Паровик; 2 - каплеотбойник; 3 - воронка с зажимом; 4 - отгонная колба;

5 – холодильник; 6 – приемник

 

6. В приемник 6 наливают из бюретки точно отмеренные 15 мл 0,1 н серной кислоты и добавляют 1-2 капли индикатора Таширо. Приемник устанавливают под холодильником так, чтобы его конец был погружен в кислоту.

7. После охлаждения в колбу Кьельдаля осторожно наливают 5 мл дистиллированной воды, тщательно перемешивают и переносят содержимое в отгонную колбу 4. Затем колбу Кьельдаля два раза споласкивают по 3 мл дистиллированной водой, при этом сливая промывные воды в отгон­ную колбу.

8. Открыв зажим воронки 3, осторожно наливают по стенке ворон­ки в отгонную колбу 10 мл 30 %-го раствора гидроксида натрия и быст­ро закрывают зажим воронки во избежание потерь аммиака. После этого воронку ополаскивают 2-3 мл дистиллированной воды, сливая промывные воды в колбу.

9. Включают водяной холодильник 5.

10. Зажигают газовую горелку под паровиком - 1 и отгоняют аммиак с водяным паром в течение 15-20 мин, начиная с момента кипения воды в паровике. Отгонка заканчивается, когда объем жидкости в приемнике увели­чится примерно в два раза.

11. Чтобы проверить полноту отгонки аммиака, отсоединяют прием­ник от холодильника и подносят к концу холодильника индикаторную бумажку. Если аммиак отогнан полностью, индикаторная бумажка показы­вает нейтральную или слабокислую среду.

13. Содержимое приемника титруют 0,1 н раствором гидроксида нат­рия из бюретки до изменения цвета индикатора на зеленый.

14. Определяют содержание общего азота по формуле

 

[%], (3)

 

где а − объем 0,1 н серной кислоты, содержащейся в приемнике, мл (а=15 мл);

б − количество 0,1 н раствора гидроксида натрия, израсходован­ное на тит-

рование серной кислоты, оставшейся в приемнике, мл;

К₁, К₂ − поправочные коэффициенты на титр (К₁, К₂=1);

0,0014 − количество азота, связанное 1 мл 0,1 н раствора серной кислоты, г;

100 − множитель перевода в проценты;

Н − навеска исследуемого образца, г.

 

Контрольные вопросы

1. В чем состоит принцип метода определения белка по Кьельдалю?

2. Назовите этапы количественного определения азота методом Кьельдаля.

3. Для чего проводится минерализация азотосодержащих органиче­ских соединений? Какие соединения при этом образуются?

4. Охарактеризуйте устройство и принцип работы установки для отгонки аммиака.

5. Как по количеству азота можно рассчитать содержание белка в биологических объектах?

 

Реактивы и оборудование

1. Сыворотка крови или мышечная ткань. 2. Концентрированная серная кислота. 3. Кристаллический сульфат меди. 4. Кристалличес­кий сульфат калия. 5. 0,1 н серная кислота. 6. Индикатор Таширо: основной раствор - насыщенный раствор метилового красного; 0,1 %-й спиртовой раствор метилового синего; рабочий раствор - к 80 мл ос­новного раствора прибавляют 20 мл 1 %-го спиртового раствора метило­вого синего и 2 объема воды. В кислой среде отмечается фиолетовый, в щелочной - зеленый цвет. 7. 30 %-й раствор гидроксида натрия. 8. 0,1 н раствор гидроксида натрия. 9. Колба Кьельдаля на 100 или 200 мл. 10. Колба плоскодонная на 200 мл. 11. Пипетка на 1 мл. 12. Цилиндр на 10 мл. 13. Бюретки, градуированные на 25 мл. 14. Установка для отгонки аммиака.