Тонкослойная хроматография. Тонкослойная хроматография относится к методу распределительнойхроматографии, разделение веществ в которой обусловлено их различными коэффициентамиТонкослойная хроматография относится к методу распределительной хроматографии, разделение веществ в которой обусловлено их различными коэффициентами распределения между двумя несмешивающимися жидкими фазами. Для получения хроматограмм используют специальные алюминиевые пластинки, покрытые тонким слоем сорбента (силикагель, Аl2O3). Первая фаза - органический растворитель; вторая - адсорбированная на поверхности сорбента вода. С помощью капилляра разбавленный раствор вещества наносят в виде пятен на стартовую линию, после чего пластинку подсушивают и помещают в вертикальном положении в камеру, на дно которой налито немного элюента. Уровень элюента должен быть ниже стартовой линии. Благодаря действию капиллярных сил растворитель поднимается по пластине, увлекая за собой разделяемые вещества. Необходимо, чтобы пластина находилась в атмосфере, насыщенной парами растворителя, поэтому камеру закрывают крышкой. По окончании движения растворителя хроматограм-му вынимают из камеры, отмечают фронт растворителя, высушивают и выявляют пятна разделенных веществ различными методами. Для получения четких хроматограмм необходимо, чтобы адсорбция разделяемых компонентов на носителе была слабой. Подвижный растворитель подбирают в зависимости от природы разделяемых веществ и носителя. Как правило, для разделения более полярных соединений используют более полярные растворители. Часто применяют смеси растворителей, например гексан-дихлорметан, бензол-этилацетат и т. п.
Основной количественной характеристикой вещества в тонкослойной хроматографии является величина Rf (R.-фактор) - отношение расстояния Ri;, пройденного веществом, к расстоянию Rs, пройденному фронтом растворителя (рис. 26). Для расчета Rf расстояния измеряют от стартовой линии до центра пятна:
При постоянстве условий эксперимента Rf определяется природой вещества, параметрами сорбента и свойствами растворителей. Для идентификации, качественного и количественного определения веществ в исследуемой пробе хроматограмму после разделения, если компоненты не окрашены, обрабатывают специально подобранным реагентом, образующим с разделяемыми веществами окрашенные соединения, - при этом компоненты проявляются в виде пятен. В ТСХ часто применяют пластинки, покрытые слоем сорбента, содержащего люминофор. Так как многие органические соединения поглощают в ультрафиолетовой области, при рассматривании такой пластинки в УФ-свете эти вещества будут проявляться в виде темных пятен на светящемся фоне. Количество вещества в каждом пятне определяют очень приблизительно, сравнением интенсивности окраски пятна (или гашения люминесценции) по сравнению с эталоном.
|
