МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ 9 страницаПримечания. 1. Приготовление 0,1%-ного раствора гидроксиламина. 0,1 г гидроксиламина солянокислого растворяют в воде в мерной колбе, вместимостью 100 мл, и объем доводят водой до метки. 2. Приготовление 1,3%-ного раствора йода. 1,3 г йода кристаллического растворяют в небольшом количестве ледяной уксусной кислоты и объем доводят кислотой до 100 мл в мерном цилиндре. 3. Приготовление 1%-ного раствора сульфаниловой кислоты. 1 г сульфаниловой кислоты растворяют в 75 мл воды и прибавляют 25 мл ледяной уксусной кислоты. 4. Приготовление 0,3%-ного раствора альфа-нафтиламина, 0,3 г альфа-нафтиламина растворяют в 70 мл воды и прибавляют 30 мл ледяной уксусной кислоты. Раствор готовят за 18 ч до применения. 5. Приготовление 1,6%-ного раствора натрия тиосульфата. 1,6 г натрия тиосульфата растворяют в воде и объем доводят до 100 мл в мерном цилиндре. 6. Приготовление 20%-ного раствора натрия ацетата. 20 г натрия ацетата растворяют в воде и объем доводят водой до 100 мл в мерном цилиндре. 7. Метод не применим в присутствии нитратов.
35. Определение остаточного спирта
Метод основан на окислении спирта калия дихроматом. Метод рекомендован для иммуноглобулинов. Методика определения. В наружные отделения 4-х чашек Конвея вносят по 15 мл окислительной смеси. Во внутренние отделения 2-х чашек Конвея приливают по 0,5 мл препарата, разведенного в 100 раз 0,9%-ным раствором натрия хлорида (в мерной колбе), в две другие - по 0,5 мл 0,9%-ного раствора натрия хлорида (контрольные пробы). Чашки закрывают пришлифованными стеклами, на которые ставят груз массой 100 - 200 г, помещают в термостат при температуре (80 +/- 1) °С и выдерживают в течение 2 ч. После чего окислительную смесь из наружного отделения чашки осторожно переносят пипеткой в колбу с притертой пробкой. Наружное отделение трижды промывают водой по 15 мл. В колбу прибавляют по 1 мл 10%-ного раствора калия йодида и через 1 - 2 мин. выделившийся йод титруют раствором натрия тиосульфата концентрации 0,005 моль/л (индикатор - 0,5%-ный раствор крахмала). Индикатор в количестве 3 - 5 капель прибавляют перед концом титрования, когда раствор имеет соломенно-желтое окрашивание. После прибавления индикатора раствор приобретает синее окрашивание. Титрование проводят до обесцвечивания. Содержание спирта в процентах (Х) вычисляют по формуле:
(а - б) x К x 0,000115 x 100 x 1,1 x 100 X = ----------------------------------------, 1 x 0,5
где: а - количество раствора натрия тиосульфата концентрации 0,005 моль/л, пошедшее на титрование контрольной пробы, мл; б - количество раствора натрия тиосульфата концентрации 0,005 моль/л, пошедшее на титрование испытуемого препарата, мл; 0,000115 - количество спирта, соответствующее 1 мл раствора натрия тиосульфата концентрации 0,005 моль/л, г; К - поправка к титру раствора натрия тиосульфата концентрации 0,005 моль/л; 1,1 - коэффициент пересчета; 0,5 - объем препарата, мл; 100 - разведение препарата; 100 - коэффициент пересчета в проценты. Примечания. 1. Приготовление окислительной смеси. Окислительная смесь состоит из 2-х объемов раствора калия дихромата концентрации 0,005 моль/л и 1 объема концентрированной серной кислоты. 2. Приготовление раствора натрия тиосульфата концентрации 0,005 моль/л. 5 мл раствора натрия тиосульфата концентрации 0,1 моль/л помещают в мерную колбу, вместимостью 100 мл, и доводят объем раствора водой до метки. Раствор применяют свежеприготовленным.
36. Определение остаточного риванола
Метод определения основан на свойстве молекул риванола флюоресцировать в ультрафиолетовой области. Метод рекомендован для специфических гетерологических иммуноглобулинов, при получении которых используют риванол. Методика определения. В одну кварцевую кювету толщиной слоя 10 мм вносят препарат иммуноглобулина, в другую - стандартный раствор риванола. Кюветы помещают в источник УФ-лучей (ртутно-кварцевая лампа ПРК-4). Препарат визуально сравнивают со стандартным раствором, содержащим 0,2 мкг/мл риванола. В иммуноглобулине должна отсутствовать характерная для риванола желто-зеленая флюоресценция. Примечание. Приготовление стандартного раствора риванола. Готовят основной раствор риванола в концентрации 100 мкг/мл (5 мг риванола помещают в мерную колбу, вместимостью 50 мл, растворяют в воде и доводят объем раствора водой до метки). Перед определением основной раствор разводят в 50 раз водой. Отбирают 0,5 мл этого раствора, добавляют 4,5 мл воды (концентрация риванола - 0,2 мкг/мл).
37. Определение натрия хлорида
Метод основан на определении ионов хлора после окисления белков калия перманганатом в кислой среде в присутствии серебра нитрата, избыток которого оттитровывают раствором аммония роданида. Методика определения. К 0,2 мл препарата, содержащего 0,5 - 1 мг/мл натрия хлорида, внесенного в коническую колбу, вместимостью 50 мл, прибавляют 5 мл раствора серебра нитрата концентрации 0,01 моль/л и 1 мл концентрированной азотной кислоты, осторожно нагревают с использованием асбестовой сетки до кипения. К испытуемому раствору прибавляют по каплям насыщенный раствор калия перманганата до бледно-розового окрашивания, не исчезающего в течение 5 мин. Затем прибавляют глюкозу (около 10 мг) до исчезновения окраски. По охлаждении раствора избыток ионов серебра титруют раствором аммония роданида концентрации 0,01 моль/л. Титруют до образования розового окрашивания (индикатор - железо-аммонийные квасцы). Параллельно проводят контрольный опыт. Содержание натрия хлорида в процентах (X) вычисляют по формуле:
(А - В) x К x 0,000585 X = ---------------------- x 100, 0,2
где: А - количество раствора аммония роданида концентрации 0,01 моль/л, израсходованного на титрование в контрольном опыте, мл; В - количество раствора аммония роданида концентрации 0,01 моль/л, израсходованного на титрование испытуемого препарата, мл; К - поправка к титру раствора аммония роданида; 0,2 - количество испытуемого раствора, мл; 0,000585 - количество натрия хлорида, соответствующее 1 мл раствора аммония роданида концентрации 0,01 моль/л, г; 100 - коэффициент пересчета в проценты. Примечания. 1. Приготовление раствора серебра нитрата концентрации 0,01 моль/л. Готовят, используя стандарт-титр (фиксанал) в ампуле. 2. Приготовление раствора аммония роданида концентрации 0,01 моль/л. Готовят, используя стандарт-титр (фиксанал) в ампуле. 3. Приготовление индикатора - насыщенного раствора железо-аммониевых квасцов (~ 40%). Водный, насыщенный на холоду, раствор железо-аммониевых квасцов фильтруют через складчатый фильтр и к мутному раствору прибавляют по каплям концентрированную азотную кислоту до просветления раствора (следует избегать большого избытка азотной кислоты).
38. Определение ионов алюминия
Метод основан на реакции комплексообразования ионов алюминия с динатриевой солью этилендиаминтетрауксусной кислоты (трилон Б) и последующем обратном титровании избытка трилона Б. Метод рекомендован для сорбента (геля алюминия гидроксида) и сорбированных препаратов. Методика определения. В колбу из термостойкого стекла, вместимостью 100 мл, вносят 2 мл препарата, содержащих 0,5 - 1,0 мг алюминия (или 1 мл препарата, содержащего 1 - 2 мг алюминия) и 2 мл 10%-ного раствора серной кислоты. При анализе сухого препарата (например, секстаанатоксина) его разводят в соответствии с инструкцией к препарату, отбирают 1 мл раствора и прибавляют 4 - 5 мл 5%-ного раствора серной кислоты (уменьшают концентрацию кислоты во избежание обугливания наполнителя). Колбу накрывают часовым стеклом и доводят до слабого кипения. Во избежание выпаривания жидкости после закипания в колбу вносят 1 - 2 раза по 5 мл воды и минерализуют до полного растворения осадка сорбента. Прозрачный раствор охлаждают до температуры 10 - 20 °С, прибавляют 10 мл ацетатного буферного раствора (pH 4,5 - 5,0) и 10 мл отмеренного из бюретки раствора трилона Б концентрации 0,01 моль/л. Смесь нагревают до кипения. После охлаждения раствора прибавляют 25 мл спирта и 1 мл раствора дитизона. Избыток трилона Б оттитровывают раствором цинка сульфата концентрации 0,01 моль/л до перехода окраски от зеленой к красной. 1 мл раствора трилона Б концентрации 0,01 моль/л соответствует 0,2698 мг алюминия. Содержание алюминия в миллиграммах на 1 мл (X) вычисляют по формуле:
KZnSO4 x (V - Vo) x 0,2698 X = --------------------------, Vn
где: KZnSO4 - поправочный коэффициент к титру раствора цинка сульфата концентрации 0,01 моль/л; V - количество раствора цинка сульфата концентрации 0,01 моль/л, израсходованного на титрование контрольной пробы, мл; Vo - количество раствора цинка сульфата концентрации 0,01 моль/л, израсходованного на титрование испытуемой пробы, мл; Vn - количество препарата, взятое на анализ, мл. Примечания. 1. При содержании алюминия в пробе выше 1 мг/мл объем прибавляемых реактивов (трилона Б и буферного раствора) увеличивают в 2 раза. 2. Объем прибавляемого спирта должен составлять не менее половины конечного объема реакционной смеси. 3. Приготовление растворов: 3.1. Аммиачный буферный раствор (pH 9,5 - 10,0). 20 г аммония хлорида растворяют в 200 - 300 мл воды в мерной колбе, вместимостью 1 л, прибавляют 100 мл концентрированного раствора аммиака и доводят объем раствора водой до метки. Срок годности - 3 мес. 3.2. Ацетатный буферный раствор (pH 4,5 - 5,0). 60 мл ледяной уксусной кислоты и 77 г аммония ацетата растворяют в 800 мл воды и доводят объем раствора водой до 1 л в мерном цилиндре. Срок годности - 3 мес. 3.3. Раствор дитизона. 25 мг дитизона (ч) растворяют в 100 мл ацетона. Раствор хранят при температуре 4 - 8 °С в течение 1 мес. 3.4. Индикаторная смесь. 0,25 г индикатора эриохрома черного Т растирают в фарфоровой ступке с 25 г натрия хлорида и перемешивают. На 100 мл титруемого раствора берут около 0,2 г индикаторной смеси. 3.5. Раствор трилона Б концентрации 0,01 моль/л готовят из фиксанала. При отсутствии фиксанала 3,7225 г трилона Б растворяют в 500 мл воды и доводят объем раствора водой до метки в мерной колбе, вместимостью 1 л. Титр раствора трилона Б устанавливают по раствору магния сульфата концентрации 0,01 моль/л. К 20 мл отмеренного из бюретки раствора магния сульфата концентрации 0,01 моль/л прибавляют 5 мл аммиачного буферного раствора (pH 9,5 - 10,0), около 0,2 г индикаторной смеси, 80 мл воды, перемешивают и титруют раствором трилона Б. Рассчитывают поправочный коэффициент. 3.6. Раствор магния сульфата концентрации 0,01 моль/л. Используя фиксанал, готовят раствор магния сульфата концентрации 0,05 моль/л. 200 мл приготовленного раствора отмеривают с помощью мерной колбы, вместимостью 200 мл, помещают в мерную колбу, вместимостью 1 л, и доводят объем раствора водой до метки. 3.7. Раствор цинка сульфата концентрации 0,01 моль/л. Готовят из фиксанала. При отсутствии фиксанала готовят одним из указанных способов: 3.7.1. 2,8755 г цинка сульфата растворяют в воде в мерной колбе, вместимостью 1 л, и доводят объем раствора водой до метки. 3.7.2. 0,6538 г металлического цинка растворяют в 40 мл 50%-ного раствора серной кислоты в мерной колбе, вместимостью 1 л, и доводят объем раствора водой до метки. Титр растворов устанавливают по титрованному раствору трилона Б. К 20 мл отмеренного из бюретки раствора трилона Б концентрации 0,01 моль/л прибавляют 10 мл ацетатного буферного раствора (pH 4,5 - 5,0), 25 мл спирта и 1 мл раствора дитизона, перемешивают и титруют раствором цинка сульфата концентрации 0,01 моль/л. Рассчитывают поправочный коэффициент.
39. Определение сульфат-ионов
Метод основан на реакции между ионами сульфатов и ионами бария с образованием осадка или появлением опалесценции (в зависимости от концентрации сульфат-ионов). Метод рекомендован для сывороточных препаратов, вакцин (сорбированных и несорбированных) и сорбента вакцинных препаратов. 39.1. Анализ препаратов с содержанием сульфат-ионов 50 - 450 мкг/мл Методика определения. К 1 мл препарата (при анализе сорбированных препаратов используют центрифугат после центрифугирования 3 мл препарата при 2000 об./мин., 20 мин.) прибавляют 3,5 мл воды, 0,5 мл 5%-ного раствора бария хлорида и перемешивают. Через 15 мин. измеряют оптическую плотность суспензии на фотоэлектроколориметре при длине волны 540 нм в кювете с толщиной слоя 5 мм по сравнению с контрольным раствором, содержащим 1 мл препарата и 4 мл воды, если нет других указаний в фармакопейной статье на препарат. Расчет содержания сульфат-ионов проводят по калибровочному графику. Калибровочный график. Готовят основной раствор калия сульфата, содержащий 1 мг/мл сульфат-ионов: 1,8140 г калия сульфата, высушенного до постоянной массы при температуре 100 - 105 °С, растворяют в воде в мерной колбе, вместимостью 1 л, и доводят объем раствора водой до метки. Перед определением основной раствор разводят водой в 10 раз. К 0,5 - 4,5 мл полученного раствора (50 - 450 мкг сульфат-ионов) с интервалом 0,5 мл прибавляют воду до объема 4,5 мл, 0,5 мл 5%-ного раствора бария хлорида и проводят анализ, как указано выше. Строят график зависимости оптической плотности от концентрации сульфат-ионов. Калибровочный график строят при каждом анализе. 39.2. Анализ препаратов с содержанием сульфат-ионов менее 50 мкг/мл Методика определения. К 10 мл центрифугата сорбированных препаратов прибавляют 1 мл 5%-ного раствора бария хлорида. Одновременно прибавляют 1 мл 5%-ного раствора бария хлорида к 10 мл эталонного раствора, содержащего 20 мкг/мл сульфат-ионов (основной раствор калия сульфата, содержащий 1 мг/мл сульфат-ионов, разводят водой в 50 раз). Измеряют оптическую плотность испытуемой пробы и эталонного раствора на фотоэлектроколориметре при длине волны 540 нм в кюветах с толщиной слоя 10 мм против контрольных растворов. Контрольным раствором для испытуемой пробы служит раствор, состоящий из 10 мл центрифугата и 1 мл воды, для эталонного раствора используется вода. Расчет содержания сульфат-ионов проводят по пропорции на основании сравнения оптической плотности препарата и эталонного раствора.
40. Определение ионов аммония
Метод основан на свойстве реактива Несслера давать цветную реакцию с ионами аммония. Метод рекомендован для сорбированных препаратов и сорбента алюминия гидроокиси, приготовленного с применением аммиака. Методика определения. К 1 мл центрифугата после центрифугирования при 2000 об./мин. 20 мин. (не допускается фильтрование для отделения осадка сорбента) прибавляют 8,8 мл воды, 0,2 мл реактива Несслера и перемешивают. Определяют оптическую плотность раствора на фотоэлектроколориметре при длине волны 400 нм в кюветах с толщиной слоя 10 мм по сравнению с контрольным раствором, содержащим 1 мл препарата и 9 мл воды, если нет других указаний в фармакопейной статье на препарат. Расчет содержания ионов аммония проводят по калибровочному графику. Калибровочный график. Готовят основной раствор аммония хлорида, содержащий 200 мкг/мл ионов аммония: 0,5931 г аммония хлорида, высушенного до постоянной массы в эксикаторе в присутствии кальция хлорида безводного, растворяют в воде в мерной колбе, вместимостью 1 л, и доводят объем раствора водой до метки. Перед определением основной раствор разводят водой в 100 раз (2 мкг/мл ионов аммония). К 2,5 - 7,5 мл полученного раствора с интервалом 0,5 мл прибавляют воду до объема 9,8 мл, прибавляют 0,2 мл раствора Несслера и проводят анализ, как указано выше. Калибровочный график строят при каждом анализе. Примечание. Приготовление реактива Несслера (см. раздел 14.1.1).
41. Определение гликокола
Метод основан на определении небелкового азота в надосадочной жидкости после осаждения белка трихлоруксусной кислотой (ТХУ). Определение азота проводят с реактивом Несслера, который дает + цветную реакцию с ионами аммония (NH4), образующимися после минерализации гликокола. Метод предназначен для контроля иммуноглобулинов. Гликокол добавляют в препарат для стабилизации белка. Методика определения. В мерной колбе, вместимостью 50 мл, разводят 1 мл препарата иммуноглобулина 0,9%-ным раствором натрия хлорида. В центрифужную пробирку вносят 2 мл препарата и добавляют 2 мл раствора ТХУ до конечной концентрации 10%. Пробы оставляют на ночь в холодильнике. Осадок отделяют центрифугированием при 4000 об./мин. при 5 °С в течение 30 мин. Надосадочную жидкость сливают в чистую пробирку. К 1 мл надосадочной жидкости добавляют 0,1 мл концентрированной серной кислоты и закрывают стеклянными колпачками. Пробы минерализуют на песочной бане. Для ускорения минерализации используют пергидроль, добавляя его по 1 - 2 капле. Сжигание продолжают до обесцвечивания содержимого пробирки. (Пробу после обесцвечивания выдержать на песочной бане дополнительно 2 - 2,5 часа без добавления пергидроля. Если она останется бесцветной, минерализацию заканчивают.) Объем минерализата доводят дистиллированной водой до 10 мл и раствор тщательно перемешивают. Для колориметрирования отбирают 2 мл этого раствора, доводят дистиллированной водой до 9,5 мл, перемешивают, добавляют 0,5 мл реактива Несслера и снова тщательно перемешивают. Определяют оптическую плотность раствора на фотоэлектроколориметре при длине волны 400 нм в кюветах с толщиной слоя 10 мм против контрольного раствора, приготовленного аналогично испытуемой пробе. Содержание гликокола в препарате в процентах вычисляют по формуле:
а x 50 x 2 x 10 x 5,28 x 100 а x 5,28 X = ---------------------------- = --------, 2 x 1 x 2 x 1000000 40
где: а - количество азота, найденное по калибровочному графику, мкг; 5,28 - коэффициент пересчета азота в гликокол; 50 - разведение препарата; 2 - количество препарата, взятое на осаждение белка, мл; 2 - разведение надосадочной жидкости; 1 - количество надосадочной жидкости, взятое для минерализации, мл; 2 - количество минерализата, взятое для колориметрирования, мл; 100 - коэффициент перевода в проценты; 10 - количество минерализата, мл; 1000000 - коэффициент перевода в граммы. Примечания. 1. Построение калибровочного графика (см. раздел 14.1.1). 2. Приготовление реактива Несслера (см. раздел 14.1.1). 3. Приготовление стандартного раствора сернокислого аммония (см. раздел 14.1.1).
42. Определение показателя дисперсности сорбента и сорбированных препаратов
Метод основан на зависимости оптической плотности суспензии от величины частиц и заключается в определении оптической плотности при разных длинах волн с последующим вычислением показателя дисперсности. Установлена корреляция между средней величиной частиц и величиной, обратной показателю дисперсности. Метод рекомендован для сорбированных препаратов и сорбента алюминия гидроксида. Методика определения. Непосредственно после перемешивания суспензии измеряют оптическую плотность препарата на фотоэлектроколориметре при определенных длинах волн: на приборе марки ФЭК - 400 нм (лямбда1) и 630 нм (лямбда2); на приборе марки КФК - 400 нм (лямбда1) и 540 нм (лямбда2) (обозначены на панели прибора черным цветом). Измерение проводят при использовании кювет с любой толщиной слоя таким образом, чтобы показания на приборе ФЭК находились в пределах 0,2 - 0,6, а на приборе КФК - в пределах 0,3 - 0,5. На приборе КФК кювету следует ставить в положение, максимально удаленное от фотоприемника (крайнее левое положение кюветодержателя). При смене длины волны возможно использование кювет с разной толщиной слоя. В этом случае показание прибора, полученное при применении меньшей кюветы, должно быть увеличено во столько раз, во сколько раз различается толщина слоя кювет. Показатель дисперсности (У) определяют по формуле:
D1 У = lg --: K, D2
где: D1 и D2 - оптическая плотность при соответствующих длинах волн лямбда1 и лямбда2; K - константа прибора, рассчитанная для каждого прибора конкретно по формуле:
лямбда2 K = lg -------, лямбда1
где лямбда1 и лямбда2 - длины волн в нанометрах (соответствующие максимумам пропускания используемых светофильтров).
43. Определение потери в массе при высушивании
Бюксы высотой 35 мм и диаметром 25 мм доводят до постоянной массы при температуре 100 - 105 °С. 0,15 - 0,20 г препарата помещают в бюксы и сушат в вакуум-сушильном шкафу в течение 3 ч при температуре (60 +/- 1) °С и остаточном давлении, не превышающем 0,667 кПа (5 мм рт. ст.). Бюксы с закрытыми крышками выдерживают в эксикаторе в присутствии кальция хлорида безводного в течение 30 - 40 мин. до полного охлаждения и взвешивают. Расчет массовой доли влаги в процентах проводят по разности масс до и после высушивания. При определении массовой доли влаги в питательных средах высушивание препарата проводят в сушильном шкафу при температуре (100 +/- 2) °С в течение 2 ч. Остальные условия метода (величина навески и размер бюксов) описаны выше. Примечание. Анализ проводится при температуре (20 +/- 5) °С и относительной влажности воздуха 40 - 80%.
44. Определение точности розлива в лиофилизированных препаратах
44.1. Весовой метод Принцип метода заключается в определении массы вещества в каждой емкости и расчете коэффициента вариации. Методика определения. Флаконы или ампулы (10 штук) без этикеток обрабатывают смесью спирта с эфиром (1:1), помещают в коробку с пронумерованными ячейками и ставят в эксикатор на 3 ч, затем верхнюю часть каждой ампулы надпиливают и удаляют, во флаконах удаляют пробки. Вскрытые ампулы или флаконы с веществом взвешивают на аналитических весах, после чего содержимое емкостей удаляют, ампулы или флаконы моют водой и помещают в соответствующие ячейки коробки. Емкости выдерживают при температуре 100 - 105 °С в сушильном шкафу до постоянной массы. По разности масс ампулы или флакона с содержимым и без него находят массу вещества. Для определения точности розлива рассчитывают коэффициент вариации (V) в процентах по формуле:
___________ / _ 2 /SUM (X - X) S x 100 / ------------, V = -------; S = \/ n - 1 _ X
где: S - стандартное отклонение; _ X - среднее арифметическое значение массы вещества в емкости; X - масса вещества в каждой емкости; n - число емкостей. 44.2. Колориметрический метод Принцип метода заключается в определении содержания белка в каждой емкости и расчете коэффициента вариации. Метод может быть применен при содержании в ампуле 2 - 4 мг сухого вещества, содержащего не менее 25% белка. Методика определения. Ампулы вскрывают (10 штук), содержимое каждой ампулы растворяют в 5 мл 0,9%-ного раствора натрия хлорида (pH 7,0 - 7,2). К 0,2 мл (дозировка 2 мг) или 0,1 мл (дозировка 4 мг) полученного раствора прибавляют до объема 1 мл 0,9%-ный раствор натрия хлорида и далее проводят анализ в соответствии с разделом "Определение белка по методу Лоури" (раздел 17). Содержание белка в каждой ампуле определяют по калибровочному графику. Коэффициент вариации вычисляют по вышеуказанной формуле: _ где X - среднее арифметическое значение содержания белка в ампуле; X - количество белка в каждой ампуле.
45. Определение прозрачности и цветности
Метод основан на измерении поглощения раствора в видимой области спектра при разных длинах волн: при определении цветности длина волны должна быть 400 нм (максимум поглощения гемоглобина), при определении прозрачности длина волны 540 нм (максимум поглощения для мутных растворов). Метод рекомендован для препаратов иммуноглобулинов. Методика определения. В кювету с толщиной слоя 3 мм наливают раствор и измеряют оптическую плотность на фотоэлектроколориметре при указанных длинах волн по сравнению с водой.
46. Определение pH
Определение pH проводят потенциометрическим методом с применением стеклянного электрода в соответствии с ГФ XI, вып. 1, с. 113. При определении pH в иммуноглобулинах и сыворотках препарат разводят 0,9%-ным раствором натрия хлорида (pH 7,0 - 7,2) до содержания белка 1%. Сорбированный препарат не разводят и определение pH проводят в суспензии. Определение pH в лиофилизированном препарате производят после добавления к содержимому ампулы (флакона) рекомендованного растворителя. Для определения pH в сухих питательных средах готовят 2%-ный раствор препарата. Среды с агаром настаивают в течение 1 ч с последующей фильтрацией.
47. Определение равномерности розлива сорбированных препаратов
Метод основан на измерении оптической плотности мутных растворов в каждой емкости и расчете коэффициента вариаций. Методика определения. Используют по 10 ампул в начале, середине и конце розлива. В кювету с толщиной слоя 1 мм наливают содержимое каждой ампулы и измеряют оптическую плотность на фотоэлектроколориметре при длине волны 540 нм (максимум поглощения мутных растворов) по сравнению с водой. Рассчитывают коэффициенты вариаций для каждых 10 ампул. Коэффициент вариаций (V) вычисляют по формуле:
___________ / _ 2 /SUM (X - X) S x 100 / ------------, V = -------; S = \/ n - 1 _ X
где: S - стандартное отклонение; _ X - среднее арифметическое значение оптической плотности препарата (расчет производят из 10-ти емкостей); X - оптическая плотность препарата в каждой ампуле; n - число емкостей. Коэффициенты вариаций в начале, середине и конце розлива не должны превышать 5%. Средние арифметические значения оптической плотности препарата в начале, середине и конце розлива не должны отличаться между собой более чем на 5%. При этом за 100% принимают максимальное среднее арифметическое значение оптической плотности.
Приложение
Буферные растворы
В данном разделе представлены материалы по приготовлению различных буферных растворов с широким диапазоном pH (фосфатный, цитратный, фосфатно-цитратный, боратный, барбиталовый, ацетатный, карбонат-бикарбонатный), которые могут применяться при контроле МИБП, а также использоваться при разработке новых дополнительных методов контроля препаратов. Буферными растворами называются такие растворы, которые сохраняют pH при разведении, а также при добавлении к ним небольших количеств кислот или оснований. Водородный показатель pH - это отрицательный десятичный логарифм активности ионов водорода + (pH = -lgаH). Буферные растворы обладают определенной буферной емкостью, которая выражается в граммах-эквивалентах количества сильной кислоты или сильного основания, прибавление которых к 1 л буферного раствора изменяет pH этого раствора на единицу. Чем выше концентрация солей буферного раствора, тем выше и буферная емкость. Кроме того, буферная емкость зависит и от молярного соотношения участвующих в буфере растворов. Емкость буферного раствора достигает максимальной величины при молярном отношении, близком к единице.
Общие указания
А. Приготовление буферных растворов. 1. Величины pH, приведенные в таблицах, относятся к водным растворам и охватывают область pH от 3,7 до 9,5. 2. Для приготовления буферных растворов применяют дистиллированную воду, не содержащую угольной кислоты. Для удаления угольной кислоты воду кипятят в течение 30 - 45 мин., после чего сосуд закрывают резиновой пробкой, снабженной трубкой, заполненной натронной известью (2 весовые части СаО + 1 весовая часть NaOH). pH воды должен быть в пределах 5,8 - 7,0. 3. Для приготовления буферных растворов рекомендуется использовать реактивы квалификации "химически чистый" или "чистый для анализа". 4. Навески реактивов взвешивают с точностью 0,001 г, растворяют в дистиллированной воде и объем раствора в мерной колбе, вместимостью 1 л, доводят до метки. Концентрацию исходных растворов-компонентов, входящих в состав буферного раствора, выражают в моль/л. 5. Для приготовления исходных растворов применяют мерные колбы. 6. Исходные растворы после тщательного перемешивания переносят в сухие колбы с хорошо притертыми пробками. 7. Буферные растворы следует хранить в емкостях из боросиликатного стекла (например, "пирекс") или полиэтилена ("чистого"). 8. Исходные растворы для приготовления буферных растворов отмеривают при температуре (20 +/- 1) °С при помощи бюреток или мерных цилиндров. 9. Буферные растворы хранят при температуре (6 +/- 4) °С в течение 10 - 12 дней. Исходные растворы сохраняют не более 30 дней.
|
