Опыт 3. Количественное определение тиамина хлорида в таблетках флюориметрическим методом.

Точную навеску порошка растертых таблеток, содержащую около 0,01 г тиамина хлорида, помешают в мерную колбу емкостью 100 мл, добавляют 70-80 мл воды и перемешивают при нагревании на теплой водяной бане в течение 1 минуты, охлаждают до комнатной температуры, доводят водой до метки и фильтруют.

1 мл фильтрата помещают в мерную колбу ёмкостью 100 мл, доводят водой до метки и перемешивают. В четыре делительных воронки с притертыми пробками помешают: в 1 и 2 по 1 мл приготовленного испытуемого раствора, в 3 и 4 по 1 мл стандартного раствора тиамина хлорида. В 1 и 3 делительные воронки, соответственно с испытуемым и стандартным растворами добавляют по 3 мл окислительной смеси, а в оставшиеся две делительные воронки (2 и 4) – 3 мл 15% раствора гидроксида натрия и встряхивают. К содержимому всех воронок приливают пипеткой точно по 10 мл бутилового (изобутилового или изоамилового) спирта, встряхивают в течение 2 минут и оставляют для разделения слоёв. Водные слои отделяют, а к спиртовым экстрактам добавляют по 5-7 г безводного сульфата натрия, оставляют на 5 минут и через верх воронки растворы сливают в кюветы флюориметра.

Измеряют флюоресценцию стандартного раствора и контрольной пробы к нему (растворы из делительных воронок 3 и 4 соответственно), затем флюоресценцию испытуемого раствора и контрольной пробы к нему (растворы из делительных воронок 1 и 2 соответственно).

Содержание тиамина хлорида в одной таблетке в граммах (Х) рассчитывают по формуле:

 

где:

· А₁ – показание флюориметра для испытуемого раствора;

· А₂ – показание флюориметра для контрольной пробы к испытуемому раствору;

· А₃ – показание флюориметра для стандартного раствора;

· А₄ – показание флюориметра для контрольной пробы к стандартному раствору;

· m – навеска, г;

· Р_ср – средний вес таблетки, г.

Приготовление стандартного раствора тиамина хлорида. 10,0 мг (точная навеска) тиамина хлорида, предварительно высушенного при 100-5°С в течение 2 часов, растворяют в мерной колбе ёмкостью 100 мл в 25% спирте с добавлением 1 капли концентрированной хлористоводородной кислоты и доводят 25% спиртом до метки (основной раствор – годен в течении месяца при хранении в холодильнике в темной склянке с притертой пробкой).

1 мл основного раствора помещают в мерную колбу емкостью 100 мл и доводят водой до метки (рабочий раствор – годен в день приготовления). 1 мл стандартного раствора содержит 0,001 мг тиамина хлорида.

Окислительная смесь. 80 мг красной кровяной соли помещают в мерную колбу емкостью 200 мл, растворяют в 8 мл воды и доводят 15% раствором гидроксида натрия до метки.

Бутиловый спирт. Спирт проверяют на отсутствие флюоресценции. В случае наличия флюоресценции спирт очищают следующим образом: к 500 мл спирта добавляют 8-10 г активированного угля и оставляют на сутки периодически встряхивая, фильтруют и перегоняют, собирая фракцию с температурой кипения 117°С.

Контрольные вопросы.

1. Напишите уравнение реакции тиамина хлорида с красной кровяной солью в щелочной среде.

2. Выведите формулу для расчета содержания тиамина хлорида основания в размерности мг/100 г продукта, если известно что анализ проводился по методике, описанной в опыте 3.

3. Какова реакция водного раствора тиамина хлорида?

4. Объясните почему реакцию тиамина хлорида с раствором соли диазония проводят в щелочной среде, а не в слабокислой, как это обычно делают при азосочетании солей диазония с ароматическими аминами?

5. Дает ли тиамина хлорид общую реакцию на ароматические амины, заключающуюся в диазотировании амина и последующем азосочетании образующейся соли диазония с β-нафтолом?