Техника выполнения. Омыление и экстракция. Навеску исследуемого продукта массой 5,00 10,00 г помещают в круглодонную колбу со шлифом вместимостью 250 см3

 

Омыление и экстракция. Навеску исследуемого продукта массой 5, 00…10, 00 г помещают в круглодонную колбу со шлифом вместимостью 250 см³, добавляют 100…150 мг пирогаллола или гидрохинона (на кончике скальпеля) и соответственно 50…70 см³ этилового спирта и 10–15 см³ раствора гидроокиси калия массовой долей 50 %. Дальнейшую процедуру омыления и экстракции. Сухой остаток витаминов растворяют в 4 см³ гексана.

Элюирование витамина D. В колонку, не допуская высыхания верха колонки, вносят 4 см³ раствора и промывают ее 20 см³ петролейного эфира и 4 см³ смеси петролейного и диэтилового эфира в объемном соотношении 1: 1. Эту фракцию отбрасывают. Витамин D элюируют 20 см³ смеси петролейного и диэтилового эфира в объемном соотношении 1: 1. Элюат количественно переносят в коническую колбу вместимостью 50 см³ и выпаривают досуха в водяной бане под током азота при температуре (60 ± 2) ⁰С. Сухой остаток растворяют в 1 см³ гексана. Полученный раствор (далее испытуемый раствор) используют для ВЭЖХ.

Подготовка жидкостного хроматографа к работе. Подготовку прибора осуществляют в соответствии с инструкцией по эксплуатации. Перед началом работы колонку промывают элюентом при скорости его подачи 100…200 мкдм /мин в течение 5–10 мин.

Условия проведения измерений. Измерения проводят в следующих условиях:

Ø разделение компонентов проводят на колонке размером 64 (80, 120)х2 мм;

Ø сорбент – «Силосорб» 600;

Ø элюент - гексан-изопропиловый спирт в объемном соотношении 98, 5: 1, 5 (98: 2);

Ø рабочие длины волн УФ-детектора – 264, 292 и 324 нм (соответственно для витаминов D, Е, А);

Ø скорость элюирования – 150–200 мкдм /мин;

Ø объем анализируемого раствора – 10–40 мкдм³ для витамина D и 4…5 мкдм для витаминов А, Е.

Проведение измерений испытуемого раствора. Для измерений используют метод внешнего стандарта. В колонку хроматографа последовательно вводят равные объемы испытуемого и градуировочного растворов. В качестве градуировочного выбирают раствор, высота пика которого наименее отличается от высоты пика испытуемого раствора. Концентрация градуировочных растворов должна уточняться в день их использования. Пик витамина на хроматограмме испытуемого раствора идентифицируют по времени удерживания. Примеры хроматограмм экстрактов витаминов A, D, Е из белково-витаминно-минеральных добавок представлены в приложении А.

Расчет:

Содержание витаминов X, витамина А – МЕ/кг, витамина Е – мг/кг, в испытуемой пробе вычисляют по формуле:

где: c – концентрация используемых градуировочных растворов, МЕ/см³ (ретинол), мг/см³(α -токоферол);

h_обр – среднеарифметическое значение результатов измерений высоты (площади) пика испытуемого раствора для двух параллельных определений анализируемого компонента, мм или е.о.п.,

V – объем разведения, см³ (4 см³);

10³ – коэффициент пересчета граммов в килограммы;

α – коэффициент пересчета в ацетатную форму;

h_гр – среднеарифметическое значение результатов измерений высоты (площади) пика градуировочного раствора для двух параллельных определений анализируемого компонента, мм или е.о.п.

m – масса навески испытуемой пробы, г.

 

 

Содержание витамина D X, МЕ/кг, в испытуемой пробе вычисляют по формуле:

где: 1, 15 – коэффициент, учитывающий превращение витамина D в провитамин.

СПИСОК РЕКОМЕНДУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

 

1. Доронин, А.Ф. Функциональное питание /А.Ф. Доронин, Б.А. Шендеров. – М.: ГРАНТЪ, 2002. – 296 с.

2. Юдина, С.Б. Технология продуктов функционального питания / С.Б. Юдина. – М.: ДеЛи принт, 2008. – 280 с.

3. Жировые продукты для здорового питания. Современный взгляд. / Л.Г. Ипатова [и др.]. – М.: ДеЛи принт, 2009. – 396 с.

4. Обогащение пищевых продуктов витаминами и минеральными веществами. Наука и технология. / В.Б. Спиричев [и др.]; под общ. ред. Е.Б. Спиричева. – Новосибирск: Сибирское универ. изд-во, 2006. – 548с.

5. Методические указания МР 2.3.1.2432-08 " Нормы физиологических потребностей в энергии и пищевых веществах для различных групп населения Российской Федерации" – М., 2008.

Учебное издание

 

РАЗРАБОТКА ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ПРОДУКТОВ ПИТАНИЯ

 

Лабораторный практикум

 

Редактор

Подписано в печать. Формат 60х84 1/16. Усл. печ. л..

Уч.-изд. л.. Тираж 100 экз. Заказ

 

ФГБОУ ВПО Ивановский государственный химико-технологический университет

Отпечатано на полиграфическом оборудовании кафедры экономики и финансов ФГБОУ ВПО «ИГХТУ»

 

153000, г. Иваново, пр. Ф. Энгельса, 7