Тонкослойная хроматография. Тонкослойная хроматография относится к методу распределительнойхроматографии, разделение веществ в которой обусловлено их различ­ными коэффициентами

Тонкослойная хроматография относится к методу распределительной хроматографии, разделение веществ в которой обусловлено их различ­ными коэффициентами распределения между двумя несмешивающимися жидкими фазами.

Для получения хроматограмм используют специальные алюминиевые пластинки, покрытые тонким слоем сорбента (силикагель, Аl₂O₃). Пер­вая фаза - органический растворитель; вторая - адсорбированная на поверхности сорбента вода. С помощью капилляра разбавленный рас­твор вещества наносят в виде пятен на стартовую линию, после чего пластинку подсушивают и помещают в вертикальном положении в каме­ру, на дно которой налито немного элюента. Уровень элюента должен быть ниже стартовой линии. Благо­даря действию капиллярных сил рас­творитель поднимается по пластине, увлекая за собой разделяемые веще­ства. Необходимо, чтобы пластина находилась в атмосфере, насыщенной парами растворителя, поэтому каме­ру закрывают крышкой. По окончании движения растворителя хроматограм-му вынимают из камеры, отмечают фронт растворителя, высушивают и выявляют пятна разделенных веществ различными методами. Для получения четких хроматограмм необходимо, чтобы адсорбция раз­деляемых компонентов на носителе была слабой.

Подвижный растворитель подбирают в зависимости от природы разделя­емых веществ и носителя. Как правило, для разделения более полярных со­единений используют более полярные растворители. Часто применяют смеси растворителей, например гексан-дихлорметан, бензол-этилацетат и т. п.

Основной количественной характеристикой вещества в тонкослойной хроматографии является величина R_f (R.-фактор) - отношение рассто­яния R_i;, пройденного веществом, к расстоянию R_s, пройденному фронтом растворителя (рис. 26).

Для расчета R_f расстояния измеряют от стартовой линии до цент­ра пятна:

При постоянстве условий эксперимента R_f определяется природой ве­щества, параметрами сорбента и свойствами растворителей.

Для идентификации, качественного и количественного определения ве­ществ в исследуемой пробе хроматограмму после разделения, если компо­ненты не окрашены, обрабатывают специально подобранным реагентом, образующим с разделяемыми веществами окрашенные соединения, - при этом компоненты проявляются в виде пятен. В ТСХ часто применяют пла­стинки, покрытые слоем сорбента, содержащего люминофор. Так как многие органические соединения поглощают в ультрафиолетовой области, при рас­сматривании такой пластинки в УФ-свете эти вещества будут проявляться в виде темных пятен на светящемся фоне. Количество вещества в каждом пятне определяют очень приблизительно, сравнением интенсивности окраски пятна (или гашения люминесценции) по сравнению с эталоном.