Определение энтерококков.
Энтерококки — грамположительные, не образующие каталазу кокки, слегка вытянутые с заостренными концами. В мазках располагаются парами или короткими цепочками, реже одиночно. При росте на жидких средах (лактозо-пептонная среда, ЛПС; щелочная элективная среда с полимиксином, ЩЭС) вызывают диффузное помутнение и образование осадка. Для выявления энтерококков используют титрационный метод и метод мембранной фильтрации. Титрационный метод применяют для анализа почв с предполагаемой невысокой степенью загрязнения. Из разведений почвенной суспензии стерильной пипеткой берут 10 см3 и засевают во флаконы с 50 см3 жидкой среды (ЛПС или ЩЭС). Посевы инкубируют 24 час при 37 оС. При наличии признаков роста производят высев на плотные среды МИС (молочно-ингибиторная среда) или ЖСТ (желточная среда Турчинского). Инкубируют 24-48 часов. В случае отсутствия роста дают отрицательный ответ. При наличии аспидно-черных, выпуклых с металлическим блеском или сероватых, мелких колоний проводят микроскопию окрашенных по Граму мазков и каталазный тест. После выявления энтерококков устанавливают титр, при котором принимается то предельное разведение почвы, в котором обнаруживают энтерококки. Для перевода титра в индекс, необходимо 1000 разделить на число, выражающее титр. Метод мембранной фильтрации. Объем испытуемой пробы должен быть таким, чтобы не менее чем на 2-х фильтрах выросли изолированные колонии в количестве от 5 до 50. Фильтруют 2-3 десятикратных объема испытуемой пробы. Фильтры помещают на азидную среду или ЖСТ и инкубируют 24-48 час при 37 оС. Учет результатов на азидной среде. На азидной среде выбирают фильтры, на которых выросло от 5 до 50 колоний. Посчитывают колонии, характерные для энтерококков: выпуклые, с ровными краями, розовые, светло-розовые, равномерно окрашенные или с темно-красным не четко оформленным центром. При необходимости 2-3 колонии каждого типа микроскопируют после окраски по методу Грама. Положительный ответ дают при обнаружении в мазках грамположительных полиморфных диплококков. Учет результатов на среде ЖСТ. Выбирают фильтры, на которых выросло не более 20-30 колоний. Посчитывают характерные для энтерококков колонии. При обнаружении колоний другого вида – выпуклых белых мелких или ярко окрашенных, проводят микроскопию мазков, окрашенных по Граму и каталазный тест. Положительный ответ выдают при наличии грамположительных полиморфных каталазоотрицательных диплококков. Результаты выражают в индексах, для чего п одсчитанное число колоний энтерококков суммируют и делят на объем, профильтрованный через фильтры, на которых велся подсчет. Для расчета индекса количество колоний энтерококков суммируют, умножают на 1000 и делят на объем, профильтрованный через фильтры, на которых велся подсчет. Норматив.Индекс энтерококков1 - 10 КОЕ /г Оценка степени эпидемической опасности почвы
4.1. Основные методы определения санитарно-показательных микробов в пищевых продуктах:
|
