ОТБОР НАПРАВЛЕНИЙ И ПОДГОТОВКА ПРОБ ДЛЯ ЛАБОРАТОРНОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

1. На исследование направляются те материалы, которые по предварительным данным санитарно – эпидемиологического расследования связаны с предполагаемой этиологией отравления.

2. Объектами исследования могут быть:

А) остатки подозреваемой пищи, употреблённой заболевшими, а так же исходные продукты, полуфабрикаты, которые использовались при её приготовлении;

Б) суточное пробы готовой пищи (если установлен порядок обязательного их хранения в детских учреждениях и др.) при обязательном условии их хранения на холоде;

В) рвотные массы, промывные воды, испражнения, моча пострадавших;

Г) кровь для получения гемокультуры и для постановки серологических реакций. При подозрении на ботулизм кровь берут до введения лечебной противоботулинистической сыворотки.

Д) Слизь из зева и носа, выделения гнойничковых поражений кожи персонала, занятого приготовлением пищи;

Е) Смывы и соскобы с инвентаря, оборудования, тары, рук персонала;

Ж) Вода питьевая из графина, питьевых бочков, резервуара и других точек;

З) Содержимое желудка, отрезок тонкого кишечника, паренхиматозные органы (печень, селезёнка), кровь из сердца, костный мозг, мезентериальные лимфатические узлы, желчь при летальных исходах заболевания.

3. Отбор проб для бактериологического исследования следует проводить в стерильные широкогорлые банки с притёртыми пробками, ёмкостью 200 – 300 мл. или закрываемые пергаментной бумагой, или обвязанные бичёвкой, либо резиновыми обхватками.

Отбор проб продуктов плотной консистенции или сыпучих можно выполнять путём затаривания в несколько слоёв стерильной пергаментной бумаги. Листы бумаги стерилизуются вместе со стеклянной посудой в сухожаровых шкафах, для чего складывают в виде консервов и завёртывают в несколько штук в общий пакет.

При отсутствии стерильной посуды отбор проб допускается в любые стаканы, металлические или стеклянные банки, предварительно подвергнутые кипячению в течении 15 минут. Обработка посуды дезинфицирующими веществами не допускается. Остатки консервов направляются на исследование непосредственно в той банке, из которой они использовались в пищу. При отсутствии остатков консервов, исследованию подлежит содержимое нескольких банок, с маркировкой, полностью идентичной маркировке вскрытой банки. Если в партии консервов одноимённой маркировки имеются бомбажные банки, их отбирают и исследуют в первую очередь. Маркировочные знаки, поставленные на донышке и крышке банок, регистрируют в лабораторном журнале с тем, чтобы в последствии использовать при оформлении протокола исследования.

4. Пищевые продукты для исследования изымают в количествах, указанных в «правилах выемки проб пищевых продуктов, напитков и вкусовых веществ», утверждённых Главным государственным санитарным инспектором СССР 2 сентября 1949 года. В тех случаях, когда это не выполнимо, отбор проб производят в количествах менее установленных.

Мясо берут для анализов в количестве 500 грамм, при этом пробу отбирают из различных мест туши с обязательным взятием мезентериальных лимфатических узлов, а так же участков трубчатой кости. Если возможно, то следует от животных кровь отбирать из сердца, содержимое кишечника, желчь и стенки желчного пузыря. Для исследования могут быть использованы смывы с поверхности туши. Птицу берут целой тушкой или её остатки, включая анальное отверстие. Мелкую рыбу отбирают в количестве 2 – 3 штук, от крупной рыбы 2 – 3 куска, в том числе из спинки, ближе к голове и из участков в близи анального отверстия.

Солонину и солёные продукты, находящиеся в бочечной таре, берут сверху, из середины и со дна бочки. В отдельную посуду набирают 100 – 200 мл. рассола.

Пробы жидких и полужидких объектов (супы, соусы, кремы, молочные продукты) отбирают после тщательного перемешивания в количестве около 200 грамм.

Молочные продукты заводского изготовления отбирают в оригинальной упаковке.

Для вторых блюд норма выемки 1 – 2 порции.

Суточные пробы направляют для исследования непосредственно в той посуде, в которой они хранились в холодильнике.

Остатки практически употреблённой пищи берут для анализа непосредственно в той посуде, в которой они были обнаружены. Допускается их доставка так же в стерильных банках, куда остатки пищи должны быть перемещены с соблюдением правил асептики.

5. Пробы испражнений отбирают из последней, более жидкой порции, поступающей из верхних отделов кишечника. Наиболее полноценным материалом исследования являются испражнения собранные непосредственно после дефекации в количестве 5 – 10 грамм.

При наличии в испражнениях слизи, гноя или крови их необходимо включать в отбираемый материал.

Отбирать пробы необходимо стерильными деревянными шпателями или стеклянными палочками, вмонтированными в ватные пробки пробирок, из судна, горшка, специального лотка или пелёнки.

Испражнения можно забирать и непосредственно из прямой кишки с помощью ректальной трубки.

При отсутствии возможности немедленного посева собранные порции испражнения или ректальной трубки с материалом помещают в пробирки с консервирующим раствором. В качестве консервата лучше всего применять глицериновую смесь (рн 7,2 – 7,4). Соотношение испражнений и консерванта должно быть 1:5.

6. Рвотные массы отбирают в количестве 50 – 100 мл., но могут быть взяты и в меньшем количестве; прмывные воды – в количестве 100 – 200 мл., причём они должны быть взяты от каждого пострадавшего отдельно до применения каких – либо лекарственных средств. Нежелательно собирать промывные воды желудка от нескольких больных в одну посуду. Консервирующие вещества добавлять нельзя.

7. Кровь у заболевших забирают из локтевой вены в стерильную сухую пробирку в количестве не менее 8 – 10 мл. Допускается брать кровь с 4% раствором лимоннокислого натрия в соотношении 1:3, но цитратную кровь при постановке биологической пробы можно вводить мышам только внутрибрюшинно.

8. Пробу мочи на исследование берут в количестве 20 – 30 мл. в стерильную посуду (банки, флаконы) с соблюдением необходимых условий исключающих внесение посторонней флоры.

9. Желчь и содержимое ДПК берут на исследование при помощи дуоденального зонда. Зондирование производят в лечебном учреждении или бактерионосительском пункте СЭС. Возможность применения этого метода исследования в каждом конкретном случае решается клиницистом строго индивидуально.

10. Пунктат воспалительных очагов (гной. эксудат) собирают в стерильные пробирки.

11. Для проведения анализа спиномозговой жидкости последняя должна быть взята в стерильную пробирку в количестве 5 – 10 мл.

12. При контроле поверхности инвентаря, оборудования, различной утвари и рук, их тщательно протирают ватным тампоном на стеклянной или деревянной палочке, или небольшими марлевыми салфетками 5*5 см. Для увлажнения тампона используют стерильный физиологический р – р или водопроводную воду в количестве 2 мл., тампоны необходимо увлажнять непосредственно перед взятием смывов.

При обработке жирной поверхности следует пользоваться сухими тампонами.

13. Соскобы необходимо производить стерильно или прокалённой в пламени горелки ножом или скальпелем. Их собирают в стерильную банку или чашку Петри с небольшим количеством (2 – 3 мл.) физ. р – ра.

14. Выемку проб воды производят в количестве не менее 1 литра. Указанное количество воды обеспечит проведение санитарного анализа и соответствующих посевов для выявления патогенных энтеробактерий.

При необходимости обследования воды из графина, её можно доставлять в лабораторию непосредственно в графине.

15. Забор материала из зева и носа производят стерильными ватными тампонами, укреплённым на металлической палочке.

16. Пробы из секционного материала забирают в количестве 50 – 60 грамм каждого органа или ткани. Взятие пробы необходимо производить в стерильных условиях: поверхности органов прижигают раскалённым шпателем, кусочки вырезают из глубины стерильными ножницами.

Из желудка и кишечника содержимое забирают пастеровской пипеткой путём прокола их стенки. Место прокола предварительно прижигают раскалённым шпателем. Пробы от каждого органа необходимо помещать в отдельную стерильную банку, желательно с притёртой пробкой.

17. При необходимости обследования животных, подлежащий исследованию материал: кровь, моча, испражнения, секционный материал (в случае гибели или вынужденного забоя), забирают так же как и от людей.

18. На пробы накладывают этикетки, пробы номеруются, опечатывают сургучной печатью или пломбируют и упаковывают так, чтобы гарантировать целостность материала, исключить возможность осеменения или распространения инфекции. На каждой банке должна быть сделана наклейка с надписью: рвотные массы (первичные, повторные), промывные воды (первичные, повторные) и др. Обязательно на каждой наклейке указать фамилию, имя, отчество больного, дату взятия пробы.

19. Пересылку проб в лабораторию следует производить в кратчайший срок, так как время для забора проб до начала исследований может отразиться на достоверности результата анализа. Если взятые на бактериологическое исследование пробы не могут быть доставлены в лабораторию немедленно, их разрешается хранить в холодильнике при температуре 4 – 6 градусов не более 1 суток.

В тёплое время года пробы должны доставляться в охлаждённом виде, в ящике со льдом. В холодное время года доставляемый в лабораторию материал следует предохранить от замерзания.

20. В лабораторию пробы доставляются в опечатанном виде. Вид упаковки, в которой доставлена в лабораторию проба на исследование, отмечается в соответствующем журнале.

21. В сопроводительном документе к материалу от заболевшего (умершего) указывается: фамилия, имя, отчество, возраст обследуемого или умершего, если препровождается секционным материалом, адрес, место работы, должность (для ребёнка необходимо указать посещает ли он детское учреждение и какое), дата заболевания, диагноз или показания к обследованию, дата и время сбора материала, фамилия, должность лица, направившего материал.

22. При направлении в лабораторию пищевых продуктов в сопроводительном документе необходимо указать:

А) наименование предприятия или учреждения, где произведены выемки проб, его адрес, перечень проб с указанием их веса, характера тары и упаковки (стерильность посуды, охлаждение проб, наличие печати и т.д.), дату час выемки и отправления в лабораторию;

Б) основные данные санитарно – эпидемиологического обследования: дата пищевого отравления, срок появления симптомов заболевания после приёма подозреваемой пищи, описание клинических явлений у заболевших, число пострадавших, госпитализированных, наличие случаев со смертельным исходом, предварительный диагноз;

В) при направлении проб нескольких продуктов, необходимо отметить, какой из них подозревается, как причина пищевого отравления;

Г) цель исследования;

Д) должность и подпись лица, произведшего выемку и направившего пробы в лабораторию.

23. При направлении в лабораторию материала, взятого с животных, указывается: его наименование, дата забора пробы, вид животного, его возраст (молодняк, взрослые), название и адрес хозяйства или предприятия из которого направляется материал и повод для его обследования.

24. При приёме проб лаборатория должна выдать расписку и указать время получения проб.

25. Исследование материалов доставленных в лабораторию в процессе расследования пищевого отравления, производится немедленно по их получению. Во время регистрации доставленного в лабораторию материала последний храниться в холодильнике.

26. Непосредственно перед посевом исполнителю необходимо ознакомиться с состоянием упаковки всего материала и каждой отдельной пробы, при этом обратить внимание на целостность упаковки, наличие пломб и печатей, отметить количество доставленного материала.

В связи с тем, что большинство проб направляют в лабораторию для бактериологического и химического исследованию, указанный выше осмотр можно проводить совместно с химической лабораторией.

Необходимо перед анализом отметить органолептические качества доставленных проб: внешний вид, запах, консистенция.

27. Продукты подвергают бактериологическому исследованию независимо от признаков порчи.

28. Бактериологическое исследование пробы начинают с подготовки навески, которая должна охарактеризовывать всю доставленную пробу. Материал для навески продуктов плотной консистенции (мясо, колбаса и др.) берут из разных мест доставленной пробы: с поверхности и из глубины. Если это тушка птицы – из мест прилегающих к кишечнику, если рыба – вблизи жаберных дужек и анального отверстия.

Возможно использование для приготовления навески всей туши доставленной пробы, если даже её вес достигает 500 – 800 грамм. Имеет определённое значение исследование навески, состоящей из кусочков, отобранных только из глубины доставленной пробы. В этом случае при отборе материалов для навески производят стерилизацию металлическим шпателем или ножом.

Возможно исследование навески продукта, состоящей из кусочков, отобранных только из поверхностных слоёв пробы, т.к. это позволяет установить вторичное загрязнение продукта. В этом случае небольшие кусочки пищевых продуктов засевают непосредственно, при этом поверхность пробы не обжигают раскалённым шпателем или ножом, т.к. это может привести к уничтожению патогенной флоры.

Навеска продукта должна быть не менее 25 – 30 грамм.

29. Стерильно взятую навеску продукта плотной консистенции перед посевом гомогенизируют с небольшим количеством 0,1% пептонной воды или питательной среды в соотношении от 1:2 до 1:5, в зависимости от консистенции исследуемого продукта. Для получения однородного гомогенизированного посевного материала рекомендуется пользоваться гомогенизатором (размельчителем ткани) РТ – 1 Одесского завода.

При отсутствии гомогенизатора навеску продукта нарезают мелкими кусочками, помещают в стерильную банку, добавляют необходимое количество 0,1% пептонной воды и подвергают встряхиванию в течении 10 – 15 минут в аппарате для встряхивания.

30. Крем, масло сливочное, мороженное и т.п. перед посевом подвергают расплавлению. Для этого навеску в количестве 25 – 30 грамм отбирают в стерильную стеклянную банку и помещают либо в термостат при температуре 43 градуса, либо в водяную баню при той же температуре. После расплавления производят посев, причём при посевах масла и сливочного крема необходимо использовать нижний слой.

31. Костный мозг перед посевом извлекают из трубчатых костей и эмульгируют в подогретом до 43 градусов в физ. р – ре.

32. Жидкие объекты (молоко, напитки, супы, промывные воды) засевают без предварительной обработки. Пищевые продукты, имеющие кислую реакцию, а так же рвотные массы, перед посевом нейтрализуют 10% стерильным р – ром двууглекислого натрия до слабощелочной реакции (рн 7,2 – 7,4). Реакцию среды проверяют по универсальной индикаторной или лакмусовой бумажке.

33. Невскрытые консервы в банках перед посевом осматривают, отмечают внешний вид, наличие бомбажа, ржавчины и т.п., затем обмывают тёплой водой с мылом и проверяют на герметичность арбитажным способом (ГОСТ10444 - 63). Непосредственно перед посевом, банки протирают спиртом, а крышки обжигают.

34. Посев испражнений, если они доставлены в ректальных трубках, производиться без предварительной подготовки.

Если испражнения были доставлены в лабораторию без консерванта, то их перед посевом суспензируют в физ. р – ре в соотношении 1:10.

35. Для получения гемокультуры производят посев сгустка крови на соответствующие питательные среды в зависимости от цели исследования. Постановку серологической реакции производят с сывороткой крови. С целью лучшего формирования сгустка кровь выдерживают 30 – 40 минут при комнатной температуре или в термостате при 37 градусах, после чего стерильной пастеровской пипеткой или прокалённой петлёй отделяют сгусток от стенок пробирки и помещают в холодильник при 5 – 8 градусах для окончательного формирования сгустка; сыворотку отсасывают и используют для постановки серологических реакций, а кровяной сгусток используют для посева.

36. Ватные тампоны на стеклянных или деревянных палочках или марлевые салфетки перед посевом должны быть тщательно отмыты в жидкости, используемой для увлажнения тампона, в момент взятия смывов.

37. Посевным материалом является вся жидкость, используемая при производстве смывов. Кроме того посев может быть произведён непосредственно тампоном на плотные или жидкие дифференциальные среды. При этом существенное значение имеет тщательное растирание материала досуха по всей поверхности плотной среды.

38. Изложенная выше методика подготовки проб к посеву дополняется отдельными методическими приёмами, указанными в соответствующих разделах настоящей инструкции.

Необходимо отметить, что как правило, направление бактериологических исследований определяется клинической картиной заболевания и данными эпидемиологических исследований с учётом возможного выявления других, приведённых в настоящей инструкции возбудителей пищевых отравлений.