Проведение анализа. С 5 каплями сыворотки, слюны и мочи проводят биуретовую реакцию (см

С 5 каплями сыворотки, слюны и мочи проводят биуретовую реакцию (см. " Лабораторная работа 1"), определяя наличие или отсутствие белка в пробах.

Дальнейшие действия зависят от наличия или отсутствия белка в пробах:

если жидкость не содержит белок, то с 10 каплями исследуемого материала проводят нингидриновую реакцию (см. " Лабораторная работа 1") для определения наличия или отсутствия a‑ аминокислот;

если в жидкости присутствует белок, то для последующего исследования берут 20 капель биологической жидкости, в нее добавляют 5 капель 10% раствора ТХУ и нагревают до осаждения белка. Белок отделяют центрифугированием или фильтрованием через бумажный фильтр (предварительно смочив фильтр водой).

Далее в безбелковом надосадке (или фильтрате) с помощью нингидриновой реакции определяют наличие или отсутствие a‑ аминокислот. Для этого к нему добавляют 5 капель 0, 5% р-ра нингидрина и нагревают в кипящей водяной бане.

Оформление работы

Результаты анализа вносят в таблицу. Знаками ‘’+’’ и " –‘’ отмечают результаты наблюдения.

Делают вывод о содержании белка и аминокислот в биологических жидкостях и его причинах.

Объект исследования	Обнаруженные соединения
Белок	Свободные аминокислоты
Сыворотка крови Слюна Моча

Практическое значение

Свойство биологических жидкостей изменять свой состав при патологии нашло применение в клинико-диагностических лабораториях для диагностики заболеваний и контроля лечения. Многие методы определения веществ требуют наличия безбелковой жидкости, поэтому они начинаются с удаления белка из раствора путем фильтрации или центрифугирования.

Цветные реакции на белок и аминокислоты используют в биохимических исследованиях для контроля полноты удаления белка из жидкости, наличия аминокислот в биологических средах, а также качественного анализа белковых лекарственных средств в фармацевтической практике.

Тема 1.2.
Структура и физико-химические свойства белков

Актуальность

Выделение белков из раствора (в том числе высаливание и денатурация) широко используется в медицине для диагностических целей, получения и очистки белковых лекарственных препаратов, в экспериментальных исследованиях.

Цель

Изучить физико-химические свойства белков (молекулярная масса, форма, ионизация, гидратация, растворимость) и основные типы структур белковых молекул.

Научиться осаждать белки из раствора разными методами и использовать способность к осаждению белков в лабораторной практике.

Вопросы для самоподготовки

1. Строение протеиногенных аминокислот. Образование пептидной связи в пептидах и белках.

Уровни организации структуры белковых молекул (первичная, вторичная, третичная, четвертичная).

Связи, участвующие в формировании уровней структуры белка. Функциональные группы аминокислот, ответственные за образование этих связей.

Четвертичная структура белков. Что такое комплементарность протомеров? В чем заключаются кооперативные изменения конформации протомеров?

Свойства белков: амфотерность, ионизация (заряд), гидратация, растворимость. Что такое изоэлектрическая точка?

Молекулярная масса пептидов и белков. Способы ее определения (ультрацентрифугирование, гель-фильтрация).

Свойства белковых растворов. Факторы, стабилизирующие белковую молекулу в растворе. Коллоидные свойства белков.

Денатурация белков. Факторы, вызывающие денатурацию белков (физические, химические, биологические). Свойства денатурированного белка.

Ренативация белка, ее механизмы.

Способы удаления белков из раствора: осаждение кислотами, тяжелыми металлами, органическими растворителями. Принцип реакций осаждения белка.

Способы очистки белковых растворов от примесей (высаливание, гель-фильтрация, диализ). Принцип методов.