Студопедия Главная Случайная страница Обратная связь

Разделы: Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

ТЕМЫ ДЛЯ РЕФЕРАТИВНЫХ СООБЩЕНИЙ. 1. Анаболические процессы, в которых принимают участие аминокислоты





1. Анаболические процессы, в которых принимают участие аминокислоты. Использование аминокислот в медицинской практике.

2. Аминоацидурии, виды, этиология и патогенез, клинические проявления, основы лечения.

Лабораторная работа 1

Определение активности аминотрансфераз
сыворотки крови

Принцип

В результате реакций трансаминирования, происходящих под действием аспартатаминотрансферазы (АсАТ, L‑аспартат:2‑оксоглутарат аминотрансфераза, КФ 2.6.1.1.) и аланинаминотрансферазы (АлАТ, L‑аланин:2‑оксо­глутарат аминотранфераза, КФ 2.6.1.2.), из аспарагиновой кислоты и аланина образуются, соответственно, оксалоацетат и пируват. Оксалоацетат, подвергаясь самопроизвольному декарбоксилированию, превращается в пируват. При добавлении кислого 2,4‑динитрофенил­гидразина ферментативная реакция останавливается и образуется гидразон пировиноградной кислоты. Последний в щелочной среде дает бурое окрашивание, интенсивность которого пропорциональна количеству образовавшейся пиро­виноградной кислоты.

Реактивы

1) Р-р субстрата АсАТ: смесь a‑кетоглутаровой кислоты и аспарагиновой кислоты, 2) р-р субстрата АлАТ: смесь a‑кетоглутаровой кислоты и аланина, 3) р-р 2,4‑динитрофенил­гидразина в 1,0 М HCl, 4) 0,4 М р-р NaOH.

Стандартный р-р пировиноградной кислоты, 0,1 ммоль/л.

Материал исследования

Сыворотка крови.

Проведение анализа

  Проба 1, стандартная, мл Проба 2, опытная для АлАТ, мл Проба 3, опытная для АсАТ, мл
Субстратный р‑р АлАТ 0,25 0,25 ––
Субстратный р‑р АсАТ –– –– 0,25
Стандартный раствор пировиноградной кислоты 0,05 –– ––
Сыворотка крови –– 0,05 0,05
  Инкубируют 30 минут при 37°С
2,4‑ДНФГ 0,25 0,25 0,25
  Инкубируют при комнатной температуре в течение 20 минут
NaOH 2,5 2,5 2,5
  Инкубируют при комнатной температуре в течение 10 минут. Колориметрируют опытные и стандартную пробы против воды при 540 нм (зеленый светофильтр)

Расчет

Активность АлАТ, ммоль/л·ч =

Активность АсАТ, ммоль/л·ч = , где

Ест, Еоп2, Еоп3 – соответственно оптическая плотность стандартной и опытных проб для АлАТ и АсАТ, Сст – концентрация стандартного раствора, 2 – коэффициент перевода 30 минут в 1 час.







Дата добавления: 2014-11-10; просмотров: 481. Нарушение авторских прав; Мы поможем в написании вашей работы!

Studopedia.info - Студопедия - 2014-2022 год . (0.015 сек.) русская версия | украинская версия