Проведение реакции

Приготовление препарата слюны (выполняет дежурный для всей группы).

Собирают 1 мл слюны в мерную пробирку и доводят дистиллированной водой до метки 10 мл, хорошо перемешивают (не встряхивая!).

Чтобы исключить ферментативную реакцию до достижения необходимой температуры, растворы слюны и крахмала сначала прогревают по отдельности.

1. В 4 пробирки (1, 2, 3, 4) вносят по 10 капель крахмала. Флакон с раствором крахмала предварительно взболтать! В следующие 4 пробирки (5, 6, 7, 8) вносят по 10 капель разведенной слюны (раствор a‑ амилазы). Пробирки делят по парам – 1-5, 2-6, 3‑ 7, 4‑ 8.

2. 1-ю пару пробирок помещают в баню со льдом (0°С). 2-ю пару оставляют при комнатной температуре (20°С). 3-ю пару выдерживают при температуре 38-40°С. 4-ю пару пробирок помещают в кипящую водяную баню (100°С).

3. Через 3 минуты содержимое каждой пары пробирок объединяют, перемешивают и немедленно помещают на 10 минут в те же условия.

4. Проверяют ход реакции. Для этого из 3-й пробирки (38-40°С) отбирают на предметное стекло 3 капли смеси и добавляют 1 каплю реактива Люголя:

если окраска синяя, то это указывает на низкую скорость гидролиза крахмала. В этом случае необходимо продлить время инкубации.

появление красного или желтого окрашивания указывает на завершение гидролиза крахмала амилазой (можно переходить к п.6).

6. По завершении гидролиза крахмала в 3-й пробе во все пробирки одновременно добавляют по 2 капли реактива Люголя и сравнивают цвет раствора в пробах.

Оформление работы

Отмечают принцип метода, ход работы. Результаты работы оформляют в виде таблицы. В выводах отмечают оптимальную температуру действия фермента.

N пробы	Температура инкубации	Окраска	Относительная скорость реакции
	0°С 20°С 38°С 100°С

 

Исследование влияния температуры на
активность дегидрогеназ дрожжей

Реактивы

1) 10% р-р глюкозы, 2) 0, 01% р-р метиленового синего.

Материал исследования

Суспензия пекарских дрожжей.

Принцип

При окислении глюкозы анаэробные дегидрогеназы дрожжей катализируют реакции переноса атомов водорода от продуктов окисления на промежуточный акцептор (восстановление акцептора). Обнаружение активности дегидрогеназ проводится по изменению окраски добавленного к суспензии дрожжей метиленового синего (акцептора), который при восстановлении обесцвечивается.

Проведение анализа

	Опыт 1, капли	Опыт 2, капли
Суспензия дрожжей
	Выдерживают при 100°С в течение 10 минут	––
10% р-р глюкозы
0, 01% р-р метиленового синего
	Пробирки закрывают пробками и помещают на 10 минут в водяную баню при 38°С. Наблюдают за изменением окраски в пробирках.