Б.3. Сущность метода.

Все реактивы должны быть удостоверяемого аналитического качества. Применяемая вода должна быть дистиллированной или, по крайней мере, иметь соответствующую чистоту.

Б.4.1. Серная кислота. Раствор массовой концентрации 200 г/дм³ [молярной концентрации (Н₂SO₄)=2 моль/дм³].

Б.4.2. Едкий натр. Раствор массовой концентрации 80 г/дм³ [молярной концентрации (NaOH)=2 моль/дм³].

Б.4.3. Диатомовая земля.

Использование этого материала обеспечивает извлечение не менее 98 % кофеина, содержащегося в анализируемой пробе.

Примечание – подходящим материалом является Ctlite545.

Б.4.4. Аммиак. Раствор массовой концентрации 70 г/дм³ (одна часть концентрированного раствора аммиака ρ₂₀=0,9 г/см³ + две части воды).

Б.4.5. Диэтиловый эфир чистый или повторно очищенный (Б.7.3.) хроматографическим способом и насыщенный водой.

Для хроматографической очистки пропускают 800 см³ диэтилового эфира через хроматографическую колонку, содержащую 100 г основной окиси алюминия 1-го класса активности. Повторно очищенный таким образом диэтиловый спирт до использования должен содержаться в темных бутылях.

Примечание: вместо повторно очищенного хроматографическим способом материала может применяться недавно перегнанный и свободный от пероксидов диэтиловый спирт.

Б.4.6. Кофеин [1, 3, 7-триметил-2, 6-диоксопурин (C₈H₁₀O₂N₄H₂O)], чистый безводный.

Б.4.7. Хлороформ чистый или повторно очищенный (Б.7.3.) хроматографическим способом, как это описано в Б.4.5. и насыщенный водой.

Б.5. Аппаратура.

Б.5.1. Хроматографические колонки длиной 250 мм, внутренним диаметром 21 мм (колонка 1) и 17 мм (колонка 2), с кранами, предпочтительно из политетрафторэтилена (ПТФЭ).

Б.5.2. Спектрометр с диапазоном измерения, позволяющим производить исследования при длине волны 276 нм (с точностью до 0,004 единиц оптической плотности в рамках исследуемого диапазона) с допускаемой абсолютной погрешностью измерения не более 1%.

Б.5.3. Кюветы кварцевые толщиной поглощающего свет слоя 1 см.

Б.5.4. Обычное лабораторное оборудование, включая:

Б.5.4.1. химические стаканы вместимостью 100 см³;

Б.5.4.2. баню водяную;

Б.5.4.3. мерные колбы с одной меткой вместимостью 50, 100 и 1000 см³;

Б.5.4.4. пипетки вместимостью 2 и 2,5 см³ с одной меткой;

Б.5.4.5. весы лабораторные по ГОСТ 24104 с НПВ 200 г 2-го класса точности.