ПОЛУЧЕНИЕ КАТИОННЫХ ЛИПОСОМ ДЛЯ НАПРАВЛЕННОГО ТРАНСПОРТА ЦИСПЛАТИНА

Ивашков О.В.

Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова,

Москва, Россия.

Студент III курса.

oleg_ivashkoff@mail.ru

Научный руководитель: Нуколова Н.В.

Селективное проникновение биологически активного вещества (БАВ) в орган-мишень является одним из определяющих критериев его эффективности при лечении патологий. Однако большинство экзогенных химических соединений неспособно проникнуть внутрь тканей из-за существования так называемого гистогематического барьера. В связи с этим необходима разработка методов направленной доставки лекарств к клеткам-мишеням. Для уменьшения токсичности БАВ и увеличения адресности доставки за последние годы были разработаны несколько типов наноконтейнеров. Одним из наиболее популярных подходов в области контролируемого направленного транспорта биологически активных веществ к местам их специфического действия является использование липосом. Липосомы представляют собой искусственные модели природных биологических мембран.

Целью работы стало получение катионных липосом, модифицированных моноклональными антителами (mAb), с загруженным противоопухолевым лекарством цисплатином, а также исследование их физико-химических характеристик.

Для синтеза липосом использовали фосфолипиды и холестерин, которые при эмульгировании в водной среде образуют жировые пузырьки, ограниченные внешней бислойной липидной мембраной и содержащие внутри некоторое количество механически захваченного водного раствора. В работе в качестве липида использовали POPC (1-пальмитоил-2-олеоил-sn-глицерол-3-фосфохолин), а также дополнительные реагенты, такие как холестерин, дистеароилфосфатидилэтаноламин (DSPE), который конъюгирован с цепочкой полиэтиленгликоля (PEG) с молекулярной массой 2000 Да, катионный липид диметилдиоктодециламмоний бромид (DDAB), а также DSPE с концевой малеимидной группой для конъюгирования с mAb для создания векторных наноконтейнеров. Синтез состоял из двух этапов: 1) образование липидной плёнки с последующим тщательным высушиванием и 2) редиспергирование в дистиллированной воде с обработкой ультразвуком для формирования однослойных липосом. Векторные группы mAb смешивали с реагентом Траута (10 экв., 45 мин., комн. темп.), добавляли к липосомам и оставляли на ночь при 4^оС. Цисплатин загружали методом захвата и пассивной диффузии. Далее проводили очистку полученных систем методом гель-фильтрационной хроматографии с использованием Sepharose CL-4B при скорости потока 0,5 мл/мин.

В результате синтеза получали стабильные векторные липосомы с загруженным лекарственным препаратом. Физико-химические характеристики полученных систем были исследованы методом динамического светорассеяния. Дзета-потенциал наночастиц составил -10 мВ, гидродинамический диаметр около 90 нм и коэффициент полидисперсности – 0,13. Иммуноферментный анализ показал, что антитела сохраняли свою активность после конъюгации. Токсичность препаратов оценивали методом МТТ и показали, что IC50 зависит от количества введенного DDAB в состав липосом, а также от количества загруженного цисплатина. Согласно данным рентгенофлуоресцентного анализа эффективность загрузки наноконтейнеров составила 10%.

Таким образом, в ходе работы были получены катионные липосомальные наноконтейнеры для направленного транспорта БАВ.