Определение общих колиформных бактерий (БГКП)

Показатель БГКП идентичен показателю «общие колиформные бактерии» (ОКБ).

ОКБ — грамотрицательные, неспоровые, оксидаза-отрицательные палочки, способные развиваться в присутствии солей желчных кислот или других поверхностно-активных агентов с аналогичной способностью к подавлению роста. Ферментируют лактозу при

35-37 ^оС за 24-48 час с образованием кислоты, газа и альдегида, т.е. на среде Эндо лактозоположительные колонии дают отпечаток в течение 24-48 час.

В зависимости от загрязнённости почвы БГКП можно определять титрационным методом для почв с невысокой степенью фекального загрязнения), либо методом мембранных фильтров (для слабозагрязненных почв), либо методом прямого посева на среду Эндо (для почв с высокой степенью загрязнения).

Чаще используют титрационный метод.

Титрационный метод

Из разведения 1:10 почвенной суспензии 10 см³ засевают на 90 см³ среды Кесслера, остальные разведения сеют по 1 см³ в 9 см³ среды. Посевы выращивают при температуре 37 ^оС 48 часов. При отсутствии роста (помутнение, газообразование) дают отрицательный ответ. При наличии помутнения и газообразования или при наличии только помутнения делают высев на среду Эндо. Чашки с посевами инкубируют при 37 ^оС 18-24 час. Отбирают розовые, красные или малиновые с металлическим блеском колонии, изучают морфологические, тинкториальные свойства, ставят оксидазный тест. По 2-3 колонии каждого типа (грамотрицательные, оксидазаотрицательные) засевают параллельно в 2 в пробирки с полужидкой или жидкой с поплавком средой с лактозой, инкубируют в термостате 37 ^оС 18-24 час. При ферментации лактозы с образованием кислоты и газа дают положительный ответ на БГКП.

Результаты выражают в величинах коли-индекса.

Норматив. Индекс БГКП 1-10 клеток/г почвы

Метод мембраной фильтрации. Используют в качестве ускоренного метода. Применяют фильтры с диаметром пор 0,45 мкм и размером диска 35 или 47 мм. Фильтруют 5,0-10,0 см³ почвенной суспензии первого разведения (1:10) через мембранные фильтры, сеют на дифференциальную питательную среду с лактозой, отбирают подозрительные колонии, идентифицируют бактерии по культуральным и биохимическим свойствам.

Метод прямых поверхностных посевов. Применяют при анализе загрязненных и сильно загрязненных почв.

На среду Эндо засевают по 0,1 или 0,2 см³ разведений почвы: от 10^-1 до 10^-3 для сравнительно чистых почв, из разведений до 10^-5 и 10^-6 для сильно загрязненных почв. Среды обычно используют подсушенные. Растирают посев шпателем. Инкубация посевов 37 ^оС 24 часа. Дальнейшая идентификация аналогична рассмотренной выше (в титрационном методе, начиная со среды Эндо). Посчитывают количество колиформных бактерий в 1 г почвы, для чего среднее число колиформных колоний, выросших на чашках, умножается на степень десятикратного разведения. Результаты выражают в количестве КОЕ/г.

Норматив. До 10 КОЕ/г