Меры безопасности при постановке ИФА и РНГА
1. Все ингридиенты тест-систем для ИФА и РНГА неинфекционны. 2. Работа с исследуемым патогенным материалом, контрольными токсигенным и нетоксигенным штаммами проводятся согласно требованиям эпидрежима бактериологических лабораторий при работе с микроорганизмами III группы. 3. При постановке ИФА удаление материала из лунок производится при помощи пипеток с грушами, насоса водоструйного или типа ОХ-10, или стряхивания содержимого планшета в емкость с дезинфицирующим раствором (избегать разбрызгивания!). Поверхность планшетов промокают тампоном или сложенной в 4-5 слоев фильтровальной бумагой, пропитанной тем же дезраствором. 4. При работе с автоматическими пипетками использованные наконечники помещают в дезраствор на ночь, затем выдерживают в течение суток в мыльном растворе или «Моющем средстве» (жидком), промывают проточной водой в течение 8-10часов. После этого промывают в дистиллированной воде в течение 1 часа. Сушат в сушильном шкафу при 370 С. 5. Использованные петли помещают в дезраствор на 15-20 минут, затем промывают в смеси Никифорова. Перед употреблением - прожигают. 6. Обработка планшетов. Планшеты для ИФА одноразового пользования после работы помещают на ночь в дезраствор или автоклавируют и больше не используют. Планшеты для РНГА после работы помещают в 3%-ный раствор перекиси водорода на 2-3 часа, затем промывают водопроводной водой. Ватно-марлевым тампоном, смоченным мыльной пеной, вращательными движениями промывают каждую лунку планшета. Ополаскивают планшеты теплой водой, затем погружают на 30 минут в дистиллированную воду. Планшеты вынимают, встряхивают и высушивают в термостате при 370 С. Планшеты пригодны для повторных исследований.
Варианты использования ускоренных методов диагностики дифтерийной инфекции - ИФА и РНГА I вариант Патологический материал, взятый сухим стерильным тампоном, засевают в жидкую питательную среду, которая используется как транспортная (полужидкие агары не применяются). Через 5-18 часов инкубирования в термостате при 370 С, исследуют культуральную жидкость методом ИФА. При получении положительного результата может быть выдан предварительный ответ. Через 18 часов инкубирования материала производят пересев с жидкой на плотную питательную среду для дальнейшего исследования традиционными методами.
II вариант Патологический материал, взятый тампоном, засевают на плотную питательную среду, инкубируют в термостате при 370 С и через 24 часа (или 48 часов) изучают выросшие колонии традиционными методами; отбирают 1-3 колонии, засевают в жидкую питательную среду и через 5-18 часов инкубирования в термостате при 370 С, исследуют пробу в ИФА или РНГА. В случае регистрации положительной реакции в ИФА или РНГА и отрицательной реакции преципитации в агаре проба считается положительной на наличие токсина.
III вариант Применяют при массовых исследованиях, проводимых по эпидемиологическим показаниям или с профилактической целью. Патологический материал, взятый сухим стерильным тампоном, засевают в жидкую питательную среду и через 18 часов инкубации в термостате при 370 С, исследуют пробу в ИФА или РНГА. Положительный результат в ИФА или РНГА свидетельствует о наличии в пробе токсина. Для дальнейшего исследования с использованием традиционных методов (пересев материала с жидкой на плотную питательную среду и т.д.) отбирают только положительные пробы.
ПРИЛОЖЕНИЕ 2
|
