Опыт 13. Открытие кобальта в цианокобаламине.

В фарфоровый тигель помещают такой объём ампульного раствора цианокобаламина, чтобы содержание в нем препарата было около 1 мг, добавляют 0,05 г гидросульфата калия и упаривают раствор, а затем сплавляют до осветления плава.

Охлаждают плав, прибавляют 3 мл воды и нагревают до растворения плава. Затем охлаждают, добавляют 1 каплю раствора фенолфталеина и нейтрализуют раствором едкого натра до светло-розового окрашивания. Прибавляют 0,5 г ацетата натрия, 0,5 мл 30% уксусной кислоты и 0,5 мл 0,5% раствора нитрозо-Р-соли; появляется красное окрашивание, сохраняющееся после прибавления 0,5 мл 25% хлористоводородной кислоты.

Опыт 14. Идентификация и количественное определение цианокобаламина в растворе.

Ампульный раствор цианокобаламина для инъекций разводят водой до концентрации 0,002% и измеряют на спектрофотометре УФ-спектр в кювете толщиной 1 см в зоне 240-600 нм. Раствор препарата имеет максимумы поглощения при 278±1 нм, 361±1 нм и 548±2 нм.

Измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре при длине волны 361 нм в кювете толщиной 1 см, используя в качестве контрольного раствора воду.

Содержание цианокобаламина (Х) в мг в 1 мл препарата вычисляют по формуле:

 

 

где:

· D – оптическая плотность испытуемого раствора;

· V₀ – объем препарата, взятый для разведения, мл;

· V₁ – конечный объем раствора после разведения, мл;

· 207 – удельный показатель поглощения чистого цианокобаламина при длине волны 361 нм.

Контрольные вопросы.

1. Объясните почему при открытии кобальта в цианокобаламине необходимо предварительно провести минерализацию препарата?

2. Каковы кислотно-основные свойства цианокобаламина?

3. Какова степень окисления кобальта в цианокобаламине?

4. Чем отличается по строению цианокобаламин и коферментная форма витамина В₁₂?

 

ОПРЕДЕЛЕНИЕ АСКОРБИНОВОЙ КИСЛОТЫ

 

Опыт 15. Реакция с нитратом серебра.

0,05 г препарата растворяют в 2 мл воды и прибавляют 0,5 мл 2% раствора нитрата серебра; выпадает темный осадок.

Опыт 16. Реакция с метиленовым синим.

Клубень картофеля или часть кочана капусты натирают на терке из нержавеющей стали. Растертую массу отжимают через полотняную ткань. К 1 мл свежеотжатого сока картофеля или капусты добавляют 1-2 капли 0,01% раствора метиленового синего, 2-З капли 5% раствора карбоната натрия и слегка подогревают. Наблюдается обесцвечивание синей окраски.

Опыт 17. Реакция с 2,6-дихлорфенолиндофенолом (метод Тильманса).

К 1 мл свежеотжатого сока картофеля или капусты добавляют 3-4 капли 2% раствора хлористоводородной кислоты и медленно по каплям 0,0005М раствор натриевой соли 2,6-дихлорфенолиндофенола. По мере добавления реактива окраска вначале исчезает, а затем появляется розовая окраска.

Опыт 18. Реакция с красной кровяной солью.

К 1мл сока капусты или картофеля прибавляют 2 капли 5% раствора гидроксида калия, 2 капли 5% раствора красной кровяной соли и встряхивают пробирку, после чего добавляют 6-8 капель 10%-ного раствора хлористоводородной кислоты и 1-2 капли 1% раствора хлорного железа. Появляется синие или зеленовато-синие окрашивание.