Морфолого-анатомическое исследование плодов зверобоя продырявленного, зверобоя пятнистого и зверобоя изящного

 

Современная нормативная документация, регламентирующая качество травы зверобоя, имеет в своей структуре раздел «Микроскопия». Однако, за последние пять лет некоторыми отечественными авторами проводились исследования по диагностике травы зверобоя, и предлагались новые усовершенствованные трактовки указанного раздела ФС. Анализ литературы выявил некоторую несогласованность в представлении о сроках заготовки сырья и качестве травы зверобоя продырявленного. В частности, недостаточно корректно описано наличие плодов в сырье и их значимость при определении времени сбора сырья, значительно влияющего на концентрацию в нём действующих веществ.

В некоторых источниках, в частности, в издании «Правила сбора и сушки лекарственных растений» при описании времени сбора травы указано, что заготовку ведут в фазу цветения, до появления незрелых плодов, что подразумевает под собой отсутствие плодов в сырье. Однако в ГФ СССР XI издания наличие плодов в сырье при сборе травы не оговаривается, указана лишь фаза цветения, а в разделе «Внешние признаки сырья» присутствует описание плодов в цельном и измельченном виде. Между тем, многочисленные исследования указывают на целесообразность сбора травы зверобоя именно в фазу цветения, когда отличается содержание БАС. Очевидно, что наличие плодов, особенно зрелых свидетельствует о несвоевременном сборе сырья и о низком содержании целевых веществ. Следовательно, необходимо усовершенствование раздела «Микроскопия» позволяющего обнаружить присутствие в сырье компонента, который является маркёром нарушения регламента заготовки сырья. В нашем случае таким маркёром является зрелый плод зверобоя пятнистого и зверобоя продырявленного.

Микроскопическое исследование цельных и измельченных плодов зверобоя продырявленного и зверобоя пятнистого проводили при помощи световых микроскопов (цифровой микроскоп Motic DM111 с увеличением ×40; ×100; ×400; ×1000, цифровой стереоскопический микроскоп Motic DM-39С-N9GO-A с увеличением ×40; ×20). Исследованию подвергалась плоды и семена зверобоя продырявленного, зверобоя пятнистого и зверобоя изящного, а также порошки вышеперечисленных растений (рис. 1-4).

 

Рис. 1. Плод зверобоя продырявленного. Поперечный срез (х20) Обозначения: 1 – оболочка плодолистика; 2 – полость плодолистика; 3 – перегородка синкарпной коробочки; 4 – эндокарпий; 5 – плацента плода.	Рис. 2. Экзокарпий плода зверобоя продырявленного. Вид с поверхности (х400)
А	Б
Рис. 3. Кожура семени зверобоя пятнистого. Вид с поверхности (х400) А – Фокус на поверхности эпидермальных клетки; Б – Фокус на нижележащие вместилища мезокарпия. Обозначения: 1 – эпидермальная стенка; 2 –перегородка вместилищ

 

А	Б
Рис. 4. Порошок травы зверобоя изящного А –Фрагмент порошка травы (х20); Б –Фрагмент плода в порошке травы (х40)

 

В результате проведенных морфолого-анатомических исследований изучены возможности использования особенностей строения плодов при определении примесных видов зверобоя, а также определены анатомо-морфологические признаки зрелых плодов и семян фармакопейных видов зверобоя, позволяющие идентифицировать некачественное сырье. Результаты исследований свидетельствуют о том, что в качественных образцах сырья зверобоя содержание плодов варьируется от 2,0 до 4,1%, что дает основание рекомендовать в качестве нового числового показателя для сырья «Зверобоя трава» - «Содержание плодов не более 5%».

 

2. Изучение химического состава травы зверобоя пятнистого (Hypericum maculatum Gantz.)

Проведено предварительное сравнительное исследование компонентного состава извлечений из травы зверобоя пятнистого и зверобоя продырявленного методом ТСХ (рис. 5).

На хроматограмме визуально наблюдалось отличие в содержании флавоноидов (рис. 5). Обнаружено, что в зверобое продырявленном рутин преобладает над гиперозидом, тогда как в случае зверобоя пятнистого гиперозид является доминирующим флавоноидом. Этот факт имеет важное значение, так как ранее было доказано, что гиперозид обладает антидепрессантной активностью.

 

 

Рис. 5. Схема ТСХ препаратов зверобоя продырявленного и

зверобоя пятнистого.

Обозначения: 1 – спирто-водное извлечение из травы зверобоя продырявленного; 2 – спирто-водное извлечение из травы зверобоя пятнистого; 3 – РСО гиперозида; 4 – РСО рутина; 5 – РСО бисапигенина.

 

Наличие батахромного сдвига при реакции комплексообразования с алюминия хлоридом свидетельствует о наличии флавоноидов (рис. 6). Следовательно, эта реакция является качественной на определение флавоноидов в траве зверобоя пятнистого.

Проведен спектральный анализ спирто-водного извлечения зверобоя пятнистого зверобоя. В этом случае, как и в траве зверобоя продырявленного, наблюдаются максимумы длин волн, характерные для флавоноидов и антраценпроизводных данного растения.

Рис. 6. Электронные спектры раствора извлечения из травы зверобоя пятнистого Обозначения: исходный спектр (1) и спектр в присутствии алюминия хлорида (2)	Рис. 7. Дифференциальный спектр раствора извлечения из травы зверобоя пятнистого

 

Максимум поглощения, характерный для флавоноидов (рутин, гиперозид), наблюдался при длине волны 412 нм (рис. 7).

Также диагностическим признаком для травы зверобоя пятнистого является наличие антраценпроизводных, для которых характерен максимум поглощения при длине волны 591± 2 нм.

Результаты исследований спектральных характеристик основных групп БАС фармакопейных видов зверобоя легли в основу количественной оценки действующих веществ изучаемых объектов. Для количественного определения суммы флавоноидов и суммы антраценпроизводных использовали метод спектрофотометрии, что в сравнительном аспекте представлено в табл. 1.

Таблица 1

Содержание основных групп действующих веществ в траве и препаратах зверобоя пятнистого и зверобоя продырявленного

Объект	Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин, %	Содержание суммы антраценпроизводных в пересчете на гиперицин, %
Трава зверобоя пятнистого	8,69±0,01	0,41±0,01
Трава зверобоя продырявленного	6,18 ±0,01	0,61±0,01

 

После установления природы основных групп БАС изучаемых видов зверобоя с целью выделения индивидуальных веществ фенольной природы из травы зверобоя пятнистого использована колоночная хроматография. Для этого из сырья был получен жидкий экстракт зверобоя пятнистого (1:1). Затем полученный экстракт высушивали на силикагеле марки L 40/100 и наносили на слой силикагеля, сформированный в хлороформе. В качестве сорбента служил силикагель марки L 40/100, а элюентами являлись спирто-хлороформные смеси и спирт.

В результате хроматографического разделения веществ на колонке силикагеля и последующей рехроматографии на полиамиде выделены 6 индивидуальных соединений, идентифицированных на основании данных УФ-, ЯМР-, масс-спектров и результатов химических превращений. Данные соединения идентифицированы как гиперозид, рутин, кверцетин, гиперицин, хлорогеновая кислота, гиперфорин (табл. 2).

 

Таблица 2