ТЕМЫ ДЛЯ РЕФЕРАТИВНЫХ СООБЩЕНИЙ. 1. Анаболические процессы, в которых принимают участие аминокислоты

1. Анаболические процессы, в которых принимают участие аминокислоты. Использование аминокислот в медицинской практике.

2. Аминоацидурии, виды, этиология и патогенез, клинические проявления, основы лечения.

Лабораторная работа 1

Определение активности аминотрансфераз
сыворотки крови

Принцип

В результате реакций трансаминирования, происходящих под действием аспартатаминотрансферазы (АсАТ, L‑ аспартат: 2‑ оксоглутарат аминотрансфераза, КФ 2.6.1.1.) и аланинаминотрансферазы (АлАТ, L‑ аланин: 2‑ оксо­глутарат аминотранфераза, КФ 2.6.1.2.), из аспарагиновой кислоты и аланина образуются, соответственно, оксалоацетат и пируват. Оксалоацетат, подвергаясь самопроизвольному декарбоксилированию, превращается в пируват. При добавлении кислого 2, 4‑ динитрофенил­гидразина ферментативная реакция останавливается и образуется гидразон пировиноградной кислоты. Последний в щелочной среде дает бурое окрашивание, интенсивность которого пропорциональна количеству образовавшейся пиро­виноградной кислоты.

Реактивы

1) Р-р субстрата АсАТ: смесь a‑ кетоглутаровой кислоты и аспарагиновой кислоты, 2) р-р субстрата АлАТ: смесь a‑ кетоглутаровой кислоты и аланина, 3) р-р 2, 4‑ динитрофенил­гидразина в 1, 0 М HCl, 4) 0, 4 М р-р NaOH.

Стандартный р-р пировиноградной кислоты, 0, 1 ммоль/л.

Материал исследования

Сыворотка крови.

Проведение анализа

	Проба 1, стандартная, мл	Проба 2, опытная для АлАТ, мл	Проба 3, опытная для АсАТ, мл
Субстратный р‑ р АлАТ	0, 25	0, 25	––
Субстратный р‑ р АсАТ	––	––	0, 25
Стандартный раствор пировиноградной кислоты	0, 05	––	––
Сыворотка крови	––	0, 05	0, 05
	Инкубируют 30 минут при 37°С
2, 4‑ ДНФГ	0, 25	0, 25	0, 25
	Инкубируют при комнатной температуре в течение 20 минут
NaOH	2, 5	2, 5	2, 5
	Инкубируют при комнатной температуре в течение 10 минут. Колориметрируют опытные и стандартную пробы против воды при 540 нм (зеленый светофильтр)

Расчет

Активность АлАТ, ммоль/л · ч =

Активность АсАТ, ммоль/л · ч = , где

Е_ст, Е_оп2, Е_оп3 – соответственно оптическая плотность стандартной и опытных проб для АлАТ и АсАТ, С_ст – концентрация стандартного раствора, 2 – коэффициент перевода 30 минут в 1 час.