Принцип

Сульфгидрильные группы в белке или пептиде подвергаются щелочному гидролизу, в результате чего происходит отщепление серы в виде сульфида натрия Na₂S, который вступает в дальнейшие реакции:

реакция Фоля – Na₂S с ацетатом свинца Pb(CH₃COO)₂ дает черный или бурый осадок сульфида свинца;

реакция с нитропруссидом – Na₂S дает с нитропруссидом натрия соединение, окрашенное в красно-коричневый цвет.

Проведение анализа

5 капель 1% раствора белка и 5 капель 30% раствора NaOH кипятить 1‑ 2 минуты. Разделить содержимое на 2 части для реакций " а" и " б".

а) Реакция Фоля

К 5 каплям гидролизата добавляют 1 каплю раствора уксусно-кислого свинца и нагревают до кипения. Отмечают появление бурого или черного осадка.

б) Реакция с нитропруссидом

К 5 каплям гидролизата добавляют 2-3 капли раствора 5% натрия нитропруссида. Отмечают появление красно-коричневого окрашивания.

Практическое значение цветных реакций

Цветные реакции, являясь универсальными (биуретовая, нингидриновая) и специфическими (реакция Фоля, ксантопротеиновая), позволяют установить белковую природу вещества, обнаружить белок и аминокислоты в растворе, изучить состав белков и пептидов.

Принцип этих реакций используется для количественного определения аминокислот и белков в биологических жидкостях.

Оформление работы

Результаты оформляют в виде таблицы, где отмечают полученный цвет раствора и интенсивность окраски. Интенсивность окраски обозначают следующим образом: ‘’–‘’ отсутствие окраски; ‘’+’’ слабая окраска; ‘’++’’ сильная окраска; ‘’+++’’ очень сильная окраска.

Объект исследования	Реакции
Биурето­вая	Нингид­риновая	Ксантопро­теиновая	Фоля	С нитро­пруссидом
Раствор яичного белка

В выводах указывается на возможность обнаружения пептидных связей и некоторых типов аминокислот при помощи используемых реакций.

Лабораторная работа 2

Исследование наличия белка и свободных
аминокислот в биологическом материале

Химический состав биологических жидкостей (кровь, моча, желудочный сок, слюна и т.п.) характеризуется постоянством и отражает состояние биохимических процессов, происходящих в органах и тканях. Отклонение от нормы в качественном и количественном составах биологических жидкостей может быть показателями патологического процесса.

Материал исследования

Сыворотка крови, слюна, моча.

Реактивы

1) 0, 5% р-р нингидрина, 2) 10% р-р NaOH, 3) 10% р-р трихлоруксусной кислоты (ТХУ), 4) 5% р-р CuSO₄.