Студопедия Главная Случайная страница Обратная связь

Разделы: Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

Определение мышления (далее М.). Виды М. Основные подходы к М




skype: Laktysev_Victor,

моб.: +375 29 3943349, Виктор

 

6.

Таксономия-наука, кт занимается вопросами классиф, номенклатурой и иден­тификацией миробов. Задачей явл объедин-е микробов с общими св-ми в опред-е гр - токсоны.

Номенклатура- система,кт применятся в определенной области знаний.Идентифика-ция-отнесение микробов к определенному токсону (виду) на основании конкретных признаков. Чтобы отнести микроб к определ виду нужно определить основные его призна­ки (морфология, окраска по Грамму, наличие капсул, способность к образ-ю эндоспор). В классиф для груп-вания родств-х орг-змов имеют следующ категории : царство, отдел, секция, класс, порядок, семейство, род, вид. В микроб-ии для обознач-я видов бактерий принята двойная номенклатура: 1 слово на­звание рода, хар-ет морфологию или физиолог признак, либо фамилию ученого; 2 слово обозначает видовое название микроба, пред-ет собой производное от сущест-ого, дающего описание цвета колонии, вызыв-го им процес­са или болезнь. Примерbacillusantracis-сибиреязвенная палочка. Основной номенкла­турной ед-ей явл вид- совокупность микроорг, имеющих единое происхождение и генотип, сходных по биол-м и морфология признакам, обладающих способностью вызывать опред-ный специф процесс. Вид подразд-ся на под­виды-микробы отлич-ся отклонениями от типовых, видовых св-в.

ШТАММ – объединяет микроорганизмы одного и того же вида, но выделенные из различных источников или даже из одного и того же источника, но в разное время. Штаммы одного вида могут быть абсолютно идентичными или различаться по отдельным признакам, нпр., по способности ферментировать к.-л. сахар, по устойчивости к к.-л. антибиотику и т.д.

КОЛОНИЯ – изолированные скопления клеток, образующиеся на поверхности плотных пит. сред.

КЛОН – это культура микроорганизмов, полученная из единичной клетки, которая размножилась и дала начало целой популяции.

ЧИСТАЯ КУЛЬТУРА – популяция микробов. состоящая из особей одного вида.

7.

Грибы (Myces) относятся к эукариотам. Грибов в природе огромное количество и только небольшая их часть вызывает заболевания животных и человека. Основной структурный элемент грибов – гифы - нитевидные структуры, переплетающиеся между собой. В результате переплетения гиф образуется мицелий. Грибы в лабораторных условиях культивируются на специальных питательных средах, где образуют мицелий как поверхностный(воздушный), так и субстратный.

Грибы размножаются спорами бесполым путем. Высшие грибы размножаются половым путем: 2 споры сливаются, образуя зиготу. По образованию спор грибы делятся на низшие и высшие. У низших грибов помимо особенности спорообразования мицелий одноклеточный несегментированный. У высших грибов мицелий делится перегородками на отдельные клетки. В перегородках находятся отверстия.

У низших грибов споры образуются в специальных закрытых спорангиях. Споры, закрытые оболочкой спорангия, называются эндоспорами. У высших грибов экзоспоры- соприкасаются с внешней средой.

Артроспоры - гиф мицелия начинает дробиться и каждый образующийся при этом фрагмент дает начало новому мицелию.

Хламидоспоры - на концах в местах сочленения мицелия образуются выпуклости, одна из которых утолщается и превращается в спору.

Бластоспоры - характерны для дрожжевого грибка. От материнской клетки отпочковываются дочерние.

Аскоспоры - это половые споры, не образующие мицелий.

Классы грибов:

- Овомицеты.

- Аскомицеты (сумчатые).

- Базидиомицеты.

- Несовершенные грибы или дейтеромицеты.

Патогенность грибов.

Грибы у человека способны вызывать микозы, как поверхностные (поражения кожи, ногтей, волос), так и глубокие (мышцы, клетчатка). Грибы могут вызывать системные поражения. Криптокиккоз - заболевания, вызываемые грибком на фоне ВИЧ-инфекции (в 30% случаев). Заболевание вызывает Cryptococcus. Он имеет дрожжеподобные клетки размером 4- 20 мкм. Образует бластоспоры. Нитчатые формы отсутствуют. Может образовывать капсулу.

Blastomyces вызывает бластомикоз. Встречается в двух формах - висцеральный и кожный. В тканях определяются довольно крупные дрожжеподобные клетки.

Candida - входит в состав нормальной микрофлоры. У маленьких детей часто наблюдается кандидоз полости рта - молочница. Активизируются на фоне иммунодефицита.

Hystoplasma - Гистоплазма - вызывает гистоплазмоз. В клетках, тканях образует одноклеточные образования округлой или грушевидной формы. Образует бласто- и хламидоспоры. На питательных средах дает воздушный мицелий.

Coccidioides вызывают системное заболевание кокцидиоз, острая форма напоминает грипп. При хронической форме поражается костная ткань. Образует эндоспоры. На питательных средах образует воздушный мицелий. Часто встречается на фоне ВИЧ-инфекции.

16. Морфологическая характеристика актиномицетов.

Actinomyces - Актиномицеты - Лучистые грибы. Неистинные грибы. Относятся к почвенным бактериям. При своем росте образуют структуры, напоминающие мицелий грибов, т.е. они являются промежуточной формой микроорганизмов. С грибами их роднит мицелиообразование и спорообразования (бласто- , артро- и хламидоспоры). С бактериями - обитают в почве, Гр+, видны под световым микроскопом с иммерсией. Имеют ядерный материал, ЦПМ, клеточную стенку. Делятся обычным делением и спорами. На питательных средах образуют нечто похожее на субстратный мицелий. Выделяют 3 группы:

1) Псевдоактиномицеты - некоторые бактериальные формы, например микобактерии туберкулеза, бифидобактерии. Для этой группы характерна удлиненная форма и специфическое деление.

2) Проактиномицеты. У этих микроорганизмов сохраняется мицелий, образуют артроспоры. К ним относятся Nocardia- вызывают нокардиоз.

3) Эуактиномицеты - истинные лучистые грибки. Представитель - род Sthreptomyces. Образуют истинный мицелий, артроспоры. Могут образовывать спорангии (стрептоспорангии), экзоспоры по типу высших грибов. Эта группа дает до 95% антибиотиков.

8.

Ферменты участвуют во всех обменных процессах. Ферменты делятся на экзоферменты, которые выделяются в окружающую среду, где они расщепляют питательные вещества. Эти вещества поступают внутрь клетки, где расщепляются эндоферментами.

По постоянству действия:

- Ферменты, постоянно участвующие в обменных процессах - конституитивные. Они принимают активное участие в синтезе структурных компонентов.

- Ферменты, действующие только при наличии субстрата – адаптационные: ферменты транспорта и катаболизма лактозы – галактоздпермиаза, b-галактозидаза, галактозидацетилтрансфераза.

В целях диагностики определяют такие ферменты моргов: лецитиназа, уреаза, сахараза, мальтаза, гиалуронидаза,

Ферменты патогенности:

1) гиалуронидаза – расщепляет ГАГ (матрикс соедин. ткани), что облегчает механическое продвижение по ткани

2) уреаза – расщепляет мочевину с образованием аммиака, что помогает выжить в очень кислой среде

3) гемагглютинины – запускают агглютинацию крови, что создает благоприятные условия для роста и размножения моргов.

4) лецитиназа – расщепляет желток куриного яйца

5) пенициллаза – расщепляет пенициллин (первый антибиотик)

9.

Среды для определения сахаролитической активности микробов. Для выявления способности микробов ферментировать различные углеводы применяют жидкие, полужидкие и плотные питательные среды с набором необходимых углеводов и индикаторов (кислый фуксин, лакмус, бромтимолблау, нейтральрот, индикатор Андреде). Такие среды называются пестрым рядом, или цветными средами. С их помощью изучают отношение микробов к различным углеводам. Эти среды не оказывают угнетающего действия на жизнедеятельность микроорганизмов.

Патогенные виды микробов ферментируют углеводы неодинаково. Одни бактерии ферментируют глюкозу, но не разлагают лактозу, другие ферментируют лактозу и глюкозу, но не разлагают сахарозу. Некоторые бактерии разлагают глюкозу с образованием кислоты и газа, а другие ― только с образованием кислоты, но без газа.

Для идентификации возбудителей кишечных заболеваний широко применяют цветной ряд, состоящий из сред с глюкозой, лактозой, мальтозой, маннитом, сахарозой (среды Гисса), иногда дополняют его молоком и молочной сывороткой.

Бактериальные колонии и их характеристика. На плотных питательных средах развивающиеся бактерии образуют видимые не-1 вооруженным глазом скопления ― колонии. Колония представляет собой потомство одной микробной клетки. Внешний вид колоний,

выросших на агаре в чашке Петри, характерен для каждого вида микробов и ориентировочно может служить его диагностическим признаком.

Формы колоний. Наблюдая колонии через лупу или окуляр, можно заметить различные формы: круглые, плоские. Формообразование зависит от видовых особенностей бактерий, от состава питательной среды, физико-химических свойств, методов посева и культивирования. Края колоний могут быть ровные, зубчатые, волнистые, лучистые, фестончатые.

Структура Колонии изучается при помощи лупы или микроскопа со слабым увеличением, сухой системой при суженной диафрагме или несколько спущенном конденсоре. Для этого чашку помещают на столик дном вверх, передвигая ее, отмечают колонии различной структуры ― гомогенной, гиалиновой, зернистой, аморфной.

Величина колонии: крупная, мелкая, точечная. Цвет: окрашенная или бесцветная. Поверхность: гладкая, морщинистая, влажная, сухая, слизистая, блестящая, тусклая.

Консистенция колонии: плотная, рыхлая, слизистая, вязкая, волокнистая.

Бактериальные колонии, как правило, образуются на поверхности питательной среды и легко от нее отделяются.

Интенсивность размножения бактериальных клеток и их расположение после деления оказывают влияние на структурные изменения колоний. По характеру деления бактериальные культуры делятся на образующие петли, складки, изломы и скольжения.

Для петлеобразуюЩих характерно то, что из длинных бактериальных нитей и цепочек появляются колонии ― клубки с большим количеством отростков. К ним относятся сибиреязвенные палочки. Бактерии, образующие при делении складки, дают неровные колонии с неправильными краями, особенно чумная палочка.

Микробы, дающие изломы основных нитей деления, располагаются под углом друг к другу и образуют приподнятые бугристые шероховатые колонии, характерные для микобактёрии и дифтерийной палочки.

При скольжении бактериальные клетки располагаются параллельно оси деления и дают гомогенные прозрачные колонии с ровными краями, свойственными для синегнойной и кишечной палочек.

Культуры грибов разнообразны. По размерам их колонии значительно превосходят бактериальные и дрожжевые. Колонии грибов обычно закрывают всю поверхность питательной среды. Консистенция колонии бывает войлокообразноп, кожистой, а поверхность колонии ― пушистой или бархатистой. Грибы глубоко внедряются в питательную среду, образуя в ней, как правило, войлокообразиое сплетение.

 

10.

Среды для определения протеолитической активности микробов.

Существуют различные питательные среды, применяемые для определения протеолитической активности микробов. Для этой, цели используют жела т и н о в у ю с р е д у. Посев культуры производят уколом в столбик желатиновой среды, выращивают ее при температуре 22°. Если микробы выделяют фермент желатика-зу, то происходит разжижение среды.

Образование сероводорода также является диагностическим признаком. При выращивании микробов на белковых средах, состоящих из аминокислот (цистии, метионин), происходит расщепление белков и в результате этого образуется сероводород. Для обнаружения сероводорода фильтровальную бумагу предварительно пропитывают раствором основного уксуснокислого свинца, затем, высушив на воздухе, разрезают на мелкие полоски шириной 1 см и, укрепив ее между пробкой и стенкой пробирки, ставят в термостат. Почернение нижнего конца бумажки через сутки указывает на присутствие сероводорода (ввиду образования сернистого свинца).

И н д о л о о б р а з о в а н и е является важным диагностическим признаком. Индол представляет собой продукт расщепления белка под действием фермента триптофаназы. Для определения индола широко применяется проба с фильтровальными бумажками, пропитанными насыщенным водным раствором щавелевой кислоты и высушенными. Полоску бумажки закрепляют между стенкой пробирки и ее пробкой, не допуская соприкосновения бумажки со средой. Засеянная пробирка помещается в термостат. При наличии индола нижний конец бумажки окрашивается в розовый цвет.

Культивирование микробов на среде с мочевиной.. Ряд микробов использует мочевину в качестве источника азота. Мочевина расщепляется ферментом уреазой, в результате чего образуется аммиак. Этими свойствами обладают палочки Гофмана, протей, кишечные бактерии и палочка Моргана (непостоянно). К нерасщепляющим мочевину относятся: тифо-паратифозные, дизентерийные бактерии, возбудители коклюша, туляремии, туберкулезные микобактерии и др.

11.

В процессе обмена в-в мкÒ постоянно нуждаются в притоке энергии. Она освобождается при ок-ии пит в-в и в виде АТФ исп-ся клеткой. Сущность ок-я закл-ся в переносе электронов и протонов от донора к акцептору. У мкÒ чаще происходит отщепление 2 атомов Н (дегидрирование) от акцептора при участии ДГ. Биол ок-е может проходить как при участии О2, так и без него. По отношению к О2 выделяют следующие группы мкÒ:

1) ОБЛИГАТНЫЕ АЭРОБЫ. Способны плч энергию путём дыхания. Причём обязательно нуждаются в О2, который используют в качестве конечного акцептора водорода.

2) ОБЛИГАТНЫЕ АНАЭРОБЫ. Процессы биол ок-я протекают у них по типу брожения, а расти и размножаться они могут только в бескислородных условиях, в присутствии О2 гибнут. Конечным акцептором водорода являются орг соед-я – чаще всего восстанавливается ПВК.

3) ФАКУЛЬТАТИВНЫЕ АНАЭРОБЫ. Могут расти и размножаться и в присутствии и в отсутствии О2, т.к. их ферментная система способна переключаться с одного типа дыхания на другой.

4) МИКРОАЭРОФИЛЫ. Лучше растут при низком содержании О2 и повышенном СО2 («капнофильные мкÒ»).

5) АЭРОТОЛЕРАНТНЫЕ. Могут выживать в присутствии атмосферного кислорода, но не могут использовать его в качестве конечного акцептора водорода (например, молочнокислые бактерии – бродильный метаболизм).

Т.о, факультативные анаэробы выращивают при пониженном содержании кислорода, облигатные – при полном его отсутствии, что достигается путем посева материалов внутрь жидкой или полутвердой питательной среды.

Условия культивирования. Наиболее пригодной для выращивания бактерий–анаэробов является среда Китта–Тароцци (среда обогащения), состоящая из концентрированного МПБ, глюкозы и агара. На дно пробирки для адсорбции кислорода помещают кусочки вареной печени или фарша слоем 1,0–1,5 см и заливают 6–7 мл среды. Перед посевом среду кипятят 10–15 мин для удаления воздуха, затем быстро охлаждают, а после посева заливают стерильным вазелиновым маслом. Материал, содержащий спороносные анаэробы, высевают в две пробирки со средой Китта–Тароцци, одну из них прогревают 30 мин при температуре 80°С для уничтожения вегетативных форм сопутствующей микрофлоры.

Посевы на поверхности плотных сред, разлитых в чашки Петри, культивируют в макро– или микроанаэростате.

Макроанаэростат представляет собой двухстенный аппарат с крышкой. Между стенками аппарата находится вода, источником тепла служит электричество, терморегулятор обеспечивает постоянную температуру. Посевы помещают в анаэростат после того, как температура в нем будет доведена до 37°С, и герметически закрывают крышкой. Анаэростат соединяют с вакуум–насосом и, выкачивая воздух, создают вакуум 3–5 мм. Посевы инкубируют в анаэростате обычно в течение 48 ч. Имеются также портативные анаэростаты. Это небольшие металлические цилиндры с герметически закрывающейся крышкой, постоянная температура в которых создается при помещении их в термостат.

Особенности выделения бактерий–анаэробов. В первый день исследуемый материал микроскопируют и высевают в среду Китта–Тароцци градуированной или пастеровской пипеткой, прогревают при температуре 80°С в течение 30 мин, заливают вазелиновым маслом и посевы помещают в термостат. На второй день помутневшую (нередко вспенившуюся) среду обогащения набирают пастеровской пипеткой, которую опускают через слой вазелинового масла до дна пробирки.

Выделенную культуру микроскопируют и пересевают на плотные питательные среды. Изолированные колонии получают последовательным засевом шпателем бульонной культуры в три чашки Петри с кровяно–сахарным агаром. Чашки Петри помещают в анаэростат при температуре 37°С на 24–48 ч или культуру засевают в столбики расплавленных и остуженных сахарных агаров после предварительного разведения в изотоническом растворе натрия хлорида. На третьи сутки изучают выросшие на чашках Петри колонии (или извлекают колонии из столбиков агара), делают из них мазки, высевают на среду Китта–Тароцци для обогащения чистой культуры.

Чтобы установить видовую принадлежность выделенной культуры бактерий, кроме изучения морфологических, тинкториальных и культуральных особенностей, необходимо определить на ряде Гисса их ферментативные свойства.

Т.о, используют следующие методы получения анаэробных условий:

- ФИЗИЧЕСКИЙ (анаэростат)

- ХИМИЧЕСКИЙ (оксикатор, сорбент – пирогаллол)

- БИОЛОГИЧЕСКИЙ

- Метод ФОРТНЕРА – чашку петри пополам, заливают парафином

- Метод ЧАСОВЫХ СТЁКОЛ – выпуклое засевают аэробами.

- с использованием спец. пит. сред

- уколом в среду ВИЛЬСОН–БЛЕРА (колонии чёрные)

- в стеклянной трубке.

12.

По способу питания микроорганизмы разделяют на аутотрофные и гетеротрофные.

Аутотрофы способны синтезировать из неорганических веществ (в основном углекислого газа, неорганического азота и воды) органические соединения. В качестве источника энергии для синтеза эти микробы используют световую энергию (фотосинтез) или энергию окислительных реакций (хемосинтез).

Гетеротрофы используют для питания в основном готовые органические соединения. Микробы, питающиеся органическими веществами отмерших животных или растительных организмов, называютсапрофитами. К ним относятся бактерии гниения, грибы и дрожжи.Паратрофные микроорганизмы, или паразиты, живут за счет питательных веществ живых клеток организма хозяина. К паратрофам относится большинство болезнетворных микробов.

 

13.

Поток вещества включает процессы поступления питательных веществ (процесс питания), переваривания (расщепление сложных молекул на простые) и дыхания (окисление органических веществ с высвобождением энергии и аккумулированием ее в виде АТФ).

Различают голозойный (поглощение питательных веществ в виде твердых частиц, переваривание в специальных пищеварительных органах, у животных) и голофитный (всасывание через поверхность в виде растворов, у растений, грибов и бактерий) способы питания. Затем питательные вещества должны поступить в клетки.

Механизмы поступления питательных веществ в клетку могут быть следующими.

1. Пассивная (простая) диффузия – за счет разности концентраций веществ в клетке и в среде (очень редко, только вода, кислород и некоторые ионы, чаще другой механизм – облегченная диффузия).

2. Облегченная диффузия – тоже за счет разности концентраций, но с использованием специальных ферментов-переносчиков в мембране (транслоказ), выход продуктов метаболизма осуществляется так же.

3. Активный транспорт (АТ) - против градиента концентраций, с использованием ферментов-переносчиков и затратой энергии, на 1 молекулу перенесенного вещества затрачивается энергия 1 молекулы АТФ. Различают первичный АТ с использованием химической энергии и вторичный АТ с использованием энергии протонного потенциала (симпорт, антипорт, унипорт). Некоторые вещества (фруктоза, глюкоза) проникают в клетку в химически модифицированном виде, обычно в виде фосфатного эфира (транслокация). Пример АТ – натрий-калиевый насос. Внутри клетки больше ионов К+, в окружающей среде – ионов натрия, чтобы поддерживать такое равновесие постоянно работают механизмы избирательного переноса ионов К.

4. Транспорт в мембранной оболочке – фагоцитоз (захват мембраной и переваривание твердых частиц, а затем проникновение в клетку), пиноцитоз (захват мембраной капель растворенного вещества). Используется некоторыми типами животных эукариотических клеток.

По типу питания (точнее, по источнику углерода) все организмы делятся на:

· автотрофы – использующие неорганический источник (СО2) и самостоятельно синтезирующие органические вещества;

· гетеротрофы – используют органические источники углерода;

· миксотрофы – смешанный тип.

 

14.

Жизнедеятельность бактерий характеризуется ростом — формированием структурно-функциональных компонентов клетки и увеличением самой бактериальной клетки, а также размножением — самовоспроизведением, приводящим к увеличению количества бактериальных клеток в популяции.

Бактерии размножаются путем бинарного деления пополам, реже путем почкования. Актиномицеты, как и грибы, могут размножаться спорами. Актиномицеты, являясь ветвящимися бактериями, размножаются путем фрагментации нитевидных клеток. Грамположительные бактерии делятся путем врастания синтезирующихся перегородок деления внутрь клетки, а грамотрицательные — путем перетяжки, в результате образования гантелевидных фигур, из которых образуются две одинаковые клетки.

Делению клеток предшествует репликация бактериальной хромосомы по полуконсервативному типу (двуспиральная цепь ДНК раскрывается и каждая нить достраивается комплементарной нитью), приводящая к удвоению молекул ДНК бактериального ядра — нуклеоида.

Репликация ДНК происходит в три этапа: инициация, элонгация, или рост цепи, и терминация.

Размножение бактерий в жидкой питательной среде.Бактерии, засеянные в определенный, не изменяющийся объем питательной среды, размножаясь, потребляют питательные элементы, что приводит в дальнейшем к истощению питательной среды и прекращению роста бактерий. Культивирование бактерий в такой системе называют периодическим культивированием, а культуру — периодической. Если же условия культивирования поддерживаются путем непрерывной подачи свежей питательной среды и оттока такого же объема культуральной жидкости, то такое культивирование называется непрерывным, а культура — непрерывной.

При выращивании бактерий на жидкой питательной среде наблюдается придонный, диффузный или поверхностный (в виде пленки) рост культуры. Рост периодической культуры бактерий, выращиваемых на жидкой питательной среде, подразделяют на несколько фаз, или периодов:

1.лаг-фаза;

2.фаза логарифмического роста;

3.фаза стационарного роста, или максимальной концентрации бактерий;

4.фаза гибели бактерий.

Эти фазы можно изобразить графически в виде отрезков кривой размножения бактерий, отражающей зависимость логариф­ма числа живых клеток от времени их культивирования.

Лаг-фаза — период между по­севом бактерий и началом размножения. Продолжительность лаг-фазы в среднем 4—5 ч. Бактерии при этом увеличиваются в размерах и готовятся к делению; нарастает количество нуклеиновых кислот, белка и других компонентов.

Фаза логарифмического (экспоненциального) роста является периодом интенсивного деления бактерий. Продолжительность ее около 5— 6 ч. При оптимальных условиях роста бактерии могут делиться каждые 20—40 мин. Во время этой фазы бактерии наиболее ранимы, что объясняется высокой чувствительностью компонентов метаболизма интенсивно растущей клетки к ингибиторам синтеза белка, нуклеиновых кислот и др.

Затем наступает фаза стационарного роста, при которой количество жиз­неспособных клеток остается без изменений, составляя максимальный уровень (М-концентрация). Ее продолжительность выражается в часах и колеблется в зависимости от вида бактерий, их особенностей и культивирования.

Завершает процесс роста бактерий фаза гибели, характеризующаяся отмиранием бактерий в условиях истощения источников питательной среды и накопления в ней продуктов метаболизма бактерий. Продолжительность ее колеблется от 10 ч до нескольких недель. Интенсивность роста и размножения бактерий зависит от многих факторов, в том числе оптимального состава питательной среды, окислительно-восстановительного потенциала, рН, температуры и др.

Размножение бактерий на плотной питательной среде.Бактерии, растущие на плотных питательных средах, образуют изолированные колонии округлой формы с ровными или неровными краями (S- и R-формы), различной консистенции и цвета, зависящего от пигмента бактерий.

Пигменты, растворимые в воде, диффундируют в питательную среду и окрашивают её. Другая группа пигментов нерастворима в воде, но растворима в органических растворителях. И, наконец, существуют пигменты, не растворимые ни в воде, ни в органических соединениях.

Наиболее распространены среди микроорганизмов такие пигменты, как каротины, ксантофиллы и меланины. Меланины являются нерастворимыми пигментами черного, коричневого или красного цвета, синтезирующимися из фенольных соединений. Меланины наряду с каталазой, супероксиддисмутазой и пероксидазами защищают микроорганизмы от воздействия токсичных перекисных радикалов кислорода. Многие пигменты обладают антимикробным, антибиотикоподобным действием.

15. Споры и спорообразование у бактерий, методы выявления спор.

Спорообразование наблюдается в условиях, неблагоприятных для вегетативных форм. У бактерий выделяют 3 вида спор:

1) ЭНДОСПОРЫ (истинные споры) – располагаются внутри#, имеют высокий коэффициент светопреломления.

2) АРТОСПОРЫ – обр-ся в рез фрагментации вегетирующих Б!!

3) ХЛАМИДИОСПОРЫ (микроцисты) – формируются в рез утолщения стенок вегетирующей # и накопления запасных пит в-в.

К спорообразованию способна лишь небольшая группа эубактерий, а из патогенных для чка только – Clostridium и Bacillus. Каждая вегетативная # образует 1 эндоспору. Споры УСТОЙЧИВЫ к температуре, высыханию, радиации и химическим в-вам (включая 70° этанол). Могут сохраняться оч длительное время. Предположительно споры могут храниться в сухой почве до 1000 лет, но фактически уже за 50 лет 90% спор теряют жизнеспособность.

Морфологически споры м.б. круглыми, овальными, эллиптическими, некоторые снабжены «рёбрами жесткости».

ПРОЦЕСС СПОРУЛЯЦИИ начинается сразу при возникновении дефицита питательных в-в и длится около 8ч, при этом никаких внешних источников питания или энергии не требуется. Стимулируют – глюкоза, Р и NH4, угнетают –пептон, лактоза, NaCl, CaCl2. Выделяют след ЭТАПЫ:

1) Подготовительная стадия – прекращается деление, начинается накопление липидных включений.

2) Стадия предспоры – появляется эллиптическая оболочка, окружающая участок цитоплазмы с изменённой плотностью и тинкториальными свойствами.

3) Формирование оболочки

4) Стадия созревания споры – происходит её уплотнение и прекращение любых перемещений в #–спорангии.

5) Разрушение родительской #.

В оптимальных условиях происходит прорастание споры. Сначала она активно поглощает воду и набухает, усиливается дыхание, возрастает активность ферментов, происходит выделение АК – активация метаболизма (в этот период спора УТРАЧИВАЕТ ТЕРМОРЕЗИСТЕНТНОСТЬ). Затем спора лопается и из неё выходит вегетативная форма.

Спорообразующие микроорганизмы - это бациллы и клостридии. Отличия бацилл от клостридий: споры бацилл не превышают диаметр бактериальной клетки, у клостридий - превышает, бациллы по типу дыхания- аэробы, а клостридии- строгие(облигатные) анаэробы. Известны и спорообразующие кокки.

16.

 

17.

 

18.

Основные типы взаимоотношений: симбиоз - позитивные, антибиоз или антагонизм - негативные, нейтрализм – безразличные, индифферентные.

Рассмотрим примеры симбиотических взаимоотношений между микроорганизмами.

Мутуализм – идеальный симбиоз (например, кефирный грибок – это симбиоз молочнокислых, уксуснокислых бактерий и дрожжей, который пока не может быть создан искусственно).

Комменсализм – один получает пользу, второму безразлично (например, кишечная палочка в теплокровном организме).

Метабиоз – специфический вид симбиоза, при котором один вид микроорганизмов продолжает процесс, вызванный другим (например, сожительство аммонитрификаторов, окисляющих белки до токсичного аммиака, и нитрификаторов, окисляющих его до безопасных веществ).

Сателлизм – стимуляция роста одного микроорганизма продуктами жизнедеятельности другого (дрожжи вырабатывают витамины группы В, которые ускоряют рост молочнокислых бактерий).

Синергизм – усиление физиологических функций в сообществе (сочетание молочнокислых микроорганизмов-кислотообразователей и ароматообразователей в заквасках).

Антагонистические взаимоотношения в мире микробов также могут проявляться по-разному:

- паразитизм (бактериофагия);

- продукты жизнедеятельности одного микроорганизмы губительно действуют на другие микроорганизмы (молочнокислые бактерии подавляют гнилостную микрофлору);

- истощение питательного субстрата микроорганизмом, который развивается быстрее (культурные и дикие дрожжи в хлебопечении);

- выделение антибиотических веществ.

19.

Культивирование анаэробов возможно как на обычных средах (МПБ, МПА и МПЖ) с добавлением глюкозы (2%), так и на специальных (кровяном агаре, печеночном бульоне и пр.). Большое значение имеет добавление к средам веществ, обладающих восстановительными свойствами, именно: мура вьинокислого натрия (0,3—0,5); индигокармина (0,1%); глюкозы (1—2%), кусочков свежевырезанных паренхиматозных органов (печень, почка, мозг).

Необходимо всегда перед посевом анаэробов в среды удалять из них кислород. Последнее достигается кипячением жидких сред в водяной бане не менее 10 мин. После кипячения среды быстро охлаждаются погружением в холодную проточную воду или лед.

После посева анаэробов необходимо создать бескислородные условия для их развития. Последнее достигается различными приемами.
1. Механическое прекращение доступа кислорода воздуха достигается для жидких сред наливанием слоя вазелина или парафинового масла на поверхность среды и посевами в глубокие ее слои, а для плотных сред — посевами в расплавленный высокий агар с быстрым охлаждением его, закрыванием засеянной плотной среды слюдяной пластинкой или заливанием вторым слоем расплавленной плотной среды.
2. Замещение воздуха индиферентным газом в пробирках или сосудах, где находятся пробирки. Для этой цели могут служить углекислота и водород.
3. Выкачивание воздуха из пробирок или сосудов (эксикатор, стеклянный колокол) при помощи насосов.
4. Химическое поглощение кислорода. На 100 мл воздуха берут 1 г пирогалловой кислоты и 10 мл 1-проц. едкого натра или на 100 мл воздуха берут 3,0 г гидросульфита натрия и такое же количество углекислого натрия. Смесь слегка овлажняют водой и перемешивают.

Определение микроба. Основано на установлении морфологических и физиологических, а иногда и серологических данных. Для определения микробов устанавливают их форму (палочка, кокк, извитая форма), взаимное расположение (одиночные, цепочки, кучки и пр.); подвижность, окраску по Граму, спорообразование, отношение изучаемого микроба к обычным бактериологическим средам, к аэробиозу; его ферментативные свойства — наличие ферментов на белки (желатина, казеин), на углеводы (лактозу, глюкозу, маннит, глицерин, арабинозу, рамнозу, дульцит и т. д.) и образование пигментов, индола, газов, сероводорода, аммиака.

Патогенность микроорганизмов определяют биологическим методом — заражением опытных животных.

Некоторые микроорганизмы определяются по наличию отдельных характерных для них свойств. Так, туберкулезные палочки в мазках из органов животного определяют по их кислотоупорной окраске. Сибиреязвенные палочки из трупного материала определяют по наличию капсул, а в культурах по образованию локонообразных колоний на МПА и отсутствию гемолиза на кровяном агаре. Большинство других микроорганизмов определяют по сумме морфологических, физиологических, а иногда биологических данных.

 

20. Простые и сложные методы окраски микроорганизмов. Способы окраски спор, жгутиков, капсул, включений.

Для окрашивания препаратов пользуются кислыми, щелочными и нейтральными анилиновыми красителями. Наиболее широкое применение нашли основной и кислый фуксин, метиленовый синий, генцианвиолет и везувин.

Простой способ окраски мазков производится водным фуксином Пфейффера и метиленовым синим Леффлера. Готовят водный фуксин из фенолового фуксина Циля, разводя его дистиллированной водой в соотношении 1:10. Состав РАСТВОРА ФУКСИНА ЦИЛЯ: основной фуксин – 1 г; спирт этиловый 96 % – 10 мл; фенол кристаллический – 5 г; глицерин – несколько капель; вода дистиллированная – 100 мл.

Метиленовый синий Леффлера готовят, прибавляя к 30 мл насыщенного раствора метиленового синего (10 г метиленового синего в 100 мл 96 % этилового спирта) 1 мл 1% NaOH или KOH и 100 мл дистиллированной воды.

После окрашивания красители сливают, препарат промывают водой и высушивают между листками фильтровальной бумаги. На сухой мазок наносят каплю масла и микроскопируют с использованием иммерсионного объектива оптического микроскопа. Способность микробов воспринимать красители называется тинкториальными свойствами.

При окраске щелочным метиленовым синим по Леффлеру (3–5 мин) гранулы волютина у дифтерийных коринебактерий приобретают темно–синий, а палочка – голубой цвет.

При сложных методах окраски мазков применяют два–три различных по цвету красителя, что позволяет дифференцировать микробы и выявить некоторые нюансы в деталях их строения. К таким методам относят окраску по Граму, Цилю–Нельсену, Нейссеру, Бурри–Гинсу, Романовскому–Гимзе и некоторые другие.

При окраске по НЕЙССЕРУгранулы ВОЛЮТИНА у дифтерийных коринебактерий окрашиваются в сине–черный, а бактерия – в желтый цвет. Мазок окрашивают: 1) 1 мин уксуснокислым метиленовым синим (метиленовый синий – 0,1 г, спирт – 2 мл, ледяная уксусная кислота – 5 мл, дистиллированная вода – 100 мл); 2) сливают краситель и мазок промывают водой; 3) на 20– 30 с наносят раствор Люголя; 4) 1 –3 мин окрашивают везувином (прокипяченная и отфильтрованная взвесь 2 г везувина в смеси 60 мл спирта и 40 мл дистиллированной воды).

Количественное содержание ПЕПТИДОГЛИКАНА, содержащегося в # стенке, определяет характер окраски бактерий и других прокариот по ГРАМУ. Те из них, которые содержат в клеточной стенке большое его количество (около 90 % пептидогликана), окрашиваются по Граму в сине–фиолетовый цвет и их называют грамположительными, все другие, содержащие в оболочке 5–20 % пептидогликана, – в розовый цвет и их называют грамотрицательными. Толщина слоя пептидогликана в клеточной стенке грамположительных бактерий в несколько раз больше, чем у грамотрицательных. Техника окраски по Граму: 1. Фиксированный мазок 1–2 мин окрашивают раствором генцианвиолета (генцианвиолет – 1 г, этанол 96 % – 10 мл, фенол кристаллический – 2 г, вода дистиллированная – 100 мл; по методу Синева его покрывают пропитанной тем же красителем полоской фильтровальной бумаги, которую смачивают 2–3 каплями воды). 2. Слив генцианвиолет (сняв полоску бумаги Синева), мазок 1 мин обрабатывают раствором Люголя и, не промывая водой, сливают его. 3. Обесцвечивают спиртом в течение 0,5 мин, промывают водой. 4. Окрашивают 1–2 мин фуксином Пфейффера. 5. Мазок ополаскивают водой и высушивают.

Для выявления грамположительных КИСЛОТО– И СПИРТОУСТОЙЧИВЫХ микобактерий туберкулеза и лепры, которые из–за большого количества в клеточных оболочках жировосковых веществ, миколовой кислоты и других оксикислот непроницаемы для разведенных растворов красителей, используют окраску по методу ЦИЛЯ – НИЛЬСЕНА. Окрашивание их по этому способу достигается при помощи концентрированного фенолового фуксина Циля с подогреванием над пламенем горелки до закипания и отхождения паров. Окрашенные с применением термокислотной обработки микобактерии не обесцвечиваются слабыми растворами минеральных кислот и этилового спирта. Техника окраски. 1. Фиксированный мазок покрывают полоской фильтровальной бумаги, на которую наносят фуксин Циля, и несколько раз подогревают над пламенем горелки до появления паров, подливая краситель, далее бумагу снимают и промывают водой. 2. Препарат обрабатывают (обесцвечивают) 5 % раствором серной кислоты и промывают водой. 3. На мазок наливают водно–спиртовой раствор метиленового синего, спустя 3–5 мин промывают водой и высушивают. Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются в интенсивно красный цвет, остальные виды микробов, обесцвечивающиеся в процессе обработки препарата кислотой, – в светло–синий.

При необходимости дифференциации возбудителей лепры от микобактерии туберкулеза используют окраску мазков по методу Семеновича–Марциновского – микобактерии лепры окрашиваются в красный цвет, а микобактерии туберкулеза остаются неокрашенными.

Для обнаружения КАПСУЛ бактерий, плохо воспринимающих красители, используют метод БУРРИ–ГИНСА: в каплю туши, разведенной в 10 раз водой, вносят исследуемые бактерии и равномерно распределяют их петлей по предметному стеклу; мазок высушивают, фиксируют (наносят 2–3 капли спирта и сжигают его на стекле), окрашивают в течение 3–5 мин фуксином Пфейффера, промывают водой, высушивают; на темном фоне препарата капсулы видны в виде светлых ореолов вокруг красных бактерий.

О наличии ЖГУТИКОВ чаще всего судят по направленному характеру движения бактерий в раздавленной и висячей каплях. Но можно использовать и некоторые методы окраски, например по МОРОЗОВУ: 1) обработка препарата кислотой, при этом оболочки и жгутики разрыхляются; 2) закрепление разрыхленных структур танином; 3) обработка азотнокислым серебром, оно окутывает каждый жгутик и саму # толстым слоем, давая различные оттенки от жёлтого до тёмно-коричневого.

СПОРЫ. Эндоспоры бактерий выдерживают длительное кипячение, действие горячего воздуха (140–150°С) и химических дезинфицирующих веществ, многие годы сохраняются в почве, на растительности и предметах. Попадая в организм человека и животных, споры патогенных бактерий прорастают в материнские клетки за несколько часов.

Водным фуксином, водно–спиртовым метиленовым синим и по Граму эндоспоры не окрашиваются, так как их плотная многослойная оболочка непроницаема для обычных красителей. В мазках из патологических материалов, культур бацилл и клостридии, окрашенных простыми красителями, споры выглядят в виде бесцветных телец внутри окрашенных в соответствующий цвет вегетативных клеток или вне их. Окрашивать их можно по методу Циля–Нельсена, используя для обесцвечивания мазков после обработки их фуксином Циля не 5%, а 1% серную кислоту. При этом эндоспоры, так же как микобактерии туберкулеза, красятся в розовый цвет и будут хорошо видны на синем фоне бактерий. Для окрашивания спор можно использовать метод по ОЖЕШКО: 1) протравка оболочки споры горячей кислотой; 2) окраска по Цилю–Нильсену.

При исследовании морфологии паразитов крови (спирохеты – бледная трепонема, простейшие – малярийный плазмодий), а т/же ФЭ, используют окраску по РОМАНОВСКОМУ–ГИМЗА. Краска состоит из смеси азура, эозина и метиленовой сини. Окрашивает ЦИТОПЛАЦМУ в голубой, а ЯДРА в красно–фиолетовый цвет. Этот метод позволяет обнаружить различные цитологические детали.

Мазок для люминесцентной микроскопии готовят обычным образом, фиксируют в ацетоне и наносят на него флюорохром на 20–30 мин. Сделанный препарат промывают проточной водой, покрывают покровным стеклом и микроскопируют.

21.

В зависимости от назначения П. с. разделяют на элективные, среды обогащения, дифференциально-диагностические. На элективных (селективных, избирательных) П. с. обеспечивается интенсивный рост одного или нескольких близких видов микроорганизмов и подавляется рост посторонних микроорганизмов. Примером элективных сред для сальмонелл и шигелл является желчный бульон, состоящий из желчи и мясопептонного бульона, для холерного вибриона - щелочная пептонная вода. В нек-рых случаях элективные среды получают, добавляя к П. с. антибиотики. Очень близки к элективным среды обогащения. В них обычно не содержатся подавляющие рост микроорганизмов вещества, а создаются условия, благоприятные для того или иного из присутствующих в смеси микроорганизмов. Напр., для накопления шигелл и сальмонелл применяют селенитовый бульон, к-рый содержит кислый селенит натрия, способствующий росту этих бактерий.

Дифференциально - диагностические среды предназначены для дифференциации микроорганизмов. С помощью этих П. с. можно различать микроорганизмы по отдельным ферментативным признакам либо, подробно изучив их ферментативные свойства, устанавливать их природу (идентифицировать). Дифференциально-диагностические среды содержат индикатор, меняющий цвет среды при изменении рН в результате образования продуктов расщепления веществ. Напр., при диагностике кишечных инфекций используется среда Эндо, основными компонентами к-рой являются мясопептонный агар, лактоза и индикатор - фуксин. Среда Эндо позволяет отличать кишечные палочки, расщепляющие лактозу с образованием к-ты и потому формирующие колонии, окрашенные в красный цвет (цвет фуксина), от шигелл и сальмонелл, не сбраживающих лактозу и образующих бесцветные колонии. Для изучения сахаролитических свойств бактерий широко применяют среды Гисса, приготовленные на основе пептонной воды, какого-либо углевода (лактозы, маннита и других) и индикатора. С помощью набора сред Гисса можно определять отношение исследуемой культуры к разным углеводам. Для определения протеолитической активности используют желатин (о наличии протеаз судят по его разжижению), для дифференциации микробов, обладающих и не обладающих гемолитической активностью, применяют кровяной агар и т. д.

Существуют также П. с, сочетающие свойства дифференциально-диагностических и элективных сред. Напр., среда Плоскирева так же, как среда Эндо, позволяет отличать кишечные палочки от шигелл и сальмонелл благодаря наличию в ней лактозы и индикатора - нейтрального красного, наличие же в ней элективных компонентов - солей желчных к-т способствует преимущественному росту сальмонелл и шигелл, а бриллиантового зеленого - подавлению сопутствующей грамположительной флоры. Имеются также среды специального назначения: для бруцелл - печеночные среды, для анаэробов - среда Китта-Тароцци и др.

Кроме сред, приготовленных с использованием натуральных субстратов, существуют так наз. синтетические среды, состоящие из химически чистых соединений в точно установленных концентрациях, напр. среда Сотона для культивирования микобактерий туберкулеза. По составу синтетических сред можно определять потребности изучаемого вида микроорганизмов в тех или иных питательных веществах.

Питательные среды готовят в лабораториях согласно существующим прописям. Широко применяют также сухие П. с, приготовленные централизованно.

22.

Бактериофаги (греч. phagos – пожирающий) – это в!!, паразитирующие на б!!, были открыты 1917 г. В настоящее время, кроме бактериофагов, известны фаги микоплазм, грибов, дрожжей, синезеленых водорослей.

Строение и химический состав фагов. Как в! имеет очень малые размеры, примерно 100-200 нм. Различают простые и сложные, РНК– и ДНК–содержащие фаги. Простые РНК–фаги имеют круглую или нитевидную форму. Наиболее хорошо изученные сложные фаги эшерихий имеют вид барабанной палочки с шестигранной головкой, в которой находится ДНК. Имеют отростки, к/е состоят из полого стержня, снаружи покрытого сократительным чехлом. На дистальном конце отростка находится шестиугольная базальная пластинка с шестью отходящими от нее нитями–рецепторами.

Фазы взаимодействия фага с бактериями. При эффективном взаимодействии сложный фаг эшерихий адсорбируется на бактериях дистальным концом отростка. При этом из–под его базальной пластинки выделяется лизоцим, который вызывает образование в оболочке эшерихий отверстия. Вслед за этим происходит сокращение головки и чехла фаговой частицы, проникновение через цитоплазматическую мембрану кончика его стержня и выход в цитоплазму фаговой ДНК. После ее введения следует фаза смены информации и последующий синтез ДНК и белка фага. На заключительном этапе взаимодействия фага с бактерией происходит самосборка фаговых частиц.

Следствие взаимодействия фага с бактерией. Полный цикл развития фагов продолжается до 1,5ч, в течение которых образуется 100–200 фаговых частиц, что заканчивается лизисом бактерий под влиянием фагового лизоцима. Фаги, обусловливающие лизис микробов и формирование новых фаговых корпускул, называются вирулентными. Наряду с вирулентными в природе имеются умеренные фаги, их взаимодействие с бактериями проявляется в двух формах: одни штаммы или клетки определенного вида бактерий они разрушают, в другие проникают, но гибели не вызывают. В последнем случае геном умеренного фага интегрирует в геном бактерии и в дальнейшем воспроизводится вместе с ним при делении #. Умеренный фаг, наследственные детерминанты к/го объединились с бактериальными, называются профагом; бактерии, содержащие профаг, – лизогенными, а само явление– лизогенией.

Связь профага с бактерией очень прочная и в естественных условиях нарушается оч редко (спонтанная продукция фага). Частоту отщепления профага от бактериальной хромосомы можно увеличить, воздействуя на лизогенные бактерии ультрафиолетовыми лучами, ионизирующей радиацией, магнитным полем и химическими мутагенами (индукция лизогенных бактерий).

Выявление. Как и в!! животных, фаги обнаруживаются под электронным микроскопом и по эффекту их действия на чувствительные микробы. При этом, размножаясь в бульонных культурах, они вызывают просветление среды, а на агаровых газонах подавляют рост бактерий в местах их внесения или формируют колонии в виде мелких стерильных (негативных) пятен – бляшек фага. Подобно колониям бактерий, морфология бляшек специфична для различных фагов. Вирулентные фаги обычно образуют прозрачные бляшки, а умеренные – мутные.

Распространение. Фаги обнаруживаются во всех объектах окружающей среды, в которых обитают бактерии, актиномицеты, грибы, микоплазмы. Найдены они в воде, почве, молоке, в различных выделениях человека и животных.

Получение и практическое применение. Фаги получают путем фильтрации и очистки лизированных ими бульонных культур бактерий. Готовый препарат фага представляет собой прозрачную желтоватую жидкость. В целях повышения стабильности фильтрат фаголизатов таблетируют.

Используются фаги главным образом для ИДЕНТИФИКАЦИИ И ВНУТРИВИДОВОЙ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ МИКРООРГАНИЗМОВ. Для этого применяют наборы типоспецифических фагов, лизирующих определенные варианты бактерий. Особую ценность метод фаготипирования приобретает при эпидемиологическом обследовании очага, где с его помощью удается выявить источники и пути передачи инфекции.

Узкоспецифический спектр действия фагов ограничивает широкую возможность их использования как ЭТИОТРОПНЫХ ПРЕПАРАТОВ. Для лечения в основном применяют стафилококковый и стрептококковый бактериофаги и колибактериофаг. Они представляют собой фильтраты фаголизатов соответствующих бактерий, их выпускают в запаянных ампулах или флаконах. Эти препараты назначают при нагноительных процессах, вызванных фагочувствительными штаммами стафилококка, стрептококка и кишечной палочки, орошая ими инфицированную рану или обкалывая очаг воспаления.

В целях ПРОФИЛАКТИКИ фагирование в настоящее время проводят только в очагах брюшного тифа и дизентерии. Взрослые люди, находившиеся в контакте с больными, принимают указанные бактериофаги внутрь за 1,5–2 ч до еды по 1–2 таблетке (в дизентерийном очаге 2–3 раза с интервалом 3 дня).

23. Микробиологические основы антимикробной профилактики и терапии. Асептика, антисептика, дезинфекция, стерилизация (определение понятий, методы).

Противомикробным действием обладают:

- галогены и их соединения (йод, йодоформ, хлорамин Б, пантоцид),

- окислители (Н2О2,, KMnO4),

- кислоты, щелочи их соли (бензойная, аммиак и его соли),

- спирты (70–80% этанол),

- альдегиды (формальдегид, уротропин, .уросал),

- соли тяжелых Ме (Hg, Ag, Au, Cu, Pb, Zn),

- фенол и его производные (резорцин, хлорофен),

- производные нитрофурана (фурацилин, фурагин фуразолидон),

- поверхностно-активные вещества (хлоргексидин, грамицидин),

- длинноцепочечные жирные кислоты,

- фитонциды, антибиотики, красители (метиленовый синий, бриллиантовый зеленый).

По МЕХАНИЗМУ ДЕЙСТВИЯ разделяются на:

а) деполимеризующие пептидогликан клеточной стенки,

б) ↑ проницаемость # мембраны,

в) блокирующие БХ реакции,

г) денатурирующие ферменты,

д) окисляющие метаболиты и ферменты мкÒ,

е) растворяющие липопротеиновые структуры,

ж) повреждающие генетический аппарат или блокирующие его функции.

АНТИМИКРОБНЫЕ МЕРОПРИЯТИЯ.В основе методов профилактики и борьбы лежат прямые, косвенные и комплексные методы уничтожения или подавления жизнедеятельности условно-патогенных микроорганизмов.

Прямые методы называются МИКРОБНОЙ ДЕКОНТАМИНАЦИЕЙ – полное или частичное удаление мкÒ с объектов внеш среды и биотопов человека с помощью факторов прямого повреждающего действия. Существует 2 различных типа деконтаминации: микробная деконтаминация ОБЪЕКТОВ ВНЕШ СРЕДЫ (стерилизация и дезинфекция) и ЖИВЫХ Ò (антисептика и химиотерапия).

Деконтаминация объектов внеш среды: Дезинфекция – совокупность хим, физ и механических способов ПОЛНОГО УНИЧТОЖЕНИЯ вегетативных и споровых форм определенных групп мкÒ. ЦЕЛЬ – предупреждение передачи возбудителей ч/з объекты внеш среды. Для этого чаще используют хим вещества с широким спектром микробоцидного действия (дезинфектанты), реже сочетают дезинфектант с t°С обработкой (пароформалиновая дезинфекция), с поверхностно-активными веществами.

Деконтаминация живых Ò: Антисептика – совокупность способов ПОДАВЛЕНИЯ РОСТА И РАЗМНОЖЕНИЯ мкÒ на интактных или поврежденных поверхностях кожи и слизистых оболочках тела. Основной метод – обработка биотопов хим веществами преимущественно с микробостатическим действием (антисептиками) с учетом спектра их активности и чувствительности возбудителей. ЦЕЛЬ – подавление патогенных и условно-патогенных мкÒ при сохранения аутохтонных видов. Исключение составляет антисептическая ОБРАБОТКА РУК хирурга и операционного поля пациента, ран и слизистых оболочек иммунодефицитных лиц (необходимо полное освобождение от всех мкÒ).

Асептика – использует прямые (стерилизацию, дезинфекцию, антисептику) и косвенные (разделительные меры) методы воздействия на мкÒ. ЦЕЛЬ – создание безмикробной (гнотобиотической) зоны или зоны с резко сниженной численностью мкÒ в местах нахождения больных (инфекционные боксы, при трансплантации органов, кювет для недоношенного ребенка и др.) или проведения медицинских вмешательств (операционная, родильный зал) и лабораторных исследований.

 

СТЕРИЛИЗАЦИЯ полное уничтожение всех микроорганизмов. Стерилизуют посуду, инструменты, питательные среды, лекарственные препараты, перевязочные средства, медицинское белье, эндоскопические аппараты и другие объекты. Для их стерилизации применяются в основном физические и механические методы.

Стерилизация в пламени проводится для обеззараживания бактериальных петель, игл, предметных и покровных стекол, пинцетов.

Стерилизация горячим воздухом проводится в электрических сухожаровых шкафах, имеющих различную форму и размеры, снабженных хорошей тепловой изоляцией. Необходимая температура автоматически поддерживается терморегулятором. Cтерилизуют лабораторную посуду и шприцы при температуре 180°С в течение 1 ч. Чашки Петри, пастеровские и градуированные пипетки помещают в специальные металлические пеналы или заворачивают в бумагу по несколько штук. Пробирки и колбы закрывают ватными пробками.

Стерилизация паром проводится двумя способами: насыщенным паром под давлением и текучим паром.

СТЕРИЛИЗАЦИЮ ПАРОМ ПОД ДАВЛЕНИЕМ осуществляют в автоклаве, который представляет собой толстостенный котел цилиндрической формы, покрытый снаружи кожухом и герметически закрывающийся крышкой, бывают горизонтальные и вертикальные. Пар поступает в рабочую камеру из маленького котла, воду в котором нагревают электротоком. Давление измеряют манометром.

Не изменяющиеся под действием высокой температуры и давления питательные среды (МПА, МПБ), растворы или посуду с заразным материалом стерилизуют при 1 атм (121°С) 15–20 мин; среды с углеводами и нативными белками – при 0,5 атм (110°С) 5–10 мин; материал и посуду, содержащие бациллы сибирской язвы, обеззараживают при 1 атм в течение 2ч.

Контроль за соблюдением режимных параметров работы автоклава проводится с помощью максимального термометра. В отдельных случаях в автоклав помещают бензойную кислоту или бензонафтол с точками плавления 120°С и 110°С.

СТЕРИЛИЗАЦИЯ ТЕКУЧИМ ПАРОМ проводится троекратно (дробно) в течение трех дней по 30–60 мин в автоклаве при незавинченной крышке и открытом выпускном кране или в спец аппарате, который представляет собой металлический цилиндр, покрытый теплоизоляционным материалом с отверстием в конической крышке для выхода пара, краном и указательной трубкой в донной части. Внутри аппарата имеется подставка для стерилизуемых материалов. Залитую в него воду подогревают любым источником тепла. В текучепаровом аппарате стерилизуют питательные среды, изменяющие свои свойства при температуре выше 100°С: молоко, желатину, картофель и среды с углеводами. Вегетативные формы микроорганизмов при такой стерилизации погибают, а споры сохраняются. Спустя сутки при комнатной температуре часть из них прорастает и повторное воздействие пара их уничтожает. Прогреванием на третьи сутки полностью обезвреживают всю спороносную микрофлору, которая к этому времени завершает вегетацию.

Свертывание (уплотнение) сыворотки и яичных сред производят в двустенном свертывателе с электрическим нагревом. Аппарат покрыт теплоизоляционным материалом и имеет стеклянную и металлическую крышки. Воду в свертыватель наливают через имеющееся в его верхней части отверстие, которое закрывается пробкой с вмонтированным термометром. Пробирки со средами укладывают на дно свертывателя в наклонном положении. Прогревают среды однократно или дробно при температуре 80–90°С в течение 1 ч.

Фильтрование как механический способ стерилизации может быть использовано для обеспложивания жидких веществ, которые нежелательно подвергать действию высокой температуры, например сывороток, антибиотиков. Для этого изготовляют мелкопористые фильтры с точно градуированными порами, которые задерживают микроорганизмы.

В быту используется стерилизация кипячением для обработки игл и шприцев. Кипятят их в стерилизаторах 30–45 мин. Для повышения точки кипения и устранения жесткости воды добавляют 1 % соды. Этот метод не обеспечивает полного уничтожения микробов, так как споры бактерий и некоторые вирусы выдерживают кипячение в течение нескольких часов.

24.

 

25.

 

26.

 

27.

 

28.

 

29.

 

30. Модификационная и генотипическая изменчивость бактерий.

ИЗМЕНЧИВОСТЬ– совокупность различий по признаку м/у ÒÒ одного вида или популяции.

Фенотипические изменения – МОДИФИКАЦИЯМИ, при этом изменений ДНК не происходит, и вскоре они утрачиваются. Модификации возникают в ответ на изменение условий окр среды и позволяют мкÒ быстро адаптироваться и сохранять свою жизнеспособность. Проявляются в изменении морфологических, БХ и других признаков, после устранения действия фактора, происходит реверсия.

В основе – индукция и репрессия соответствующих генов (например, E.coli только в присутствии лактозы синтезирует необходимые ферменты, стафилококки – в присутствии пенициллина синтезируют разрушающий его фермент).

К модификациям можно отнести включение «МОЛЧАЩИХ» ГЕНОВ, в результате чего происходит смена их антигенов в ходе инфекционного заболевания.

Модификации могут возникать под непосредственным действием антибиотиков, при этом образуются L-формы, лишенные # стенки. Они могут сохраняться и даже размножаться внутри ## хозяина, после прекращения действия антибиотика вновь реверсировать к исходной форме.

МУТАЦИИ– изменения в структуре ДНК, закрепляются и прередаются по наследству. Классифицируют по происхождению, характеру изменений в структуре ДНК, фенотипическим последствиям и др.

По ПРОИСХОЖДЕНИЮ мутации подразделяют на:

спонтанные – составляют естественный фон. Они появляются под влиянием разных причин: ОШИБКИ в репарирации или репликации ДНК, ошибочное включения в дочернюю цепь НЕКОМПЛЕМЕНТАРНОГО АО (А=Т, Г≡Ц), ИНСЕРТАЦИОННЫЕ мутации (insertion – вставка, возникают при встраивании в хромосому микробной # Is-последовательностей, транспозонов и плазмид, при наличии ГЕНОВ-МУТАТОРОВ частота мутаций увеличивается в >100 раз).

индуцированные –получают под влиянием мутагенов.

По КОЛИЧЕСТВУ МУТИРОВАВШИХ ГЕНОВ:

ГЕННЫЕ– затрагивают один ген, чаще всего – точковые,

Точковые –замену или вставку пары АО в ДНК → изменение 1 кодона Þ вместо одной АК кодируется другая или нонсенскодон (нонсенсмутация) – это ПРЯМАЯ Мт. Впоследствии может возникнуть вторичная (ОБРАТНАЯ) мутация в этом же гене → восстановление дикого генотипа и фенотипа.

Вставкаили выпадениеодной пары АО → изменение всех последующих кодонов в пределах 1 гена (Мт со сдвигом считывания).

хромосомные– распространяются на несколько генов, возникают в результате выпадения нуклеотидов (ДЕЛЕЦИЯ), поворота участка ДНК на 180° (ИНВЕРСИЯ), повторения фрагмента ДНК (ДУПЛИКАЦИЯ). Один из механизмов связан с перемещением Is-ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ и ТРАНСПОЗОНОВ из одного участка ДНК в другой или из хромосомы в плазмиду и наоборот → нарушается функция гена.

По ФЕНОТИПИЧЕСКИМ ПОСЛЕДСТВИЯМ:

Нейтральные –фенотипически не проявляются.

Условно-летальные– приводят к изменению функциональной активности фермента. В зависимости от условий окр среды мкÒ могут сохранять свою жизнеспособность или утрачивать ее. Так, например, ts-мутанты (температурочувствительные) могут синтезировать ферменты, активные при 37°С, но неактивные при 42 °С, у Б!! дикого типа – активны при обеих t°C.

Летальные– характеризуются полной утратой способности синтезировать жизненно важные ферменты (особенно ДНК-полимераз).

Мутации проявляются в фенотипе в виде утраты или изменения морфологических и БХ признаков: жгутиков, пилей, капсулы, # стенки; способности ферментировать углеводы, синтезировать опред АК, витамины и другие соединения, устойчивость к лекарствам или дезинфектантам и т. д. Þ ауксотрофы, растут только в среде с готовым продуктом.

Действие мутации на трансляцию:

1. Бессмысленные (missens) мутации

2. Frame-shift мутации – со сдвигом считывания и изменением всех последующих кодонов.

3. Супрессорные – восстан. функции генов, инактив-ых предыдущей мутацией

4. Мутации на клеточном уровне – можно выявить, если вызывает фенотипические изменения

5. Мутации с приобретением (способности синтезировать активный фермент), лаг-фазам между мутацией и синтезом фермента отсутствует.

6. Мутации с утратой – вызывает прекращение синтеза к.-л. фермента, а клетка сохраняет функц. активность. Если рост клетки продолжается, то кол-во фермента умен-ся с каждым делением в 2 раза.

7. Изменения в виде трансдукции, трансформации, коньюгации.

31. Антигены, свойства, структура, взаимодействие с антителами. Типы антигенной специфичности. Практическое использование антигенов.

АНТИГЕНЫ БАКТЕРИЙ

Каждый мкÒ содержит несколько АГ. Чем сложнее его структура, тем больше АГ. У мкÒ различают ГРУППОСПЕЦИФИЧЕСКИЕ АГ (встречаются у разных видов одного и того же рода или семейства), ВИДОСПЕЦИФИЧЕСКИЕ (у различных представителей одного вида) и ТИПОСПЕЦИФИЧЕСКИЕ (ВАРИАНТНЫЕ) АГ (у разных вариантов в пределах одного и того же вида → серовары). Среди бактериальных антигенов различают Н, О, К и др.

Жгутиковые Н-АГ– белок флагеллин, разрушается при нагревании, но после обработки фенолом сохраняет свои антигенные свойства.

Соматический О-АГ – ЛПС # стенки гр–. Детерминантными группами являются концевые повторяющиеся звенья ПС цепей, присоединенные к основной части. Состав сахаров в детерминантных группах и их число, у разных бактерий неодинаковы. Чаще всего в них содержатся гексозы и аминосахара. О-АГ термостабилен, сохраняется при кипячении в течение 1-2 ч, не разрушается после обработки формалином и этанолом.

К-АГ (капсульные) –хорошо изучены у эшерихий и сальмонелл. Как и О-АГ связаны с ЛПС # стенки и капсулой, но в отличие от О-АГ содержат в основном кислые ПС (уроновые кислоты). По чувствительности к температуре К-АГ подразделяют на А-(выдерживает кипячение более 2ч), В-(недолгое нагревание до 60°С) и L-АГ(термолабильны). К-АГ располагаются более поверхностно Þ для выявления О-АГ необходимо предварительно разрушить капсулу, что достигается кипячением культур.

К капсульным антигенам относится так называемый Vi-АГ (обнаружен у брюшнотифозных и некоторых др энтеробактерий, обладающих высокой вирулентностью).

ПС капсульные АГ (часто типоспецифические) есть у пневмококков, клебсиелл и других бактерий, образующих выраженную капсулу. У сибиреязвенных бацилл К–АГ состоит из полипептидов.

Токсины (если они являются растворимыми белками) и ферменты – обладают полноценными АГ.

32. Генетические рекомбинации (трансдукция, конъюгация, трансформация).

ГЕНЕТИЧЕСКИЕ РЕКОМБИНАЦИИ у эукариот совершаются в процессе полового размножения путем взаимного обмена фрагментами хромосом, при этом из двух родительских хромосом образуются две рекомбинантные, т.е. возникают две рекомбинантные особи.

У прокариотов нет полового размножения Þ в результате внутригеномных перестроек: изменение локализации генов в пределах хромосомы, или при проникновении в # реципиента части ДНК донора → формирование мерозиготы, т.е. образуется только ОДИН РЕКОМБИНАТ.


Поможем в написании учебной работы
Поможем с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой





Дата добавления: 2015-03-11; просмотров: 1022. Нарушение авторских прав; Мы поможем в написании вашей работы!

Studopedia.info - Студопедия - 2014-2022 год . (0.19 сек.) русская версия | украинская версия
Поможем в написании
> Курсовые, контрольные, дипломные и другие работы со скидкой до 25%
3 569 лучших специалисов, готовы оказать помощь 24/7