Студопедия Главная Случайная страница Обратная связь

Разделы: Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

Биуретовая реакция




При взаимодействии 1-2 мл разбавленного белка с 2-3 мл 1% раствора CuSO4 в щелочной среде (2-4 мл 30% раствора NaOH) развивается фиолетовое окрашивание.

Механизм данной реакции связан с образованием комплексных соединений меди с атомами азота полипептидной цепи. Щелочная среда требуется для депротонирования атомов азота.

2) Нингидриновая реакция на α-аминокислоты

Эта реакция основана на том, что бесцветный нингидрин, реагируя с аминокислотой, конденсируется в виде димера через атом азота, отщепляемый от α -аминогруппы аминокислоты. В результате образуется пигмент красно-фиолетового цвета. Одновременно происходит декарбоксилирование аминокислоты, что приводит к образованию СО2 и соответствующего альдегида. Нингидриновую реакцию широко используют при изучении первичной структуры белков (см. схему ниже).

Аргинин определяют с помощью качественной реакции на гуанидиновую группу (реакция Сакагучи), а цистеин выявляют реакцией Фоля, специфичной на SH-группу данной аминокислоты. Наличие ароматических аминокислот в растворе определяют ксантопротеиновой реакцией (реакция нитрования), а наличие гидроксильной группы в ароматическом кольце тирозина - с помощью реакции Миллона.

При взаимодействии белка со спиртовым раствором нингидринапри температуре 700 С развивается сине-фиолетовое окрашивание.

Реакция проходит в 2 стадии:

1- стадия. Эта реакция основана на том, что бесцветный нингидрин, реагируя с аминокислотой с образованием дикетодигринамина. Одновременно происходит декарбоксилирование аминокислоты, что приводит к образованию СО2 и соответствующего альдегида.

2 стадия.Дикетодигринамин конденсируется в виде димера через атом азота, отщепляемый от α -аминогруппы аминокислоты.

В результате образуется пигмент сине-фиолетового цвета (пурпура Руэманна).

Нингидриновую реакцию широко используют при изучении первичной структуры белков (см. схему ниже).

3) Ксантопротеиновая реакция – например, по ароматическому кольцу тирозина

При взаимодействии белка с концентрированной азотной кислотой белок выпадает в осадок. При нагревании раствор и осадок окрашиваются в ярко-желтый цвет. При этом осадок почти полностью растворяется.

Смесь охладить и по каплям добавить избыток NH4OH или NaOH до щелочной реакции. Вначале выпадает осадок кислотного альбумина растворяется и раствор окрашивается в ярко-оранжевый цвет.

Переход желтой окраски в оранжевую в щелочной среде обусловлен изменением структуры щелочных солей этих нитросоединений.

Желатина, не содержащая ароматических аминокислот, не дает этой реакции.

2) 3)

фенилаланин триптофан

Ксантопротеиновая реакция зависит от наличия в белках остатков ароматических аминокислот [фенилаланина (2), тирозина (1), триптофана (3)].

Эти аминокислоты в результате нитрования образуют желтоокрашенные нитросоединения.







Дата добавления: 2014-10-22; просмотров: 4468. Нарушение авторских прав; Мы поможем в написании вашей работы!


Рекомендуемые страницы:


Studopedia.info - Студопедия - 2014-2021 год . (0.002 сек.) русская версия | украинская версия