Студопедия Главная Случайная страница Обратная связь

Разделы: Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

Желточно-солевой агар




а) Агар мелко измельчают (1,8-2,0 г), добавляют 100 мл дистиллированной воды, рН 7,1-7,2, прогревают до расплавления агара, остужают до 500 С.

б) Соблюдая правила асептики, вносят 20 % желточную взвесь (желток, асептически извлеченный из куриного яйца, взбалтывают в 200 мл изотонического раствора хлорида натрия).

в) Взвесь смешивают, разливают по 20 мл в чашки Петри. Хранят в холодильнике до употребления (две недели). Используют как элективную среду для выделения стафилококка.

3. Среда Китта-Тароцци

Бычью печень или другие органы (можно плаценту) нарезают мелкими кусочками, заливают трехкратным количеством МПБ, рН 7,4-?,6, кипятят 30 мин. Бульон фильтруют, а печень промывают водопроводной водой, просушивают с помощью фильтровальной бумаги. Распределяют по пробиркам по 3-4 г печени и по 7-8 мл МПБ. Стерилизуют 30 мин при 1 атм. Применяют для выделения анаэробов.

Элективными являются среды для первичного выделения энтеробактерий:Плоскирева (угнетает рост многих бактерий, способствует росту сальмонелл и шигелл), Эндо (различает лактозо (+) и лактозо (-) бактерии кишечной группы), висмут-сульфит агар (элективен для сальмонелл, ингибирует рост других бактерий) и пр.

Среда П-2.

Применяется для выделения протея. В 100 мл растопленного 2 % агара добавляют 3 мл дрожжевого экстракта, 1 г маннита, 1 г мальтозы, 0,8 г желчных солей, 0,2 г цитрата железа аммонийного, 0,05 г гипосульфата натрия, 2,5 г/мл 0,01 % раствора кристаллического фиолетового, 0,5 мл щелочного раствора фенолового красного, рН 7,4-7,7. Стерилизуют при 0,5 атм 15 мин. Добавляют 10-12 тыс ЕД полимиксина М. Разливают в чашки Петри. Среда имеет красно-коричневый цвет.

Для выделения многочисленной группы энтеробактерий после элективно-диагностических сред применяют дополнительные элективно-диагностические среды. Этими средами являются:

1. Среда Олькеницкого.

а) Соль Мора (0,2 г) и гипосульфат предварительно растворяют в дистиллированной воде в пробирках. Отдельно растворяют три углевода (лактозы, сахароза, глюкоза по 1 г) и мочевину (10 г) в колбе на водяной бане.

б) Все ингредиенты добавляют к расплавленному агару, размешивают и фильтруют через стерильную марлю, устанавливают рН 7,2-7,4, вносят индикатор (фиолетовый красный - 0,1 г, вода дистиллированная 25 мл), разливают в пробирки по 5-6 мл.

в) Стерилизуют при 0,5 атм 20 мин, охлаждают в скошенном положении, для получения столбика высотой 2,5 см и косяка - 4 см. Готовая среда бледно-розового цвета.

2. Среда Ресселя.

Среда предложена для определения у микробов ферментов, расщепляющих лактозу и глюкозу, с применением индикатора Андреде. Среда содержит МПА, к которому добавлены 2 % лактозы и 1 % глюкозы и 2 % реактива Андреде. Среду стерилизуют текучим паром 3 дня подряд по 30 мин. Разливают по пробиркам и скашивают, чтобы столбик был снизу, а сверху – косяк. Посев в среду проводят уколом в столбик и затем штрихом по косяку. Расщепление микробами только глюкозы окрашивает столбик среды. При расщеплении лактозы краснеет весь столбик и косяк, потому, что ее больше. В случае газообразования появляются пузырьки газа или разрыв среды. Применяют среду для дополнительной дифференциации бактерий кишечной группы.

4. Среда Клиглера.

Среда коммерческая, производства НИИИВС им. Мечникова (г.Петрово-Дальнее).

Дифференциально-диагностические среды.

1. Среды Хисса:

К 1 % пептонной воде добавляют 0,5 % раствор одного из углеводов (глюкоза, лактоза сорбит, маннит и пр.) и индикатор Андреде (кислый фуксин в 1 н растворе NaOH). Среды разливают по пробиркам, содержащим поплавки (трубка 3 см с одним запаянным концом) для улавливания газообразования при разложении углеводов. Стерилизацию проводят текучим паром. Среды бесцветны, рН 7,2-7,4. При сбраживании углевода среда должна приобретать красный цвет.

2. Среда с мочевиной Кристенсена.

К 100 мл дистиллированной воды добавить пептон 0,1 г, хлорида натрия -0,5 г, калия динитрофосфата - 0,2 г, агара- 2 г, глюкозы- 0,1 г, фенолового красного 0,2 % - 0,6 мл, 10 мл 20 % мочевины.

Пептон, соль, агар растворить при нагревании, установить рН 6,8-6,9, профильтровать, стерилизовать при 1150 С текучим паром 1 ч, охладить до 500 С. Раствор мочевины асептично добавить к основе. Среду разлить в пробирки, охладить и скосить. При положительном результате среда становиться красной, при отрицательном результате на уреазу - остается желтой.

3. Среды для определения декарбоксилаз, лизина, аргинина, орнитина.

К 40 мл мясной воды добавить 0,5 г пептона, глюкозы- 0,1 г, дистиллированной воды - 60 мл, 1 мл 1,6 % спиртового раствора бромтимолового синего, L-аминокислоты- 2 г или DL-аминокислоты, дрожжевого экстракта - 0,3 г. В воде растворить белковую питательную основу и глюкозу. Установить рН 6,0-6,1. Разделить среду на 4 равных части. В каждую из трех порций внести одну из перечисленных аминокислот, четвертая порция - контроль.

Среды кипятят 5-10 мин, установить вновь рН 6,0-6,1, прибавить индикатор и разлить в пробирки по 2- мл. Стерилизовать при 0,5 атм 15 мин. При расщеплении аминокислот цвет среды из желтой изменится в синий. В контроле - цвет желтый.

3. Среда Кларка.

а) Ингредиенты: пептон - 5,0 г

глюкоза - 5,0 г

калий фосфат двузамещенный - 5,0 г

б) Растворяют все ингредиенты в небольшом количестве дистиллированной воды (80-100 мл) при подогревании на водяной бане в течение 29-30 мин. Затем их охлаждают до 200 С, фильтруют, доводят дистиллированной водой до 1000 мл, разливают в пробирки по 5 мл. Стерилизуют дробно текучим паром три дня подряд.

в) К суточной культуре на среде Кларка добавляют равный объем 20 % раствора едкого калия. Встряхивают и помещают в термостат при 370 С в наклонном положении. Учет проводят через 3-4 ч и на следующий день. При положительной реакции верхний слой жидкости окрашивается в оранжево-розовый цвет. При отрицательном результате - окраска остается неизменной. С помощью метода определяется наличие у микробов ацетилметилкар-бинола-ацетоина.

Существует очень много других сред относящихся к элективным, дифференциально- диагностическим и др., которые невозможно привести в данном разделе.

Бактериологический контроль питательных сред

Все серии питательных сред, изготавливаемые промышленным или лабораторным способами, необходимо контролировать по нескольким основным свойствам:

1. заданные цвет, консистенция, влажность, прозрачность,

2. ростовые свойства - скорость роста бактерий на среде, воспроизводимость, пышность роста и пр.

3. элективность - воспроизводимый рост необходимых бактерий, при исключении роста остальных,

4. ингибирование - воспроизводимое отсутствие роста посторонней микрофлоры.

Питательные среды должны давать рост бактерий (количество колоний, размер их, цвет и пр.), в соответствии с культуральными свойствами. Контроль питательных сред должен проводится с помощью тест-систем - типовых или местных штаммов бактерий. Исходная взвесь тест-культуры для контроля составляет 1 млрд бактерий в 1 мл.

Чувствительность сред определяется максимальным посевным разведением культур из исходной взвеси, которое дает максимальный рост бактерий на всех чашках. Скорость роста устанавливается по минимальному времени инкубации посевов в часах, в течение которого обеспечивается формирование четких видимых невооруженым глазом колоний бактерий.







Дата добавления: 2014-11-10; просмотров: 2687. Нарушение авторских прав; Мы поможем в написании вашей работы!


Рекомендуемые страницы:


Studopedia.info - Студопедия - 2014-2021 год . (0.003 сек.) русская версия | украинская версия