ИССЛЕДОВАНИЕ ЦИТОКИНОВОГО ПРОФИЛЯ ПРИ БАКТЕРИАЛЬНОМ ВАГИНОЗЕ

 

Изучение цитокинов в восстановительной медицине и гинекологии имеет существенное значение для решения практических задач, поскольку эти биологически активные иммунорегулирующие вещества присутствуют в тканях влагалища. Некоторые из них, прежде всего регулирующие процессы при БВ, могут играть роль в течении восстановительного периода.

Целью данного раздела работы являлось изучение уровня продукции цитокинов в сыворотке крови и влагалищном содержимом у больных с БВ.

Определение цитокинов в сыворотке крови было проведено у 18 человек; в цервикальной слизи – у 33 человек. Условием включения в изучаемую группу была продолжительность существования БВ не менее одного месяца, без выраженных воспалительных явлений. Контрольную группу составили 23 практически пациента, без БВ, сопоставимые по возрасту и полу, общим хроническим заболеваниям, таким как атеросклероз и гипертоническая болезнь.

Результаты исследования уровня цитокинов в СК представлены в таб.15

Таблица 15

Уровни цитокинов в сыворотке крови больных с БВ (M±m)

 

Группы Больных	n	Цитокины (пкг/мл)
IL-1β	TNO-α	IL-2	IL-6	IL-4
БВ 2 ст		76,3±11,1*	63,0±7,3	702,4±36,1	105,5±6,4*,**	87,5±11,2*,**
БВ 3 ст		53,9±9,1	50,8±7,5	543,5±26,7	64,3±4,9*	154,8±18,3*
В среднем		65,1±10,3*	55,2±8,4	674,3±25,6*	87,9±9,2*	127,40±15,6*
Контроль		32,3±4,2	40,5±9,3	426,0±42,7	44,6±7,3	37,8±6,5

*- достоверность различий с контрольной группой (р<0,005)

**- достоверность различий между группами (р<0,005)

 

Установлено, что содержание IL-1b и IL-6 в сыворотке крови больных с БВ в среднем был в 2 раза выше его значений в контрольной группе (р<0,05). В то же время уровни TNF-a и IL-2 существенно не отличались от таковых в контроле, оставаясь в пределах физиологической нормы. Что касается противовоспалительного IL-4, то в среднем его суммарное содержание в сыворотке крови пациентов с БВ было в 3,5 раза выше значений контрольной группы (р<0,05).

Анализ содержания изучаемых цитокинов в зависимости от величины степени БВ показал, что БВ 3ст. характеризуется более высокими значениями уровней IL-1b, IL-2, TNF-a и IL-6, по сравнению с таковыми при БВ 2 ст, однако достоверность различий между этими видами БВ выявлена только для IL-6. В отличие от провоспалительных цитокинов содержание противовоспалительного IL-4 было выше при БВ 2ст, хотя различие в данном случае не достигло критериев достоверности.

Таким образом, в сыворотке крови пациентов с БВ отмечается повышенное содержание IL-1b, IL-6 и IL-4 при нормальном уровне TNF-a и IL-2. Полученные нами данные об уровне TNF-a в сыворотке крови при БВ согласуются с более ранними исследованиями [ ]. Как известно, IL-4 является основным фактором роста и дифференцировки В-лимфоцитов, и увеличение его уровня в сыворотке крови пациентов с БВ может свидетельствовать о важном участии гуморального звена иммунитета в патогенезе данного заболевания.

Определение содержания изучаемых цитокинов во влагалищном секрете и цервикальной слизи (ВСиЦС) (Рис.1) в целом показало, что у пациентов с БВ наблюдаются высокие уровни IL-1b и TNF-a соответственно у 28 (85%) и 30 (91%) пациентов. Среднее их содержание составило 214,2±29,1 пкг/мл и 131,0±14,9 пкг/мл соответственно (при показателях их физиологической нормы 0-50 пкг/мл). Нами была выявлена прямая корреляционная связь (r=0,44, p=0,011) увеличения содержания IL-1b и TNF-a в ВСиЦС при БВ, что доказывало важную роль данных провоспалительных цитокинов в патогенезе этого заболевания. Концентрация IL-2 в ВСиЦС, была выше физиологических показателей, составляя в среднем 1439,8±62,3 пкг/мл.

Исследование уровней IL-4 и IL-6 также была выше нормы. Так, уровень IL-6 составлял в среднем 162,7±18,4 пкг/мл, и высокие его значения (больше 150 пкг/мл) были обнаружены у 25 (75,7%) пациентов с БВ.

Содержание противовоспалительного IL-4 в среднем также было выше значений нормы, составляя 86,9±15,8 пкг/мл, однако высокие уровни (больше 60 пкг/мл) данного цитокина были обнаружены значительно реже, лишь у 15 (45,5%) пациентов с БВ.

Рис. 1. Уровни цитокинов в ВСиЦС и сыворотке крови у больных с БВ (М±m).

 

Следует отметить, что среднее содержание всех изучаемых цитокинов, за исключением IL-4, в ВСиЦС было достоверно выше таковых в сыворотке крови у больных с БВ (рис. 11.). Таким образом, у пациентов с БВ имелись нарушения как системного, так и местного, цитокинового звена иммунитета. Полученные данные о высоких уровнях цитокинов в ВСиЦС, по сравнению с сывороткой крови, подтверждают доказанную возможность локальной продукции цитокинов в органах малого таза.

Нами изучалось содержание цитокинов в ВСиЦС у больных с БВ, вызванной разными этиологическими причинами:

1) антибактериальной терапией (6 человек),

2) гормональным дисбалансом (10 человек)

3) сопутствующими заболеваниями (14 человек) (табл. 16).

Дисбиотический БВ в среднем характеризовался повышением содержания IL-1b, TNF-a и IL-6 в ВСиЦС, тогда как значения IL-2 и IL-4 оставались в пределах физиологической нормы. При этом, БВ2ст сопровождался более значимым накоплением провоспалительных цитокинов, чем БВ 3ст, в частности, было отмечено достоверное различие в уровнях IL-1b и IL-6. БВ вызванная сопутствующими заболеваниями, сопровождался достоверно высоким содержанием IL-1b, значение которого в 2,5 раза превышало таковой при дисбиозе. Уровни TNF-a и IL-2 в ВСиЦС данной группы больных были выше соответственно на 19,3% и 48,3%, чем при БВ, вызванным другими причинами, однако различие не было статистически достоверным (p>0,05). Содержание IL-6 при БВ, вызванным сопутствующими заболеваниями, было достоверно увеличенным по сравнению с БВ, вызванной дисгормонозом. Концентрация IL-4 была значительно (р<0,05) выше таковой при постантибактериальном терапии.

Исследование уровней изучаемых цитокинов в зависимости от степени БВ, вызванной соп. забоелваниями, показало увеличение содержания всех цитокинов, кроме IL-6, при БВ 2ст по сравнению с БВ 3ст, однако различие было статистически достоверным только для IL-4. Отмечалось, что БВ 2ст, вызванная соп заболеваниями, характеризовалась высокой корреляционной связью между содержаниями IL-6 и IL-1b (r=0,95, р=0,013). Уровнь IL-4 в ВСиЦС при соп.заболеваниях значительно (р<0,01) превышал таковой при дисгормональной форме БВ.

БВ при дисгормонозе сопровождался увеличением средних значений всех изучаемых цитокинов, за исключением IL-2, по сравнению с физиологической нормой. Однако повышение уровней TNF-a и IL-6 было меньшим по сравнению с их увеличением при других видах БВ, а IL-1b - более высоким, чем при дисбиотической форме. Концентрация IL-2 в этом случае достоверно не отличалась от таковой при наличии сопутствующих заболеваний, а содержание противовоспалительного IL‑4 было самым высоким среди сравниваемых групп.

Изучение концентрации цитокинов в зависимости от степени БВ, вызванной дисгормонозом, также как и при других этиологических причинах БВ показало, что накопление медиаторов иммунного ответа происходит более активно при БВ 2 ст, что подтверждается достоверным различием в содержании IL-1b и IL-6 при разных по степенях БВ. Различий в уровнях IL‑2 выявлено не было. В отличие от БВ 3ст, вызванной дисбиозом и сопутствующими заболеваниями, БВ при дисгормонозе характеризовалась более высоким содержанием IL-4, хотя различие и не было достоверным.

 

Таблица 16

Содержание цитокинов в ВСиЦС в зависимости от этиологической причины и степени БВ (М±m)

Группы БВ по этиология	БВ	n	Цитокины (пкг/мл)
IL-1b	TNF-a	IL-2	IL-6	IL-4
Дисбиоз	I		130,5±11,3*	140,2±13,0	954,9±45,8	137,5±8,4*	20,2±3,2
II		54,1±5,7*	116,8±10.2	1160,2±38,7	76,6±5,6*	15,4±2,9
Сред		105,0±16,2**	126,0±10,9	1033,2±36,6	113,1±10,9	17,6±3,8**
Сопутствующие заболевания	I		270,5±23,9	165,8±14,0	1843,0±48,4	142,6±10,1	127,0±6,7*
II		236,2±20,1	119,8±7,8	1336,6±38,3	192,3±15,4	62,5±4,9*
Сред.		254,9±32,1**	150,4±17,1	1532,1±47,1	175,0±25,6**	71,9±8,2**
Дисгормоноз	I		196,7±20,1*	115,6±12,3	1675,1±36,6	103,4±8,8*	59,8±6,4
II		83,2±14,2*	70,2±9,7	1501,7±40,3	55,4±4,3*	94,2±8,5
Сред		164,1±19,6	107,2±12,3	1524,1±40,9	84,2±13,7**	72,7±9,4**

* - достоверность различий между типами БВ в пределах одной группы (р<0,05)

** - достоверность различий между этиологическими группами БВ (р<0,05)

 

Таблица 17

Содержание цитокинов в ВСиЦС в зависимости от сроков возникновения и степени БВ (М ±m)

Сроки существования	Степень БВ	n	Цитокины (пкг/мл)
IL-1b	TNF-a	IL-2	IL-6	IL-4
До 1 года	I		159,7±14,3	123,5±10,0*	1202,9±39,8	197,6±10,2	46,4±5,3*
II		119,6±9,9	60,7±7,4*	769,2±36,3	107,0±8,3	15,2±1,7*
Сред		134,1±12,0**	76,9±11,3**	806,4±40,9**	138,6±13,7**	30,5±4,3**
От 1 до 3 лет	I		375,5±26,1*	227,3±17,0	1922,0±48,4	211,3±13,2	72,7±8,5*
II		199,2±18,4*	148,6±11,5	1290,2±32,1	283,2±19,4	57,2±3,8*
Сред		309,3±27,2**	194,4±22,1**	1592,1±64,7**	233,8±21,3*	64,6±9,8**
Больше 3 лет	I		94,3±10,3*	115,6±13,1	1811,3±42,1	81,5±9,6*	81,5±7,3
II		281,5±16,4*	151,4±11,7	2150,4±51,3	152,4±12,8*	109,2±8,3
Сред		196,3±24,1**	121,8±18,6	1996,9±36,9**	122,3±18,5	94,3±11,1**

* - достоверность различий между cстепенями БВ в пределах одного срока возникновения (р<0,05)

** - достоверность различий между группами БВ в зависимости от сроков (р<0,05)

При анализе уровней цитокинов в ВСиЦС пациенток с БВ в разные сроки заболевания (таблица 17) нами было установлено, что в ранние сроки (до 1 года) наблюдалось достоверное повышение среднего содержания IL-1b и IL-6, а также менее выраженное - TNF-a по сравнению с физиологическими нормами. Уровни IL-2 и IL-4 в среднем при этом оставались в пределах нормы. При этом, БВ2 ст. характеризовался более выраженным накоплением всех изучаемых цитокинов, чем БВ3ст., хотя достоверность в различиях выявлена только для TNF-a и IL-4. В ранние сроки выявления БВ2 ст. выявлена высокая прямая корреляционная связь содержания IL-1b с уровнем IL-6 (r=0,75, p=0,033) и TNF-a (r=0,72, p=0,043), а также обратная – с концентрацией IL-4 (r= -0,74, p=0,035), по – видимому, свидетельствующие о значительной активации местного иммунного ответа при изменениях влагалищного секрета.

При БВ, наблюдаемым в срок от 1 до 3 лет, отмечалось продолжение накопления всех изучаемых цитокинов в ВСиЦС, которое проявлялось достоверным увеличением их содержания по сравнению с таковыми в 1-ый месяц от начала заболевания. При этом уровни IL-1b, TNF-a и IL-6 достигали своих максимальных значений. Также как и в ранние сроки заболевания, в период от 1 до 3 лет наблюдается более высокое содержание IL-1b, TNF-a, IL-2 и IL-4 при БВ2ст. по сравнению с БВ3ст. В отличие от других цитокинов, максимальные уровни IL-6 были обнаружены при БВ3ст.

При БВ2ст. в этот срок заболевания была выявлена высокая корреляционная связь между содержанием IL-6 и IL-4 (r=0,81, p=0,026), свидетельствующая о процессах активации Th2-звена иммунитета. БВ3ст в этот период характеризовался прямой корреляционной связью между концентрациями IL-1b и TNF-a (r=0,95, p=0,014).

При БВ, существующем более 3-х лет, в ВСиЦС происходило снижение уровней IL-1b, TNF-a и IL-6, которые, тем не менее, оставались значительно выше нормы. В этот же период наблюдалось дальнейшее накопление IL-2, содержание которого было в 2 раза выше такового у больных с БВ, наблюдаемым в 1-ый год от начала заболевания. Увеличение уровня IL-4 при параллельном снижении концентрации провоспалительных цитокинов в ВСиЦС пациенток с БВ, существующей более 3 лет статистически достоверно. Необходимо отметить, что при БВ, наблюдаемом более 3 лет, в отличие от предыдущих сроков заболевания, содержание изучаемых цитокинов было выше при БВ3ст сравнению с БВ 2ст. Статистически значимые различия были выявлены для IL-1b и IL-6.

Таким образом, представляется оправданным применение иммуномодуляторов в ранние сроки выявления БВ на фоне относительно низкого содержания уровней провоспалительных цитокинов, обладающих, как известно, повреждающим действием и которые достигают своего пика в сроки существования БВ от 1 до 3 лет. В сроки более 3-х лет, несмотря на снижение уровня провоспалительных цитокинов, по нашим данным, клинически отмечается прогрессирование БВ, что снижает эффективность лечения и указывает на подключение аутоиммунных реакций.

БВ2ст отличается более значимым накоплением провоспалительных IL-1b, TNF-a, IL-2, по сравнению с БВ3ст, в период развития БВ до 3-х лет. Данное обстоятельство свидетельствует о том, что при меньшей по величине степени дисбиоза в ранние сроки ее развития степень нарушения цитокинового звена существенно больше, чем при БВ3ст. Вероятно, это связано с активацией клеток местного звена иммунитета. При БВ, существующем более продолжительное время, относительное преобладание в содержании провоспалительных цитокинов отмечается при БВ 3ст.

 

Таким образом, нами было выделено 3 формы бактерильного вагиноза в зависимости от превалирования патогенетического начала:

1) преимущественно дисбиотическая форма,

2) дисгормональная форма.

3) обусловленная сопутствующими заболеваниями

 

У части больных вероятной причиной возникновения БВ было сочетание нескольких факторов. Двое больных в длительно принимали антибиотики широкого спектра действия по поводу хронических заболеваний легких. Полученные нами данные подтверждают мнение о БВ, как о заболевании, связанном с нарушением в микроэкологическом балансе влагалища, которые в свою очередь контролируются эндокринной системой организма. Кроме того, наблюдается отрицательное воздействие длительной антибактериальной терапии на микробиоценоз влагалища, а также нарушение микробиоценоза вследствие воспалительных заболеваний женской половой сферы.