А М Ф О Т Е Р Н О С Т Ь

Белки содержат кислые (СООН) и основные (NH2) группы. Благодаря этому они

обладают буферными свойствами. Однако при физиологических рН их буферная

емкость ограничена. Только гемоглобин, который содержит до 8% гистидина обла-

дает существенной буферной емкостью, т.к. рI гистидина 7,6. Амфотерность позво-

ляет разделить белки по заряду. Аналогично аминокислотам, они заряжаются поло-

жительно при уменьшении рН, и отрицательно при его увеличении. При нейтраль-

ных рН заряд белка зависит от соотношения кислых и основных аминокислот. Если

преобладают кислые – то и заряд отрицательный, если основные – положительный,

при рI заряд равен 0.

Р А С Т В О Р И М О С Т Ь

Так как белки несут много заряженных групп, то они водорастворимы. Раство-

римость связана:

• со взаимоотталкиванием молекул

• с гидратацией белков – чем больше полярных аминокислот, тем больше

гидратная оболочка (на 100 г белка может быть 30-50 г воды)

Таким образом, растворимость белков зависит от заряда и наличия гидратной

оболочки. Исчезновение одного или обоих этих факторов ведет к осаждению бел-

ков.

Методы осаждения белков

1. Высаливание — добавление солевых растворов (Na2SO4, (NH4)2SO4).

Анионы и катионы соли взаимодействуют с зарядами белка и, в результате, за-

ряд исчезает, и соответственно, исчезает взаимоотталкивание молекул. Одновре-

менно пропадает гидратная оболочка. Это ведет к «слипанию» молекул и осажде-

нию. Так как белки плазмы крови отличаются по размерам, заряду, строению, то

можно подобрать такие количества соли, которые вызовут осаждение менее устой-

чивых белков, пока другие еще будут растворены.

Например, таким способом можно определять соотношение аль-

бумины/глобулины. Альбумины, как более полярные молекулы, ос-

таются в растворенном u1089 состоянии при 50% насыщении раствора

нейтральными солями, в то время как глобулины в этих условиях

уже осаждаются. В норме соотношение равно 1,5-2,3.

Однако, не следует забывать, что при низких концентрациях соли способны

взаимодействовать с ионными группами белков, отвечающих за внутримолекуляр-

ные взаимодействия, приводить к их раскрытию и повышать растворимость.

2. Осаждение водоотнимающими средствами (ацетон, этанол)

При этом происходит лишение белка гидратной оболочки, но не заряда, рас-

творимость несколько снижается, но денатурации не наступает

Например, антисептическое действие этанола.

3. Изменение рН ведет к исчезновению заряда в изоэлектрической точке, исчез-

новению гидратной оболочки и снижению растворимости белков.