Ход работы. На аналитических весах взвешивают 1 – 3 г исследуемого растительного материала, в зависимости от предполагаемого содержания холина (1 – 5 мг холина)

 

На аналитических весах взвешивают 1 – 3гисследуемого растительного материала, в зависимости от предполагаемого содержания холина (1 – 5 мг холина), растирают в ступки с безводным фосфатом натрия до получения сухого порошка. Растертую массу количественно переносят в гильзу аппарата Сокслета, остаток на ступке собирают при помощи ваты, которую также помещают в гильзу. В аппарат Сокслета наливают 100 см³ абсолютного метилового спирта. Небольшими порциями метилового спирта 2 – 3 раза промывают пестик и ступку. Продолжительность экстракции до 20 ч, аппарат во время экстракции должен быть изолирован от влаги воздуха при помощи хлоркальциевой трубки. Экстрагирование проводят на водяной бане.

По окончании экстракции метиловый спирт отгоняют при пониженном давлении или при обычном, изолировав прибор от влаги воздуха (рисунок).

К сухому остатку после удаления растворителя прибавляют 30 см³ насыщенного раствора Ba(OH)₂ и омыляют на кипящей водяной бане около 2 ч. Смесь охлаждают, добавляют несколько капель тимолфталина и нейтрализуют ледяной уксусной кислотой до изменения цвета раствора.

 

 

 

Рисунок. Прибор для отгонки абсолютного метилового спирта

Раствор фильтруют на воронке Бюхнера через беззольный фильтр. Фильтр несколько раз промывают водой и все промывные воды вместе с фильтратом количественно переводят в мерную колбу емкостью 50 см³ и доводят водой до метки. Ко всему объему содержимого мерной колбы добавляют 6 см³ раствора соли Рейнике с массовой долей 2 % и оставляют на 3 ч в холодильнике. Выпадает осадок рейниката холина, который отфильтровывают на холоду через стеклянный фильтр № 2 или 1.

Колбу, в которой осаждался холин, споласкивают 3 раза 7 - 8 см³ охлажденной профильтрованной водой (со льда), насыщенной рейникатом холина. Осадок на фильтре промывают охлажденным профильтрованным спиртом, насыщенным рейникатом холина. После промывания осадок просушивают путем просасывания воздуха. Сухой осадок растворяют малыми порциями ацетон. Раствор рейниката холина переводят в мерную колбу емкостью 50 см³ и доводят ацетоном до метки. Одновременно таким же способом (исключая экстрагирование и омыление) готовят рейтинат холина из определенного количества стандартного раствора холинхлорида. Полученные растворы колориметрируют на фотоэлектроколориметре со светофильтрами с максимумом поглощения в диапазоне между 510 – 540 нм.

Содержание холина х, мг%, в исследуемом продукте вычисляют по формуле

 

где а – содержание холина в 1 см³ стандартного раствора, мг

(0, 08 мг);

h – оптическая плотность испытуемого раствора;

V – объем исследуемого раствора, см³ (50 см³);

100 –коэффициент пересчета в мг%;

b – навеска исследуемого продукта, г.

 

Контрольные вопросы и задания

 

1. На чем основан метод определение холина?

2. Напишите структурную формулу холина. К какой группе витаминов относится холин?

3. Какова потребность в холине взрослого человека? За счет чего она покрывается?

 

 

3. ФЕРМЕНТЫ

 

Ферменты – биологические катализаторы белковой природы. Ферментативная реакция протекает в две стадии: на первой образуется фермент-субстратный (ФС) комплекс, который на втором этапе распадается на фермент (Ф) и продукты (П) реакции:

Ф + С ® ФС ® Ф + П.

 

Особенности ферментов: высокая скорость реакции, обратимость действия, специфичность и лабильность к различным физико-химическим воздействиям. По типу катализируемой данным ферментом реакции ферменты подразделяются на 6 классов: оксидоредуктазы, трансферазы, гидролазы, лиазы, изомеразы, лигазы.

Активность ферментов зависит от реакции среды, температуры, химического состава субстрата, воздействия активаторов и ингибиторов и других факторов. Каждый фермент проявляет максимальную активность при оптимальных температуре и рН. Об активности фермента судят по скорости катализируемой химической реакции. Методы определения активности ферментов могут быть чисто химические (определение скорости накопления продукта реакции или убыли исходного вещества – субстрата), физико-химические (например, определение изменения оптической плотности раствора, происходящего в результате действия фермента) и другие.

С действием ферментов непосредственно связаны вопросы хранения и переработки сырья, качества готовой продукции, создания безотходных технологий и использования вторичных ресурсов. Ферментативные реакции составляют основу технологии пищевых продуктов, поэтому необходимо уметь выбирать наилучшие условия их действия.

 

Лабораторная работа № 19