Исследование мяса на инвазионные болезни

Цель занятия:

Изучить методы исследования продуктов убоя на инвазионные болезни (трихинеллез, цистицеркоз).

Оборудование и реактивы: трихинеллоскоп,компрессориумы,изогнутые ножницы, пинцет,иглы препаровальные,0,5%-ный раствор НС1, раствор метиленового голубого,1%-ный раствор метиленовой сини,раствор желчи (50%-ный или 80%-ный на физиологическом растворе).

 

Трихинеллез – это антропозоонозная болезнь, болеют данной болез­нью всеядные и плотоядные животные.

Данную болезнь вызывает нематода из семейства Trichinelidae.

Из убойных животных болеют свиньи, болеет трихинеллезом и чело­век. Человек заражается возбудителем трихинеллеза (trichinella spiralis) при поедании не обезвреженного мяса, содержащие живые инкапсулированные личинки паразита.

Тушки поросят-сосунов исследуют на трихинеллез с 3-х недельного возраста.

Большое распространение среди методов диагностики трихинеллеза получила трихинеллоскопия.

Трихинеллоскопия – это исследование с помощью трихинеллоскопа или микроскопа мышечных срезов для обнаружения личинок трихинелл.

1 Трихинеллоскопия. Берут из ножек диафрагмы два кусочка мяса по 60 г каждой. Если пробу из ножек диафрагмы взять невозможно, берут кусочек других мышц – мышечной реберной части диафрагмы, межреберных, поясничных, жевательных, шейных. Для исследования готовят мышечные срезы ножницами Купера величиной с овсяное зерно. От каждой исследуемой туши берут не менее 24 срезов. Когда срезы положены на нижнее стекло компрессориума, на него накладывают верхнее стекло и, закручивая гайки, раздавливают срезы в такой мере, чтобы через них можно было легко читать газетный текст. Срезы просматривают при увеличении 5-70 раз при помощи обычного микроскопа (рисунок 1)

 

 

Рисунок. 1. Trichinella spiralis

2 Проекционное трихинеллоскопирование облегчает исследование, так как не требует зрительного напряжения, а возможность видеть на экране весь срез целиком в значительной степени сокращает время исследования. Исследователь может провести 45-60 срезов в час. Проекционные трихинеллоскопы устанавливают в затемненной комнате, а в соседней - готовят компрессориумы со срезами и передают трихинеллоскописту. Компрессориум укрепляют в подвижной рамке проекционного трихинеллоскопа. Изображение мышечного среза попадает на зеркало и от него отражается на экран. Рамку с закрепленным в ней компрессориумом можно передвигать, чтобы правильно установить срез на экране, затем фокусировать изображение до предельной четкости.

Проекционная трихинеллоскопия более приемлемо для свежей неконсервированной свинины.

3 Метод группового исследования свинины на трихинеллез основан на переваривании в специальной жидкости образцов мышечной ткани, взятых из ножек диафрагмы нескольких свиных туш, и обнаружении в осадке переваренной массы личинок трихинелл. Исследование на трихинеллез групповым методом осуществляют с помощью аппарата для выделения личинок трихинелл (АВТ). Он представляет собой термостатируемую камеру с вмонтированными в нее восемью реакторами, предназначенными для переваривания мышечной ткани в специальной жидкости. Каждый реактор имеет мешалку с индивидуальным приводом от электродвигателя и отстойник для сбора осадка.

Для исследования туш на трихинеллез групповым методом отбирают пробы мышц из ножек диафрагмы на границе перехода мышечной ткани в сухожилие. При исследовании свиных туш, полученных от животных из зон, где регистрируют трихинеллез, готовят групповую пробу общей массой до 100 г из проб по 5 г от 20 туш и менее – по 2,5 г от каждой их двух ножек диафрагмы одной туши. От свиных туш, полученных из зон, где трихинеллез не регистрируют в течение последних 8-10 лет, готовят групповую пробу общей массой до 100 г из проб 1 г от 100 туш или по 0,5 г от каждой из ножек диафрагмы одной туши. Групповую пробу и измельчают на мясорубке, а фарш собирают в стакан с порядковым номером, соответствующим номеру реактора.

Для получения специальной жидкости в каждый из реакторов заливают теплую (40-42⁰С) воду в количестве по 2,5 л. Непосредственно перед заправкой реактора измельченной групповой пробой в него вносят 6 г пищевого пепсина активностью 100 тыс. ЕД и 30 мл концентрированной соляной кислоты. Для перемешивания смеси включают мешалку на 1 мин. Затем добавляют измельченную групповую пробу и включают мешалку на 45 мин. Продолжительность переваривания контролирует реле времени. В такой же последовательности загружают и остальные реакторы.

По окончании переваривания групповой пробы реле времени автоматически отключают мешалку. После отстаивания жидкости в реакторе (15-20 мин) открывают зажим, перекрывающий эластичную трубку-отстойник, сливают 1-1,5 мл жидкости с осадком на часовое стекло и осадок исследуют на наличие трихинелл.

После каждого исследования через трубку-отстойник сливают отработанную жидкость, реактор промывают водой с температурой не ниже 80⁰С и подготавливают для последующей работы. По окончании смены реакторы промывают раствором моющих средств.

При выявлении в осадке одной или более личинок трихинелл исследуемую группу свиных туш переводят на запасной подвесной путь, разделяют ее на 8 групп по 12-13 туш (превоначальная группа проба от 100 туш) или 2-3 туши (первоначальная групповая проба от 20 туш), берут снова пробы и проводят трихинеллоскопию групповым методом исследования, как указано выше.

Туши из группы, давшей положительные результаты при повторной трихинеллоскопии, исследуют индивидуально в аппарате АВТ, выявляя таким образом тушу, пораженную личинками трихинелла.

4 Трихинеллоскопия консервированной (мороженой, соленой) свинины. Мороженую свинину сначала оттаивают. Толщина срезов не должна превышать 1,5 мм. После размещения срезов на нижнем стекле компрессориума их слегка раздавливают верхним стеклом. Затем верхнее стекло снимают и на каждый срез наносят пипеткой каплю 0,5% раствора соляной кислоты или раствора метиленового голубого (5 мл насыщенного спиртового раствора и 195 мл дистиллированной воды). Продолжительность обработки срезов 1 мин. После этого вновь накладывают верхнее стекло и срезы исследуют обычным порядком. Обработанные соляной кислотой мышечные срезы становятся прозрачными, сероватого цвета. При наличии трихинелл капсула имеет вид серебристого ободка, жидкость в полости капсулы вследствие коагуляции белка просветления. Срезы, обработанные раствором метиленового голубого, окрашиваются в синеватый цвет, жидкость внутри полости трихинеллы – в нежно-голубой, паразит не окрашивается и становится хорошо видимым. Если мясо вследствие длительного хранения потеряло часть влаги, то полость трихинеллы окрашивается в более темные тона, чем мышечные волокна.

5 Мышечные срезы из солонины делают в 2 раза тоньше, чем при трихинеллоскопии консервированной свинины. Их также рекомендуется слегка раздавить верхним стеклом компрессориума, после чего на каждый срез наносят каплю глицерина, разведенного пополам с водой, или 5% раствора молочной кислоты для просветления срезов. Время обработки и порядок исследования такие же, как и мороженой свинины.

6 Трихинеллоскопия свиного шпика. Трихинеллы могут локализоваться в подкожных жировых отложениях, в которых макроскопически не видно мышечных прослоек. Шпик без видимых мышечных прослоек на всю толщину и срезы берут с внутренней поверхности шпика по линии его расслоения. Делают не менее 5 срезов толщиной около 0,5 мм и погружают их в 1% раствор фуксина на 5% растворе едкого натрия. Затем их извлекают из раствора, раскладывают на нижнем стекле компрессориума, закрывают верхним стеклом и исследуют. Трихинеллы заметны в виде красных или желто-красных включений.