Работа 3. Определение углеводов методом тонкослойной хроматографии
Качественной характеристикой в методе тонкослойной хроматографии является показатель Rf. Сравнивая Rf свидетелей и исследуемых углеводов, проводят их идентификацию. Реактивы и материалы: ü Исследуемый раствор – сок ü 5%-ный раствор глюкозы, фруктозы, мальтозы, лактозы, сахарозы ü Элюент: н -бутанол – уксусная кислота – вода (60 мл – 15 мл – 25мл) ü Реагент: н -бутанол – вода – уксусная кислота – фосфорная кислота – анилин – дифениламин (60 мл – 25 мл – 15 мл – 10 мл – 1 мл – 2 г) ü Пластинки силуфола Методика проведения анализа На пластинку наносят 1 мкл 5%-ного водного раствора сахаров в виде сплошной полосы, отступая от бокового и нижнего краев пластинки на расстояние 10 мм. Пластинку вертикально помещаю в камеру, которая заполнена разделяющей смесью (элюентом) до высоты 5 мм. Пластинку выдерживают в камере до тех пор, пока высота подъема фронта восходящего растворителя не достигнет отмеченной длины разделительного пути. Разделительный путь (расстояние от линии старта до фронта растворителя) равен 90 мм. По окончании хроматографического разделения пластинку вынимают из камеры и сушат при комнатной температуре до полного испарения остатков растворителей. Затем разделение повторяют в той же системе растворителей. Высушенные пластинки погружают в реагент. Пластинки снова высушивают и проявляют в термостате при температуре 120°С в течение 5 мин. Проявленные фракции имеют различную окраску на белом фоне пластинок. Идентификацию сахаров проводят с помощью свидетелей и по значениям Rf. Данные занося в таблицу в графу для расчетных значений. Таблица 3.1 Результаты тонкослойной хроматографии
По результатам исследования делается вывод о структуре исследуемого вещества.
|
