоит из следующих частей (рис. 1):

Рис. 1 Принципиальная схема жидкостного хроматографа

Подвижная фаза из емкостей для растворителей через фильтр подается насосом высокого давления в устройство для ввода пробы (туда же вводится проба). Далее образец с потоком подвижной фазы поступает в колонку. После процесса разделения элюат проходит через детектор, где происходит регистрация хроматограммы и передача данных в систему сбора и обработки хроматографических данных, и удаляется в сливную емкость.

Рассмотрим в указанной последовательности устройства отдельных блоков жидкостного хроматографа и требования, необходимые для их нормальной работы.

Подвижная фаза (элюент)

Требования, предъявляемые к элюенту:

Œ Элюент не должен содержать никаких твердых частиц и должен быть предельно химически чистым. Для приготовления подвижной фазы используются растворители марки «для ВЭЖХ». Это означает, что они были профильтрованы на фильтре с диаметром пор 0.2 мкм.

 Элюент должен быть освобожден от растворенных в нем газов – дегазирован, поскольку образование пузырьков может вызвать появление ложных пиков. Наиболее частые способы дегазации – пропускание через раствор элюента гелия (позволяет удалить до 80% растворенного воздуха) и вакуумная дегазация (удаляет около 60% воздуха).

Соблюдение этих правил увеличивает срок службы насоса и позволяет избежать загрязнения фильтров на входе в колонку.